王瑶
- 作品数：16 被引量：42H指数：3
- 供职机构：上海海洋大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划国家农业科技成果转化资金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- PiggyBac转座元件的构建及其在团头鲂基因组中的转基因效率被引量：2
- 2014年
- 鳞翅目昆虫粉纹夜蛾(Trichoplusia ni)的PiggyBac(PB)转座子已用于模式生物小鼠的转基因及插入诱变研究,目前,该转座子在养殖鱼类中的转基因效率如何还不清楚。构建了带PiggyBac转座子左臂、右臂、EF1α启动子和绿色荧光蛋白(eGFP)编码框的pPBs-EF1α-eGFP供体质粒。以50 ng/μL供体质粒和100 ng/μL体外转录的PB转座酶mRNA共同显微注射入团头鲂(Megalobrama amblycephala)1~2细胞期受精卵中,团头鲂eGFP的荧光表达率可达58.26%,PCR检测结果显示,该转座系统在团头鲂成鱼基因组中的整合效率为53.04%。表明PiggyBac转座子可高效介导基因在团头鲂基因组中的插入,为进一步开展团头鲂插入诱变研究奠定了基础。
- 王瑶蒋霞云邹曙明
- 关键词：PIGGYBAC转座子团头鲂转基因
- 中华绒螯蟹EcR基因全长cDNA克隆及表达分析被引量：10
- 2014年
- 为了研究蜕皮激素受体（EcR）在中华绒螯蟹蜕皮和性腺发育过程中的作用,本实验采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）以及cDNA末端快速扩增（RACE）技术,克隆了中华绒螯蟹EcR基因全长cDNA序列。运用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）方法,分析该基因在不同组织、蜕皮过程及卵巢发育阶段的表达特征,并研究了甲基法尼酯（MF）对卵巢中EcR的调控作用。结果显示,中华绒螯蟹EcR cDNA全长2 156 bp,编码422个氨基酸,其序列与招潮蟹相似性最高,为89%。荧光定量PCR结果显示,EcR在Y器官中表达量最高;在卵巢和肌肉中少量表达;在肝胰腺、鳃、心脏、胃、肠、胸神经节和脑神经节中微量表达。在中华绒螯蟹不同蜕皮时期中,Y器官中EcR表达量在D期和E期的表达量最高;肝胰腺中EcR表达量从AB期到D期有上升的趋势,到E期有所降低;肌肉中EcR表达量在AB期最高;鳃中EcR表达量在D期最高。在中华绒螯蟹卵巢发育过程中,EcR在卵巢发育Ⅰ-Ⅳ期的表达量有上升趋势,到Ⅴ期表达量降低;体外注射实验中,MF1（注射1μg）组的EcR表达量与对照组和生理盐水组无显著差异,而MF2（注射2μg）组的EcR表达量显著上升;离体培养实验中,MF1组（10^-8mol/L）和MF2组（10^-7mol/L）显著高于对照组和生理盐水组。研究表明,EcR基因在中华绒螯蟹蜕皮和卵巢发育过程有重要作用,MF可以调控EcR基因在卵巢中的表达。
- 王瑶杨志刚沈城姚琴琴曾奇韬刘启彬成永旭
- 关键词：中华绒螯蟹基因克隆蜕皮卵巢发育
- 千金对河蟹幼蟹生长的影响及其在体内的蓄积
- 2014年
- 设定急性(96 h)和慢性(40 d)试验,以初步探讨千金对河蟹幼蟹生长的影响,用高效液相色谱测定千金在河蟹体内的蓄积,并在急性试验中间隔12 h测定千金在水中96 h内的浓度变化,计算其降解率。结果表明,急性试验中(千金浓度分别为11、5.5、2.8μg/mL),随着水体中千金浓度的升高,幼蟹死亡率呈上升趋势;在最高浓度(11μg/mL)组,河蟹幼蟹死亡率最高、为33.33%,与其他两组有显著性差异。慢性试验中(千金浓度分别为1.10、0.54、0.22μg/mL),不同浓度千金浸泡对幼蟹的重量、死亡率、蜕壳率和平均蜕壳天数均未产生明显影响。在急性和慢性试验中,千金在肝胰腺中含量均为最高,其最高蓄积量(在最高千金浓度组)为8.61μg/g,与其他各组间有显著性差异。浓度分别为11、5.5、2.8μg/mL的千金在水中降解速度很快,48 h内的降解率分别为83.91%、68.73%和53.09%,48 h后降解率增加明显变缓。结合急性和慢性试验的结果表明,千金不会导致河蟹大量死亡,不会对河蟹的蜕壳与生长产生明显影响,并且千金在河蟹体内并没有大量蓄积。
- 沈城杨筱珍张金彪洪宇航何杰王瑶成永旭
- 关键词：千金河蟹蓄积
- 日本白鲫BMP15和GDF9基因片段的克隆及组织表达分析被引量：1
- 2012年
