魏竹波
- 作品数：12 被引量：33H指数：4
- 供职机构：四川大学生命科学学院生物资源与生态环境教育部重点实验室更多>>
- 发文基金：国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>
- 小鼠对猪囊虫抗原基因TS76的免疫应答被引量：3
- 2002年
- 将猪囊虫抗原基因 TS76的真核表达型质粒 VTS76单独或与 p UC18联合肌肉免疫注射于 BAL B/ c小鼠 ,以MTT比色法检测小鼠脾淋巴细胞 Con A刺激的增殖反应及 IL - 2的诱生活性 ,EL ISA方法检测免疫小鼠 Ig G总量和特异性抗体水平 ,常规法检测外周血免疫细胞数量的动态变化。结果发现 ,VTS76免疫小鼠各项细胞和体液免疫应答反应指数均比空白对照组小鼠显著提高 ;联合免疫组小鼠的细胞免疫应答和体液免疫应答反应指数均比 VTS76小鼠提高。由此可见 ,以 VTS76免疫小鼠可诱导其特异性细胞和体液免疫反应 ,而 p UC18又明显提高了 VTS76免疫小鼠的免疫应答水平 。
- 孟民杰高荣沈斌魏竹波唐漫书沈翼王克非刘世贵
- 关键词：囊虫病抗原基因免疫应答DNA疫苗小鼠
- 猪囊尾蚴抗原基因Ts11的克隆及其在大肠杆菌的表达被引量：5
- 2001年
- PCR扩增重组噬菌体λTs11克隆的cDNA片段 ,与pUC18连接 ,得到的重组子用以测序 ,并进行同源性比较分析 ;将该片段克隆到原核表达载体pGEX 1λT中 ,免疫印迹筛选得到能正确表达该片段的重组子 ;制备该重组子在大肠杆菌中的表达产物 ,进行浓度梯度SDS PAGE和West ernblotting分析。结果表明Ts11cDNA片段为 52 2bp ,编码含 139个氨基酸残基的多肽 ,在Gen Bank和EMBL数据库均未发现同源序列。重组质粒在大肠杆菌中表达的融合蛋白分子量为 4 1KD ,能与兔抗猪囊尾蚴囊液血清产生很强的免疫反应。这些结果证实分离到一个新的编码具较强免疫原性猪囊尾蚴抗原的cDNA克隆。
- 沈斌高荣孟民杰王克非魏竹波刘世贵
- 关键词：囊尾蚴克隆核酸疫苗
- 猪囊尾蚴抗原基因TS11的真核表达研究被引量：2
- 2003年
- 将猪囊尾蚴抗原基因 TS11亚克隆至 VR10 2 0真核表达载体中 ,用菌落原位杂交法筛选重组质粒 ,将其转染 COS7细胞 ,以 Northern Blotting检测插入片段的转录 ;用 EL ISA检查其翻译表达产物。结果表明 :VTS11在真核细胞中能够转录TS11基因的 m RNA;其蛋白表达产物能为兔抗猪囊虫高免血清所识别 ,在转染真核细胞 2 4 h后 ,即可检测到正确表达的猪囊尾蚴抗原蛋白。这些为深入研制猪囊虫的 DNA疫苗奠定了可靠的基础。
- 沈翼高荣沈斌武梅孟民杰唐漫书李江凌郑勇刘崑魏竹波王克非刘世贵
- 关键词：猪囊尾蚴抗原基因真核表达人畜共患病
- Eya1基因在小鼠眼发育过程中功能的初步研究
- 2003年
- 以Eya1基因的敲除突变小鼠为实验对象,初步研究了Eya1基因在小鼠眼发育中的作用.结果发现,Eya1基因功能完全丧失的敲除突变纯合子(Eya1-/-)胚胎的双侧眼皮均不能融合,27.3%的Eya1+/-胚胎单侧或双侧眼皮不能完全融合;而在Eya1基因有较强表达的其它主要结构如晶状体(lens)、色素视网膜(pigmentalretina)、眼神经(opticnerve)中均未发现异常.结果表明,Eya1为小鼠眼皮融合的决定性基因;而在眼的其它结构的发育中存在与Eya1具有互补作用的基因.
