史成银 作品数:112 被引量:662 H指数:18 供职机构: 中国水产科学研究院黄海水产研究所 更多>> 发文基金: 国家重点基础研究发展计划 国家高技术研究发展计划 中央级公益性科研院所基本科研业务费专项 更多>> 相关领域: 农业科学 生物学 医药卫生 自动化与计算机技术 更多>>
用于PCR检测对虾皮下及造血组织坏死杆状病毒(HHNBV)的一种快速提取DNA方法 被引量:24 2000年 使用采样液 SEMP- Tris保存人工感染 HHNBV(WSSV的一个分离株 )的中国对虾组织 ,然后分别用酚抽提法、玻璃乳 (Glass Milk)回收法、硝酸纤维素膜结合法和煮沸 -乙醇沉淀法提取 DNA。应用 HHNBV引物对提取的 DNA进行 PCR扩增 ,使用琼脂糖凝胶电泳对扩增产物进行鉴定和检测。通过比较表明 ,煮沸 -乙醇沉淀法是一种最快速、简便的从采样液 SEMP- Tris保存的病虾组织中制备 PCR模板的方法 ,用于 PCR检测 王馗 史成银 黄倢关键词:对虾病毒 PCR检测 环介导等温扩增反应试剂混合物的保存方法 本发明公开一种环介导等温扩增反应试剂混合物的保存方法。该方法通过在环介导等温扩增反应试剂混合物中加入特定的干燥保护剂,然后将添加了干燥保护剂的环介导等温扩增反应试剂混合物在低于80℃的条件下进行真空干燥或快速风干,实现环... 张庆利 黄倢 史成银 杨冰 高强 梁艳文献传递 甲壳类病原的感染和药物筛选模型及其应用 本发明属于甲壳类病原防控技术领域,具体涉及一种甲壳类病原血卵涡鞭虫和肌孢虫的感染和药物筛选模型及其应用。本发明所述模型所用的动物为短身大眼蟹(Macrophthalmus abbreviatus)和天津厚蟹(Helice... 谢国驷 黄倢 刘正敏 杨柳鑫 毕竞男 万晓媛 王海亮 史成银 张庆利中国大菱鲆虹彩病毒(TRBIV)PCR检测方法的建立及其应用 被引量:4 2008年 大菱鲆红体病虹彩病毒(turbot reddish body iridovirus,TRBIV)是中国工厂化养殖大菱鲆的主要病毒性病原之一。本研究提取了该病毒DNA,依据其主要衣壳蛋白基因序列设计了PCR引物,优化了PCR反应参数,建立了TRBIV的PCR检测方法,测试了该方法的特异性和灵敏度,并应用该方法开展了TRBIV的流行情况调查及研究了大菱鲆的外观症状(红体)与TRBIV感染的关系。结果显示,本研究建立的TRBIVPCR检测方法可以从相当于100ng病鱼组织中或103数量级的病毒粒子中检出TRBIV,也可以在不杀死被测鱼的情况下,仅从鱼体中抽取少量血液即可在1天的时间内完成大量样品的TRBIV检测,但不能从健康大菱鲆脾组织和患淋巴囊肿牙鲆的囊肿组织中扩增出任何产物,说明该方法具有很高的灵敏性和特异性;在所调查的山东半岛5家大菱鲆养殖场的19尾大菱鲆中,7尾为TRBIV阳性或弱阳性;具有"红体"症状的大菱鲆应当划分为"病毒性红体病"、"细菌性红体病"和"非病原性红体症"3种不同的类型。本研究为TRBIV的流行情况和传播途径调查、疾病的快速诊断和控制提供了技术手段;调查结果显示TRBIV已遍布山东半岛沿海地区的大菱鲆主产区,在地域上相距较远的多个大菱鲆养殖场流行,今后需要密切关注该病毒的传播和流行。 史成银 黄倢 杨冰 刘莉关键词:大菱鲆 虹彩病毒 PCR 对虾流行病病原检测试剂盒及其检测方法 本发明是对虾流行病病原检测试剂盒及其检测方法。该盒内包含有:研膜液等二十二种试剂和材料设计的。WSSV病原检测方法为:(1′)泡膜_(1)采样研磨→(2)点样→(3)交联→(4)预杂交→(5)杂交→(6)加入抗体→(7)... 史成银 杨冰 黄捷 宋晓玲 杨丛海文献传递 哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)ML01株胞外产物及分泌性蛋白的分离与特性分析 被引量:5 2017年 本研究以引起珍珠龙胆石斑鱼[Epinephelus fuscoguttatus(♀)?Epinephelus lanceolatus(♂)]幼鱼"皮肤溃疡病"的哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)ML01株为研究对象,采用平板膜覆盖技术和柱层析技术,分离、纯化了ML01株的胞外产物及分泌性蛋白。