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张庆利: 作品数：112 被引量：137H指数：8; 供职机构：中国水产科学研究院黄海水产研究所更多>>; 发文基金：中央级公益性科研院所基本科研业务费专项国家现代农业产业技术体系建设项目中国水产科学研究院基本科研业务费专项基金更多>>; 相关领域：农业科学医药卫生生物学经济管理更多>>

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FTA卡保存对虾传染性皮下和造血组织坏死病毒DNA洗脱方法的优化被引量：1: 2024年; 传染性皮下和造血组织坏死病毒(infectious hypodermal and haematopoietic necrosis virus,IHHNV)是危害虾类健康养殖的重要病原,为寻找一种快捷保存及分离IHHNV DNA的方法,为后续研究提供完整的核酸材料,选用FTA(flinders technology associates)卡为保存介质,以FTA纯化试剂、TE(Tris-EDTA)缓冲液及去离子水为基础洗脱液,设计7种FTA卡黏附DNA洗脱方法,通过荧光定量PCR检测方法检验不同核酸洗脱分离效果及最低的点膜核酸量。结果显示,于4 mm2的FTA卡上,点样体积为2.5μL,用洗脱液作为模板时,最低点膜核酸浓度需要1.47×104copies/μL以上,可获得最佳的检测灵敏度和100%检出率的洗膜方法为50μL TE缓冲液于95℃下浸洗5 min;用膜片做模板,点膜核酸浓度需要1.82×103copies/μL以上,室温(20~25℃)条件下,用FTA纯化试剂洗脱3次,再用TE缓冲液洗脱2次,洗脱时间均为5 min,可获得最佳的检测灵敏度和100%的准确度。以FTA卡保存对虾白斑综合征病毒(white spot syndrome virus,WSSV)、虾肝肠胞虫(Enterocytozoon hepatopenaei,EHP)、虾十足目虹彩病毒1(Decapod iridescent virus 1,DIV1)、偷死野田村病毒(covert mortality noda virus,CMNV)、致急性肝胰腺坏死副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VpAHPND)核酸,测试所建洗脱方法的效果,证实了该方法对其他虾类病原核酸的洗脱具有通用性。该研究给出了FTA卡保存和洗脱IHHNV DNA的适用性方案,为野外对虾样品采集、病毒核酸样品跨区域传递的保存和运输条件提供了科学数据。; 连新宇王秀华李晨张庆利苟紫玥吕若萱杨冰; 关键词：IHHNV

基于石蜡的核酸等温扩增反应试剂保存方法及反应试剂: 本发明涉及一种基于石蜡的核酸等温扩增反应试剂保存方法及反应试剂，所述的保存方法是将用于核酸等温扩增的生物酶用石蜡覆盖或包埋后与核酸等温扩增反应液中的除生物酶外的一种或几种组分隔离来实现核酸等温扩增试剂的常温长期保存的。采...; 张庆利黄倢李美霞杨冰刘庆慧李晨; 文献传递

基于多孔材料的多聚酶链反应试剂保存方法及反应试剂: 本发明涉及一种基于多孔材料的多聚酶链反应试剂的保存方法及试剂，所述的保存方法是在一种或几种多聚酶链反应反应液的组分中添加多孔材料进行保存。本发明方法处理后的多聚酶链反应液的组分可常温贮存和运输，使用时无需特殊处理，直接使...; 张庆利黄倢李美霞杨冰王崇明许华; 文献传递

一种甲壳动物黄病毒及其检测方法和应用: 本发明提供了一种甲壳动物黄病毒及其检测方法和应用。所述传染性早熟病毒（Infectious precocity flavivirus），属于传染性早熟病毒，保藏编号为CCTCC No.V201870。形态呈球形，直径40...; 董宣黄倢王国浩曹志李晨张庆利史卫峰胡弢; 文献传递

