孙跃女
- 作品数：8 被引量：27H指数：4
- 供职机构：中南大学湘雅三医院更多>>
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- 哺乳类雷帕霉素靶蛋白信号通路对柯萨奇病毒B3诱导的心肌成纤维细胞Smad3蛋白和Ⅰ型胶原表达调控的实验研究被引量：4
- 2008年
- 目的探讨哺乳类雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路对柯萨奇病毒B3（CVB3）诱导的心肌成纤维细胞Smad3蛋白（Smad3）和Ⅰ型胶原表达的调控作用。方法CVB3感染原代培养的SD鼠心肌成纤维细胞，用mTOR的抑制剂—雷帕霉素阻断mTOR信号通路，采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和Westernblot方法检测细胞Smad3和Ⅰ型胶原表达。结果（1）雷帕霉素干预心肌成纤维细胞48h，RT—PCR检测mTOR／β-肌动蛋白（actin）光密度值分别为1nmol/L组0．381±0．022、10nmol/L组0．282±0．014、100nmol/L组0．263±0．012，均低于对照组1．45±0．04，10nmol/L组和100nmol/L组低于1nmol/L组，差异均有统计学意义（P均〈0．05）。10nmol/L雷帕霉素干预心肌成纤维细胞0h（对照组）、24h．48h、72h，其mTOR／β-actin光密度值分别为0．341±0．022、0．203±0．021、0．163±0．022、0．144±0．013，光密度值随雷帕霉素干预时间的延长而降低（P〈0．05）。（2）RT-PCR和Westernblot测得对照组、CVB3组、CVB3＋雷帕霉素组心肌成纤维细胞Smad3／β-actin光密度值分别为0．63±0．06、1．18±0．03、0．77±0．08，Smad3／β-actin灰度值分别为0．89±0．07、2．27±0．13、0．131±0．013。RT—PCR测得上述各组Ⅰ型胶原／B—actin光密度值分别为1．13±0．06、1．303±0．012、0．82±0．03。以上结果显示CVB3组光密度值／灰度值高于对照组，CVB3＋雷帕霉素组低于CVB3组，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论雷帕霉素抑制CVB3诱导的心肌成纤维细胞Smad3和Ⅰ型胶原表达，提示mTOR信号通路可能通过调控Smad及Ⅰ型胶原表达，在CVB3诱导的心肌纤维化过程中起重要作用。
- 陈淳媛孙跃女杨作成蔡姿丽
- 关键词：心肌疾病肠道病毒属
- 雷帕霉素对柯萨奇病毒B3诱导的心肌成纤维细胞eIF-4E表达的影响被引量：2
- 2007年
- 目的探讨雷帕霉素对柯萨奇病毒B3诱导的心肌成纤维细胞eIF-4E表达的影响,寻找病毒性心肌炎的药物治疗靶点。方法选用MOI为0.5 PFU/cell的柯萨奇病毒B3感染心肌成纤维细胞,利用细胞形态及RT-PCR法检测细胞内柯萨奇病毒B3 mRNA表达,确定柯萨奇病毒B3成功感染心肌成纤维细胞。以10nM雷帕霉素干预,采用RT-PCR及Western blot检测对照组、病毒组(MOI为0.5 PFU/cell)、雷帕霉素组及病毒+雷帕霉素组eIF-4E表达。结果MOI为0.5 PFU/cell的柯萨奇病毒B3感染心肌成纤维细胞,透射电镜下可见细胞形态改变,胞浆内可见病毒颗粒。RT-PCR结果显示:感染后第1天、第2天、第3天及传代后第2天细胞有病毒mRNA表达。RT-PCR检测上述4组的eIF-4E/β-actin光密度比值分别为:0.73±0.07,0.87±0.03,0.32±0.03,0.56±0.04;Western blot灰度值分别为:0.79±0.09,1.35±0.12,0.55±0.04,0.62±0.07;RT-PCR及Western blot结果显示:病毒组eIF-4E表达高于对照组,雷帕霉素组和病毒+雷帕霉素组低于对照组及病毒组(均P<0.05)。结论柯萨奇病毒B3可感染心肌成纤维细胞,并使eIF-4E表达增加,雷帕霉素可抑制其表达,提示心肌成纤维细胞可能通过mTOR/eIF-4E信号通路参与病毒性心肌炎的发病机制,雷帕霉素对病毒性心肌炎有潜在的治疗作用。
