曹伟
- 作品数:7 被引量:4H指数:1
- 供职机构:中国医学科学院北京协和医学院基础医学院基础医学研究所更多>>
- 发文基金:国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域:医药卫生更多>>
- ULBPs剪切变体的鉴定与功能研究
- 目的:ULBP(又称为RAET1分子家族)是最近几年所发现的另一个NKG2D配体家族,它们在正常细胞不表达或表达很低,但细胞发生恶性转化或病毒感染后则能显著增强ULBP的表达,从而刺激CD8 T细胞和 NK细胞所介导的免...
- 曹伟郗雪艳马驰崔莲仙何维
- 文献传递
- 特异性CDR3区取代型γδTCR转染细胞的构建及生物学功能鉴定被引量:2
- 2008年
- 目的:建立特异性CDR3区取代型γδTCR转染细胞平台。方法:利用搭桥PCR的方法将已知的γδT细胞克隆DBS4.3特异性CDR3编码序列嵌入到γ9和δ2cDNA序列中,取代原有的CDR3区序列,获得的全长γ9和δ2链分别插入真核表达载体pREP7和pREP9中,共转染J.RT3-T3.5细胞,双压力抗生素筛选获得表达特异性γδTCR的转染细胞,通过ELISA和Re-altime PCR检测该转染细胞在接受抗原刺激后IL-2的分泌情况。结果:ELISA和Realtime PCR结果显示表达DBS4.3特异性γδTCR的转染细胞在DBS4.3特异性抗原仲丁胺和抗γδTCR抗体刺激作用下,活化分泌IL-2。结论:构建了特异性CDR3区取代型γδTCR转染细胞平台,为研究γδTCR识别抗原的机制奠定了基础。
- 郗雪艳曹伟崔莲仙何维
- 关键词:ΓΔT细胞抗原识别
- γδT细胞对ULBP3的识别机制研究
- 目的:ULBPs是一类主要组织相容性复合体MHC-Ⅰ类相关分子,位于染色体q24.2-q25.3上,氨基酸序列分析显示它们只包含α1和α2功能域,但没有α3功能域且不和β2m偶联。它们在正常细胞不表达或表达很低,但细胞发...
- 曹伟郗雪艳马驰崔莲仙何维
- 文献传递
- 抗RAET1G2单克隆抗体的研制和初步鉴定被引量:1
- 2010年
- 目的:制备鼠源抗RAET1G2单克隆抗体,并对其特异性进行鉴定。方法:以原核表达的RAET1G2蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,运用B淋巴细胞杂交瘤技术制备抗RAET1G2单克隆抗体;用免疫双扩散方法鉴定Ig亚类;Western blot鉴定单克隆抗体的特异性。结果:获得了4株可分泌特异性抗RAET1G2抗体的杂交瘤细胞株7A11、9C6、10F9和12F8,Ig亚类均为IgG1。结论:制备的杂交瘤细胞株能稳定分泌特异性的抗RAET1G2抗体,并且所分泌的单克隆抗体都能识别天然的RAET1G蛋白,为进一步研究游离性的RAETlG2分子与肿瘤进展的关系以及分析各种肿瘤细胞表面的RAET1G表达情况创造了条件。
- 郝志勇曹伟马驰崔莲仙何维
- 关键词:NKG2D单克隆抗体免疫荧光
- ULBPs原核表达、生物学功能鉴定以及单克隆抗体的制备和初步鉴定
- 目的:ULBPs是一类主要组织相容性复合体MHC-I类相关分子,位于染色体q24.2-q25.3上。氨基酸序列分析显示,它们只包含α1和α2功能域,但没有α3功能域且不和β2m偶联。其中,ULBP1-3是通过 GPI连接...
- 曹伟郝志勇郗雪艳孔燕马驰崔莲仙何维
- 文献传递
- ULBP4原核表达、生物学功能鉴定及其单克隆抗体的制备和初步鉴定被引量:1
- 2007年
- 目的:在大肠杆菌中表达ULBP4重组蛋白,并制备其特异性的单克隆抗体(mAb),为γδT细胞对ULBP4的识别机制研究奠定基础。方法:根据GenBank中ULBP4的基因序列设计相应的引物,用RT-PCR方法从HO-8910细胞中扩增得到ULBP4片段,构建重组原核表达质粒pET22b(+)/ULBP4(前225aa胞外段),在Rosetta-gamiTMB(DE3)大肠杆菌中获得表达且主要位于包含体中,经纯化透析复性后,分析其对NK细胞IFN-γ细胞因子分泌的影响。以ULBP4为抗原,免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞和Sp2/0骨髓瘤细胞常规融合,依次经HAT选择培养、间接ELISA法、克隆化培养、荧光免疫检测和流式细胞术以及Western blot筛选和鉴定抗ULBP4 mAb的杂交瘤细胞株。结果:构建了pET22b(+)/ULBP4(225aa)原核表达体系,并检测到重组蛋白的有效表达;纯化的重组蛋白在体外培养体系中可以刺激NK细胞IFN-γ细胞因子的分泌。此外,还获得了4株可稳定分泌抗人ULBP4 mAb的杂交瘤细胞株。结论:成功地构建并表达了具有生物活性的ULBP4,为γδT细胞的识别机制研究建立抗原制备平台,同时所制备的抗人ULBP4 mAb,为后续研究奠定了基础。
- 曹伟郝志勇郗雪艳孔燕马驰崔莲仙何维
- 关键词:NKG2DIFN-Γ单克隆抗体
- 一种经济简单的方法扩增Vγ9Vδ2T细胞
- 2007年
- 目的体外以仲丁胺刺激健康人外周血PBMC中Vγ9Vδ2T细胞的增殖,为γδT细胞的过继免疫治疗建立效应细胞制备平台。方法淋巴细胞分离液分离健康人外周血的PBMC,以10^6/孔接种于24孔板,用含10%胎牛血清、1mmol/L仲丁烷和200UIL-2的1640完全培基连续培养2周。结果有效地扩增出了Vγ9Vδ2T细胞,其组成高达85%以上,所扩增出的Vγ9Vδ2T细胞能有效地杀伤Daudi细胞。结论使用小分子的胺基抗原能有效地扩增出有功能的Vγ9Vδ2T细胞,为γδT细胞的过继免疫治疗建立了效应细胞制备平台。
- 曹伟崔莲仙何维
- 关键词:仲丁胺细胞毒性