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冻干重组人三突变型HIF-1α腺病毒生物学效应考察: 2011年; 目的研究冻干对重组人三突变型HIF-1α腺病毒(Ad-HIF-1α-564/402/803)生物学效应的影响。方法将前期构建的Ad-HIF-1α-564/402/803在HEK293A细胞中进行扩增,用氯化铯浓度梯度离心法进行腺病毒纯化,X-Gal染色法测定重组腺病毒转染效率,在适宜的条件下制成冻干剂。采用MTS试剂盒观察冻干前后Ad-HIF-1α-564/402/803对hMVECs增殖的影响。分别在冻干前、冻干后1 d、6月、12月四个时间点提取病毒DNA,进行PCR及PCR产物测序鉴定重组人三突变型HIF-1α腺病毒基因;并在4个时间点以Ad-HIF-1α-564/402/803转染hMVECs,提取蛋白进行western blot检测HIF-1α蛋白的表达。结果 X-gal染色显示MOI为100pfu/cell时,转染效率趋于稳定。冻干前后重组人三突变型HIF-1α腺病毒对hMVECs增殖影响无显著差异(P>0.05)。经PCR及基因测序鉴定,在四个时间点,腺病毒所携带的目的基因信息无丢失或突变,HIF-1α蛋白表达无差异(P>0.05)。结论冻干能够长期保持重组人三突变型HIF-1α腺病毒的高生物活性。; 陶宇王月刚魏旋刘城陈冬冬吴平生; 关键词：HIF-1Α 重组腺病毒冷冻干燥生物学活性

重组腺病毒三突变型低氧诱导因子-1α对血管新生的影响被引量：5: 2010年; 目的研究重组腺病毒三突变型低氧诱导因子-1α(Ad-HIF-1α-Ala564-Ala402-Ala803,简称Ad-HIF-1α-564/402/803)对体外血管新生的影响。方法将前期构建的Ad-HIF-1α-564/402/803在HEK293A细胞中进行扩增,用氯化铯浓度梯度离心法进行腺病毒纯化,终点稀释法测定病毒滴度,提取病毒DNA,进行PCR及PCR产物测序鉴定三突变型HIF-1α基因;X-Gal染色法测定重组腺病毒转染效率;Ad-HIF-1α-564/402/803、Ad-HIF-1αnature、Ad-Null分别转染hMVECs后,观察hMVECs在Matrigel上毛细血管管腔样结构的形成情况;Ad-HIF-1α-564/402/803、Ad-HIF-1αnature、Ad-Null和PBS分别转染鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)模型后,利用Image Pro Plus6.0软件收集数据并计算各组CAM血管面积比。结果经PCR及基因测序鉴定,扩增纯化后的腺病毒所携带的目的基因信息无丢失或变异,病毒滴度达1011～1012PFU/ml;X-gal染色显示MOI为100pfu/cell时,转染效率趋于稳定;Ad-HIF-1α-564/402/803转染hMVECs后Matrigel上的管腔数目显著多于Ad-HIF-1α-nature组、Ad-Null及对照组;基因转染CAM72h后,Ad-HIF-1α-564/402/803组CAM上微小血管数目较Ad-HIF-1α-nature组、Ad-Null组、PBS组明显增多;Ad-HIF-1α-564/402/803组血管面积比与Ad-HIF-1α-nature组、Ad-Null组、PBS组相比,差异有统计学意义(P值分别为0.01、0.000、0.000)。结论Ad-HIF-1α-564/402/803能明显促进hMVECs毛细血管管腔样结构的形成,同时可以促进CAM模型上微小血管新生,证实了Ad-HIF-1α-564/402/803在常氧情况下对血管新生有一定的促进作用。; 魏璇陶宇裴静娴李明琰陈建威刘城吴平生; 关键词：低氧诱导因子-1Α 重组腺病毒血管新生鸡胚绒毛尿囊膜