- 陈淳媛孙跃女杨作成龙燕琼
- 关键词：雷帕霉素柯萨奇B3病毒心肌成纤维细胞EIF-4E
- TGF-β1介导新生大鼠心肌成纤维细胞Ⅰ型和Ⅳ型胶原合成的研究(英文)被引量：2
- 2007年
- 目的:观察TGF-β1对原代培养的新生大鼠心肌成型与Ⅳ胶原表达的影响。方法:取出生3~7d的SD大鼠心脏,利用酶消化法结合差速贴壁体外培养心肌成纤维细胞;分别用不同浓度的TGF-β1(TGF-β1=10 ng/mL、1ng/mL、0 ng/mL)干预心肌成纤维细胞,分别于干预后5h、24h,采用RT-PCR检测I型胶原和Ⅳ型胶原的表达。结果:1.用0ng/mL(对照组),1ng/mL和10ng/mL的TGF-β1干预心肌成纤维细胞5h,RT-PCR检测I型胶原/β-actin光密度值分别为0.61±0.02,0.73±0.03和0.86±0.04,光密度值随着TGF-β1浓度的增加而增加,各组比较,差异有显著性(P<0.01);干预心肌成纤维细胞24h后,RT-PCR检测I型胶原/β-actin光密度值分别为0.65±.03,0.91±0.02和0.98±0.02,光密度值随着TGF-β1浓度的增加而增加,各组比较,差异有显著性(P<0.01)。2.用0 ng/mL(对照组),1ng/mL and 10ng/mL的TGF-β1干预心肌成纤维细胞5h,RT-PCR检测Ⅳ型胶原/β-actin光密度值分别为0.58±0.06,0.71±0.02,0.87±0.02,光密度值随着TGF-β1浓度的增加而增加,各组比较,差异有显著性(P<0.01);干预心肌成纤维细胞24h后,RT-PCR检测Ⅳ型胶原/β-actin光密度值分别为0.62±0.01,0.83±0.05,0.96±0.02,光密度值随着TGFβ1浓度的增加而增加,各组比较,差异有显著性(P<0.01)。结论:TGFβ1能加强I型和Ⅳ型胶原的表达,在24小时内呈时间和剂量依赖性。
- Elifuraha Francis Mchomvu杨作成孙跃女李小明陈淳媛
- 关键词：转移生长因子Β1
- 新生大鼠心肌细胞原代培养被引量：5
- 2007年
- 目的探讨酶法分离新生大鼠心肌细胞过程中的各种影响因素,对Simpson经典方法进行改进,提高原代心肌细胞存活率及搏动率。方法采用低浓度的胰酶消化3～4次后,再用低浓度的Ⅱ型胶原酶消化一次,用短时间的2次差速贴壁法分离培养心肌细胞。结果在分离培养新生鼠心肌细胞过程中,胰酶和胶原酶合用,并改变差速贴壁时间,得到高存活率和高纯度的心肌细胞,细胞搏动率高,持续时间久。结论分离培养大鼠心肌细胞时,低浓度的胰酶和胶原酶合用,并用2次差速贴壁,可提高原代心肌培养的存活率和纯度,使细胞搏动良好。
- 陈淳媛孙跃女杨作成李小明
- 关键词：原代培养心肌细胞存活率新生鼠
- 西罗莫司对CVB3感染大鼠心肌成纤维细胞增殖及mTOR表达的影响被引量：7
- 2007年