一种可同步检测7种鱼类病毒的多重PCR方法: 本发明提供一种可同步检测7种鱼类病毒的多重PCR方法，使用的多重PCR的引物组，其引物的序列分别为SEQ？ID？NO:1-36，本发明采用特殊的多重PCR技术，设计、筛选了9套共36条特异性引物，建立了单管、同步扩增鱼类...; 史成银王胜强耿伟光黄倢张庆利杨冰李晨刘莉李晋粟子丹; 文献传递

疑患EMS/AHPNS对虾中检出黄头病毒的一种新株型被引量：8: 2014年; 对2012—2013年从河北、福建和广东3个对虾养殖场采集的12份发生疑似早期死亡综合征/急性肝胰腺坏死综合征(EMS/AHPNS)的样品,采用组织病理学方法、套式RT-PCR检测方法以及快速灵敏检测试剂盒进行了检测。三地来源的养殖对虾样品症状均表现为肝胰腺颜色变淡,部分出现萎缩,空肠空胃,腹节肌肉略微白浊;组织病理切片结果表明,患病对虾肝胰腺血细胞浸润,肝胰腺盲管上皮细胞脱落,继发性细菌感染,淋巴器官和血淋巴细胞内存在核固缩、破裂和细胞质包涵体。按世界动物卫生组织(OIE)手册的套式RT-PCR方法检测,结果显示,黄头病毒(Yellow head virus,YHV)目的产物的阳性样品检出率为66.7%,该方法对这些样品的灵敏度可能很低。目的产物测序后经NCBI Blast,与已报道的YHV相似性为76.5%—89%;系统发育树显示这3个来源的样品位于同一个分支,与已知的YHV/鳃联病毒(gill-associated virus,GAV)株均不相同,其亲缘关系与YHV较近,而与GAV较远。用新研发的YHV快速高灵敏检测试剂盒检测,结果表明,所有样品均为YHV强阳性。以上表明患AHPNS的养殖对虾中存在一种YHV的新株型的感染,这也是我国首次检测到YHV的感染。; 刘群黄倢杨昊霖杨冰刘笋王海亮王勤涛刘飞张庆利; 关键词：新株型 NESTED-PCR

一种反转录多重套式PCR检测引物: 本发明属于基因型检测技术领域，公开了一种反转录多重套式PCR检测引物，引物包括两条外引物和三条内引物，外引物扩增YHV‑1和YHV‑8的目的基因，产生目的条带；三条内引物搭配分别特异性的扩增YHV‑1和YHV‑8，产生两...; 邱亮黄倢郭晓萌张庆利万晓媛杨冰王秀华; 文献传递

检测多种对虾病原的基因芯片及其检测方法: 本发明涉及一种检测多种对虾病原的基因芯片及其检测方法。基因芯片的构建是将质控系统的探针和18种对虾病原的探针点在同一固相载体尼龙膜上制成。18种对虾病原的探针包括：用于检测15种病毒的探针，用于检测镰刀菌、杀鱼丝囊霉菌、...; 黄倢荆晓艳杨冰张庆利闫丽王秀华张宝存宋晓玲史成银刘莉

虾类偷死野田村病毒现场快速检测引物组及试剂盒: 本发明涉及一种对虾偷死野田村病毒的现场快速检测引物组及高灵敏检测试剂盒。本发明的引物组包括6条引物，本发明的高灵敏检测试剂盒包括：采样管、内装蒸馏水的漂洗管、内装TE缓冲液的核酸变性管、内装扩增反应液和染料的扩增检测管、...; 张庆利黄倢杨昊霖刘爽; 文献传递

一种评价臭氧破坏鱼类神经坏死病毒核酸链效果的方法: 本发明提供一种评价臭氧破坏鱼类神经坏死病毒核酸链效果的方法，即在鱼类神经坏死病毒核酸链3′末端设计反转录引物P，在5′末端设计PCR引物对F/R。臭氧处理鱼类神经坏死病毒后，病毒核酸链3′端断裂则不能启动反转录，5′端或...; 史成银黄倢李晋张庆利杨冰刘莉; 文献传递

张庆利

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