应用毒性试验、质谱分析与分子克隆技术,对纯化的胞外产物和3种主要的分泌性蛋白进行了特性分析与鉴定。结果显示,哈维氏弧菌ML01株的胞外产物(Extracellular products,ECPs)具有酯酶、明胶酶、淀粉酶、酪蛋白酶活性,无脲酶活性。ECPs对羊红细胞无溶血性,对斑马鱼(Danio rerio)的半数致死剂量(LD50)为19.55μg/g鱼体重。从ML01株中分离到3种主要的分泌蛋白P42、P36、P31,其分子量分别为42、36、31 k Da。经质谱鉴定和分析,这3种蛋白分别为哈维氏弧菌的外膜蛋白Omp U和Omp N,以及一种功能未知的蛋白。利用同源克隆,成功地从ML01株基因组中扩增到了P42、P36、P31的基因。序列测定和比对结果显示,ML01株的这3个基因与哈维氏弧菌ATCC 33843(Gen Bank CP009467)的相应基因相比,其开放阅读框(Open reading frame,ORF)序列的相似性分别为97.08%、100%、99.67%,其编码的多肽序列的相似性分别为99.71%、100%和99.93%。本研究对进一步分析哈维氏弧菌ML01株的致病机理、研发该菌的亚单位疫苗具有重要的参考价值。 沈桂明 李晨 史成银 贾丹 范超 谢国驷 付泉洁关键词:哈维氏弧菌 胞外产物 质谱分析 基因克隆 卵黄抗体及其在水产养殖病害防治中的研究进展 2023年 卵黄抗体(IgY)是一种存在于卵黄中的免疫球蛋白,具有性质稳定、安全高效、绿色环保、不产生耐药性等特点,在水产养殖病害防治领域具有广泛应用前景。文章介绍了卵黄抗体的分子结构、理化性质和作用机制以及卵黄抗体在水产动物疾病防治中的研究现状和应用前景,以期为今后卵黄抗体在水产养殖的基础研究和应用提供参考。 于子健 杨冰 谢国驷 史成银关键词:卵黄抗体 水产养殖 病害防治 斑石鲷卵鞭虫病病原的分子鉴定与系统发育分析 被引量:1 2017年 [目的]对严重危害斑石鲷鱼苗的卵鞭虫病病原——渤海分离株(Bohai-1407 isolate)进行分子生物学鉴定和系统发育分析。[方法]设计4对特异性引物,应用PCR方法克隆并测定渤海分离株的核糖体DNA(rDNA)序列;应用Blast比对分析渤海分离株rDNA的结构;依据rDNA序列,分别构建10种胚沟科鞭毛虫和19株眼点淀粉卵涡鞭虫分离株/克隆的系统发育树,分析渤海分离株的系统分类地位。[结果]扩增出了渤海分离株的4个DNA片段,拼接出长度为6 530 bp的r DNA操纵子序列;该操纵子由74 bp的部分外转录间隔区(ETS)、1 813 bp的小亚基(SSU)、352 bp的内转录间隔区1(ITS1)、159 bp的5.8S、698 bp的内转录间隔区2(ITS2)和3 388 bp的大亚基(LSU)串联而成,3'端还有46 bp的部分非转录间隔区(NTS);渤海分离株与眼点淀粉卵涡鞭虫宁德株(Ningde1412)的rDNA序列相似性高达99.5%;依据SSU序列建立了包含10种胚沟科鞭毛虫的系统发育树,渤海分离株与世界各地分离到的眼点淀粉卵涡鞭虫聚类在一起,将其鉴定为眼点淀粉卵涡鞭虫;依据ITS1和ITS2序列建立了包含19株眼点淀粉卵涡鞭虫的2个系统发育树,渤海分离株与从美国弗罗里达盐水池塘中分离到的墨西哥湾分离株FL_21(DQ490260.1)总是聚类在一起。[结论]斑石鲷卵鞭虫病的病原——渤海分离株可以鉴定为眼点淀粉卵涡鞭虫,该分离株与墨西哥湾分离株FL_21的亲缘关系最近。 付泉洁 范超 谢国驷 叶仕根 史成银关键词:核糖体DNA 分子鉴定 系统发育分析 养殖大菱鲆主要疾病及防治技术 以名贵鱼种大菱鲆为主体的鲆鲽鱼类养殖,迅速辐射到整个北方沿海和南方部分沿海省市,使环渤海和黄海沿岸形成了若干鲆鲽类养殖产业带,年产6万吨,直接经济产值约30多亿元。随着产业的规模化发展,病害问题成为产业稳定发展的主要限制... 王印庚 张正 秦蕾 史成银 陈洁君 杨少丽 马爱军关键词:大菱鲆 疾病分类 流行病学 斑点叉尾鮰病毒现场快速检测试剂盒及检测方法 本发明涉及一种斑点叉尾鮰病毒(CCV)现场快速检测试剂盒及检测方法,试剂盒中包含有序列为SEQ ID NO:1-4的引物。本发明的试剂盒使得CCV的检测能够快速有序地进行,实现了检测过程的程序化和标准化,使得操作规范、不... 张庆利 黄倢 阎毅 史成银 王勤涛 刘莉文献传递