- 目的:观察西罗莫司(又名雷帕霉素,Rap)对柯萨奇病毒B3(CVB3)感染的心肌成纤维细胞增殖及哺乳类雷帕霉素靶蛋白(mTOR)mRNA和蛋白表达的影响。方法:SD大鼠心肌成纤维细胞分对照组、CVB3组、Rap组及CVB3+Rap组,用重复感染率(MOI)为0.5噬斑形成单位(PFU)/cell的CVB3诱导心肌成纤维细胞,采用四氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,RT-PCR及Western Blot分别检测其mTOR mRNA表达及mTOR蛋白表达。结果:MTT法测得对照组、CVB3组、Rap组及CVB3+Rap组的D值分别为0.55±s 0.09、0.66±0.09,0.42±0.09、0.36±0.12,CVB3组高于对照组,Rap组和CVB3+Rap组均低于对照组及CVB3组(P<0.05)。用RT-PCR检测上述4组的mTOR mRNA表达,mTOR/β-actin光密度比值分别为0.25±0.09、0.87±0.15、0.19±0.04、0.22±0.06,CVB3组高于对照组(P<0.05),Rap组和CVB3+Rap组低于对照组及CVB3组(P<0.05)。Western Blot显示mTOR蛋白表达结果与RT- PCR结果相符。结论:Rap可抑制CVB3病毒诱导的大鼠心肌成纤维细胞增殖及mTOR表达,Rap抑制细胞增殖可能是通过mTOR信号途径起作用的。
- 陈淳媛孙跃女杨作成李小明
- 关键词：西罗莫司柯萨奇病毒感染成纤维细胞MTOR增殖
- CVB3对大鼠心肌成纤维细胞增殖及骨桥蛋白表达的影响
- 目的：观察柯萨奇B3病毒(Coxsackie virus B3，CVB3)对大鼠心肌成纤维细胞增殖和骨桥蛋白(osteopontin，OPN)表达的影响，探讨OPN在病毒性心肌炎的可能作用机制。
方法：取出生3...
- 孙跃女
- 关键词：柯萨奇B3病毒心肌成纤维细胞骨桥蛋白细胞增殖
- 文献传递
- 雷帕霉素对柯萨奇病毒B3诱导的大鼠心肌细胞mTOR和eIF-4E表达的调控作用被引量：11
- 2008年
- 目的:研究雷帕霉素对柯萨奇病毒B3(coxsackievirus B3,CVB3)诱导的心肌细胞哺乳类雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)和真核起始因子4E(eukaryotic initiation factor-4E,eIF-4E)表达的调控,探讨mTOR/eIF-4E信号传导在病毒性心肌炎(viral myocarditis,VM)的作用。方法:CVB3感染原代培养的SD大鼠心肌细胞建立病毒性心肌炎的细胞模型。根据细胞毒力实验筛选10 nmol/L的雷帕霉素干预CVB3感染的心肌细胞,采用RT-PCR和Western免疫印迹方法检测mTOR和eIF-4E mRNA表达及蛋白质水平。结果:CVB3诱导心肌细胞变性,雷帕霉素可减轻其变性;CVB3使大鼠心肌细胞的mTOR和eIF-4E mRNA和蛋白表达上调,与对照组比较,有统计学差异(P<0.05),雷帕霉素可使CVB3感染的心肌细胞mTOR和eIF-4E mRNA和蛋白表达明显下调,与CVB3组比较,有统计学差异(P<0.05)。结论:雷帕霉素能明显抑制CVB3感染的大鼠心肌细胞mTOR和eIF-4E表达,提示mTOR/eIF-4E信号传导在病毒性心肌炎中可能起重要作用。
- 陈淳媛孙跃女杨作成蔡姿丽杨敏
- 关键词：柯萨奇病毒B3心肌细胞
- 雷帕霉素对柯萨奇病毒B3诱导的大鼠心肌细胞Ⅰ型胶原表达的调控被引量：1
- 2009年
- 目的:研究雷帕霉素对柯萨奇病毒B3(coxsackievirus B3,CVB 3)诱导的大鼠心肌细胞Ⅰ型胶原表达的影响,探讨雷帕霉素治疗病毒性心肌炎的可能机制。方法:用CVB 3感染原代培养的SD大鼠心肌细胞,取浓度为10 nmol.L-1的雷帕霉素进行干预,采用RT-PCR和W estern B lot检测细胞Smad 3及Ⅰ型胶原表达水平。结果:正常心肌细胞未见Ⅰ型胶原表达,CVB 3诱导心肌细胞Smad 3和Ⅰ型胶原表达,雷帕霉素抑制其表达(P<0.05)。结论:心肌细胞在病毒性心肌炎(VM)时参与胶原调控,雷帕霉素通过Smad信号途径抑制Ⅰ型胶原表达。
- 陈淳媛杨敏蔡姿丽孙跃女杨作成
- 关键词：雷帕霉素柯萨奇病毒感染SMAD