短暂性心肌缺血后再灌注心脏收缩功能随时间的变化研究被引量：3: 2011年; 目的应用速度向量成像(VVI)技术和心导管探讨不同时间短暂性心肌缺血后再灌注心脏局部和整体收缩功能随时间的变化规律。方法将20只wistar大鼠随机分为4组(假手术组和3个心肌缺血/再灌注组),通过调节阻断大鼠冠脉前降支时间制作不同缺血时间(5、10和15 min)的心肌缺血/再灌注(MI/R)模型,在冠脉阻断前、缺血结束时和再灌注(1～240 min)时取左室短轴乳头肌切面进行VVI分析,测定收缩期峰值应变(Ssys),并应用心导管测量相应时间的左室内收缩压(LVSP)和左室内压力上升最大速率(+dP/dt)。结果在缺血结束时3个MI/R组大鼠的LVSP和+dP/dt与冠脉阻断前比较明显减小(P<0.05),但在再灌注后所有MI/R组的LVSP和+dP/dt即可恢复。所有MI/R组大鼠在缺血结束时缺血区心肌的Ssys和冠脉阻断前比较,明显减小(P<0.05);在心肌再灌注1 min时,缺血5 min组大鼠缺血区心肌的Ssys迅速恢复,缺血10 min组的大鼠缺血区心肌的异常Ssys再灌注120min时恢复正常;而缺血15 min组的大鼠缺血区心肌的异常Ssys到再灌注240 min时能恢复正常。假手术组大鼠的LVSP、+dP/dt和Ssys在实验前后均无明显变化。结论 10～15 min的短暂性心肌缺血在再灌注后有较长时间的局部收缩功能异常,可作为心肌缺血的记忆指标用于临床诊断。; 陈冬冬刘俭廖禹林陶宇伍巍兰袁野吴平生宾建平; 关键词：心肌缺血心肌再灌注速度向量成像心脏收缩

对比超声对低氧诱导因子-1α促兔缺血后肢血管新生的评价: 2010年; 目的探讨应用对比超声(contrast enhanced ultrasound,CEU)评价低氧诱导因子-1α(hypoxia-in-ducible factor-1α,HIF-1α)促兔急性缺血后肢血管新生作用的可行性。方法18只新西兰大白兔高位节扎、离断左侧股动脉及其分支建立急性后肢缺血模型,随机分成3组,生理盐水组(NS组,术后即刻肌肉注射生理盐水0.5mL)、腺病毒空载体组(Ad-blank组,腺病毒空载体2×1010PFU溶于0.5mL生理盐水中肌肉注射)、腺病毒HIF-1α组(Ad-HIF-1α组,腺病毒介导的HIF-1α2×1010PFU溶于0.5mL生理盐水中肌肉注射),每组6只。各组术后即刻及术后14d、28d对兔后肢进行CEU及彩色多普勒血流显像(colordoppler flow imaging,CDFI)检查,第28天处死动物行病理切片行CD31免疫组化染色。结果CEU与CDFI、免疫组化检查结果一致,均显示:Ad-HIF-1α组缺血后肢血管新生优于NS组和Ad-Blank组(P<0.05);CEU与CDFI检查结果相关性良好(r=0.789,P=0.000),术后28dCEU与免疫组化微血管密度所得结果相关性良好(r=0.866,P=0.000)。结论CEU检查可对兔缺血后肢血流灌注进行定量分析,反映血管新生情况,与CDFI、免疫组化检查结论一致,相关性良好。; 李明琰陈建威张新建崔凯谢佳佳陶宇吴平生; 关键词：对比超声血流灌注血管新生

促血管新生治疗的现状与展望被引量：3: 2010年; 目前,冠状动脉疾病(coronary artery disease, CAD)和外周动脉疾病(peripheral arterial disease, PAD)的治疗在药物、经皮介入及外科手术方面均取得了重大进展,但仍然有一部分患者需要探索新的治疗手段或者治疗策略。; 吴平生刘城陶宇; 关键词：促血管新生安慰剂冠状动脉疾病

冻干重组人三突变型低氧诱导因子-1α腺病毒的制备: 2011年; 目的:研制冻干重组人三突变型低氧诱导因子-1α(HIF-1α)腺病毒。方法:将重组人三突变型HIF-1α腺病毒与不同配比的保护剂按适当比例混合,进行冻干,根据冻干后外观、病毒滴度测定、热稳定性试验、PCR、基因测序等结果,筛选冻干保护剂并评价冻干品质量。结果:冻干腺病毒所携带的目的基因信息无丢失或变异;以10%海藻糖、0.5%明胶、3%山梨醇等成分配制的保护剂作用较好,冻干后腺病毒感染性滴度下降0.33LgPFU/mL;37℃放置3周,滴度下降0.8LgPFU/mL。结论:以合适的保护剂制备冻干重组人三突变型HIF-1α腺病毒能达到较满意的效果。; 陶宇杨丽魏旋李明琰陈建威吴平生; 关键词：缺氧诱导因子1 重组腺病毒冷冻干燥

短暂性缺血心肌局部收缩和扭转功能异常记忆的对比研究: 陈冬冬廖禹林陶宇刘伊丽吴平生宾建平

高血压治疗目标的变迁与思考被引量：4: 2010年; 1高血压患者应当实施降压联合抗动脉粥样硬化的治疗既往的实践证明：单纯降压治疗可以比较好地解决原发性高血压（高血压）导致的心力衰竭和脑卒中,特别是出血性脑卒中;单纯降压治疗可以减少部分冠状动脉粥样硬化性心脏病（冠心病）事件,; 吴平生陶宇; 关键词：高血压动脉粥样硬化冠状动脉疾病糖尿病

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陶宇

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