- 黄骊魏竹波刘世贵XU Pin-xian
- 关键词：基因敲除眼发育
- 猪带绦虫不同阶段及羊囊尾蚴蛋白质分析
- 2001年
- 利用浓度梯度 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳对猪囊尾蚴的囊液和虫体 ,猪带绦虫成虫的头颈节、成节、孕节 ,猪带绦虫的虫卵以及羊囊尾蚴的蛋白成分进行了对比分析。结果发现 :囊液、虫体、头颈节、成节、孕节、虫卵、羊囊尾蚴分别有35条 (15 .0～ 15 0 .4kd)、44条 (15 .0～ 133.7kd)、2 2条 (13.3～ 163.9kd)、19条 (13.3～ 90 .1kd)、19条 (13.3～ 90 .1kd)、30条 (13.3～ 99.4)和 38条 (15 .0～ 133.4kd)蛋白带 ;其中 15 .0 kd和 35 .5 kd两条共同抗原蛋白带 ,在猪带绦虫各阶段和羊囊尾蚴中含量最大的蛋白带同时也是阶段性的共同抗原蛋白带。这些结果为下一步的保护性抗原筛选奠定了基础。
- 魏竹波高荣沈斌孟民杰王克非付玉梅卓麟朱锦刘世贵
- 关键词：SDS-PAGE猪带绦虫蛋白质
- 猪囊虫TS21抗原DNA接种小鼠的免疫应答被引量：1
- 2003年
- 将 4 0只BALB/c小鼠随机分为 2组 ,A组以VR10 2 0免疫作为对照 ,B组以TS2 1抗原基因的真核表达型质粒VTS2 1免疫。用ELISA检测免疫小鼠IgG总量和特异性抗体水平 ,MTT比色法检测小鼠脾淋巴细胞伴刀豆蛋白A(ConA)刺激的增殖反应及IL 2的诱生活性 ,常规法检测外周血免疫细胞数量的动态变化。结果显示 ,VTS2 1免疫小鼠血清的IgG含量和特异性抗体效价显著高于对照组小鼠 ;免疫小鼠脾淋巴细胞ConA刺激增殖反应和IL 2诱生活性均比对照组小鼠显著增强 ;免疫小鼠的淋巴细胞、巨噬细胞等免疫细胞的数量也显著超过对照组。免疫小鼠的细胞和体液免疫反应显著增强 ,表明VTS2 1具有很强的免疫激活作用 。
- 巫雪艳高荣沈斌孟民杰沈翼李江凌武梅唐漫书郑勇刘崑魏竹波王克非刘世贵
- 关键词：小鼠免疫应答MTT比色法猪带绦虫囊虫
- 猪囊虫病快速免疫诊断技术的研究与应用被引量：5
- 1999年
- 用纯化的猪囊尾蚴囊液蛋白作诊断抗原，吸附于硝酸纤维素膜片上，经４０％ 乙醇固定，以斑点酶联免疫吸附法检测猪囊虫病抗体。结果发现：在一抗、二抗和底液中加入１０ｍ Ｍ ＥＤＴＡ，四甲基联苯胺作显色剂，１ｈ 内即可完成诊断，并显著提高免疫诊断的灵敏性和特异性（９９％ ）。据此研制的免疫诊断试剂盒，具有快速、灵敏、特异和简便的特点，４℃存放１ 年、室温８ 个月内均有效。应用该技术检测凉山州昭觉县囊虫病疫区７００头份猪血清，发现囊虫病阳性率达３０％ 。
- 高荣沈斌付玉梅魏竹波何绍江朱锦卓麟陈康刘世贵
- 关键词：囊虫病免疫诊断间接血凝试验
- 猪囊尾蚴cDNA表达文库构建及抗原基因筛选被引量：14
- 1999年
- 采用Ｑｕｉｃｋ Ｐｒｅｐ ｍ ＲＮＡ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ 试剂盒提取猪囊尾蚴ｍ ＲＮＡ；Ｔｉｍ ｅ－ Ｓａｖｅｒ ｃＤＮＡ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ试剂盒反转录合成双链ｃＤＮＡ，并在末端加上ＥｃｏＲＩ／ＮｏｔＩａｄａｐｔｏｒ，修饰后的ｃＤＮＡ 与λｇｔｌｌＥｃｏＲＩ臂连接，体外包装为λ噬菌体颗粒；感染Ｅ．ｃｏｌｉＹ１０９０ 构建成功库容量为２×１０６、重组率为８０％ 的ｃＤＮＡ表达文库。利用兔抗猪囊尾蚴虫体抗原和囊液抗原血清分别对一部分文库进行免疫印迹筛选，分别获得８ 个阳性克隆。提取阳性克隆ＤＮＡ，利用ＰＣＲ法从重组噬菌体ＤＮＡ中扩增出ｃＤＮＡ片段，长度自４００—９００ｂｐ。本文工作为研制猪囊尾蚴核酸疫苗打下了基础。
- 沈斌高荣朱锦魏竹波刘世贵
- 关键词：猪囊尾蚴CDNA表达文库抗原基因
- 猪带绦虫抗原基因TS76真核表达的研究被引量：2
- 2001年
- 将猪囊尾蚴抗原基因ＴＳ７６亚克隆至ＶＲ１０２０真核表达载体中，用菌落原位杂交法筛选重组质粒，将其转染Ｃｏｓ７细胞，用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ Ｂｌｏｔ鉴定插入片段的ｍＲＮＡ转录；用ＥＬＩＳＡ检测其表达产物．结果发现： ＶＴＳ７６在真核细胞中能够转录ＴＳ７６基因；表达产物被兔抗猪囊尾蚴高免血清所识别，在转染真核细胞后２４ｈ，即可检测到正确表达的猪囊尾蚴抗原蛋白．
- 孟民杰高荣沈斌魏竹波王克非朱锦付玉梅卓麟何绍江刘世贵
- 关键词：猪带绦虫抗原基因猪囊虫病DNA疫苗免疫机理
- 猪带绦虫抗原基因TS76的克隆及原核表达被引量：4
- 2002年
- 目的 测定和分析自猪囊尾蚴表达型cDNA文库中筛选出的cDNA克隆 (TS76 )的序列 ,并进行该片段的原核表达研究。方法 采用PCR扩增重组 (噬菌体 (TS76中的TS76cDNA片段 ,亚克隆至 pUC18,得到的重组子用于测序 ,并对测定结果进行分析及同源性比较 ;将TS76片段亚克隆到原核表达载体pGEX - 1(T中 ,免疫印迹方法筛选得到能正确表达TS76片段的重组子 pGTS76 ;制备pGTS76原核表达产物 ,进行浓度梯度SDS -PAGE和Westernblotting分析。 结果 TS76克隆含 5 16对核苷酸 ,编码含 83个氨基酸残基的多肽 ,与EMBL数据库中的猪囊虫免疫原性蛋白质mRNA有 383bp的同源区域。重组质粒在大肠杆菌中表达的融合蛋白分子量为 34KD ,能与抗猪囊尾蚴兔血清产生很强的免疫反应。结论 分离到一个编码具较强免疫原性猪囊尾蚴抗原的基因。
- 沈斌高荣孟民杰沈翼武梅李江凌龙章富魏竹波王克非朱锦付玉梅卓麟何绍江刘世贵
- 关键词：猪带绦虫抗原基因克隆原核表达核酸疫苗