- 根据斑马鱼GDF9、BMP15基因的保守序列设计引物,采用RT-PCR方法扩增获得日本白鲫GDF9、BMP15基因片段。日本白鲫GDF9基因片段长778 bp,编码145个氨基酸;BMP15基因片段长811 bp,编码270个氨基酸。氨基酸序列分析表明日本白鲫GDF9与斑马鱼的同源性最高,为78%,与其他物种的同源性在58%～78%之间;日本白鲫BMP15与斑马鱼同源性最高,为80%,与其他物种的同源性在30%～80%之间。系统进化树分析显示,鱼类的GDF9基因独立聚成一支,其中日本白鲫的GDF9基因与斑马鱼的GDF9基因聚成一支;鱼类的BMP15基因独立聚成一支,其中日本白鲫的BMP15基因与斑马鱼的BMP15基因聚成一支。半定量PCR结果显示,BMP15 mRNA在脾脏、肝脏、鳃、脑、心脏、肌肉、肾脏、卵巢中均有表达,其中卵巢中表达量最高;GDF9 mRNA在肝脏、脑、心脏、肌肉、卵巢中均有表达,而在脾脏、鳃、肾脏中表达量极低或不表达,在卵巢中表达量最高,为进一步研究日本白鲫GDF9与BMP15基因的结构与功能奠定了基础。
- 王瑶陈阿琴杨志刚刘志伟郭子好曾奇韬沈城
- 关键词：日本白鲫GDF9BMP15基因克隆
- 三疣梭子蟹Δ6脂肪酸去饱和酶基因全长cDNA克隆与组织表达被引量：1
- 2015年
- 旨在探讨三疣梭子蟹高度不饱和脂肪酸自身合成能力,探究三疣梭子蟹HUFA生物合成途径。采用cDNA末端快速扩增(RACE)技术克隆得到三疣梭子蟹△6去饱和酶cDNA全长序列,并利用荧光定量PCR技术进行肝胰腺、肠道、鳃等8种组织的表达分析。通过分析序列表明,基因序列全长2875bp,其中5'非编码区长465bp,3'非编码区长1078bp,开放阅读框(ORF)长1332bp,编码443个氨基酸;并且编码的蛋白序列具有典型的去饱和酶特性:3个组氨酸保守区,一个N端细胞色素b5结构域以及一个血红素结合的HPGG结构域。荧光定量PCR结果显示,Δ6脂肪酸去饱和酶基因在三疣梭子蟹多个组织中均有表达,在肝胰腺中表达量最高,其次是肠道和肌肉,心脏中表达最少。结果表明三疣梭子蟹具有△6去饱和酶。
- 施秋燕杨志刚王伟姚琴琴王瑶成永旭
- 关键词：三疣梭子蟹脂肪酸去饱和酶组织表达分析
- 中华绒螯蟹几丁质酶基因HXchit全长cDNA克隆及其在蜕皮过程中的表达分析被引量：2
- 2015年
- 采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和c DNA末端快速扩增(RACE)技术,依据锯缘青蟹(Scylla serrata)几丁质酶基因的保守区设计引物,克隆了中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)几丁质酶基因(HXchit)全长,并通过荧光定量PCR(q RT-PCR)技术研究了HXchit在中华绒螯蟹的同一蜕皮阶段不同组织、不同蜕皮阶段主要几个组织的表达情况。结果显示,HXchit基因c DNA全长2 042 bp(Gen Bank accession no.KJ513466),包括5′非编码区(5′UTR)35 bp,3′非编码区(3′UTR)537 bp,开放阅读框(ORF)1 470 bp,编码490个氨基酸,预测分子量和理论等电点分别为53.44 k D和4.41。经BLASTN和BLASTX分析,HXchit基因的氨基酸序列与锯缘青蟹几丁质酶的氨基酸序列同源性最高,相似性为75%;经聚类分析,HXchit氨基酸序列与锯缘青蟹几丁质酶聚为一支。q RT-PCR结果显示,HXchit在所检测的组织中均有表达,各组织的表达量依次为肝胰腺>表皮>肌肉>胃>鳃>胸神经节>肠>心脏>脑神经节。对不同蜕皮周期的中华绒螯蟹分析显示,肝胰腺中HXchit表达水平在D期最高,并与E期、AB期及C期呈显著性差异(P<0.05);表皮中HXchit在E期、AB期、C期和D期的表达水平呈逐渐升高的趋势,D期表达量达到最高且与E期、AB期、C期呈显著性差异(P<0.05);肌肉中HXchit表达量在C期最高,但各蜕皮时期的表达量之间差异不显著(P>0.05)。结果表明HXchit是一种在中华绒螯蟹肝胰腺中大量表达的酸性几丁质酶,推测其在蜕皮周期中对几丁质类食物的消化或内源性几丁质的降解起到了重要作用,本研究旨在为进一步探索几丁质酶的准确生理功能和调控机制奠定分子基础。
- 姚琴琴杨志刚王瑶郭子好刘启彬施秋燕成永旭
- 关键词：中华绒螯蟹几丁质酶蜕皮
- 中华绒螯蟹延伸因子EF-1δ基因全长cDNA克隆及表达
- 中华绒螯蟹俗称河蟹，属甲壳纲、十足目、绒螯蟹属，是我国重要的经济蟹类。目前关于延伸因子的研究多集中在EF-lα、EF-1β、EF-1γ或EF-2等方面，关于延伸因子EF-1δ的报道较少，特别是甲壳动物上关于EF-1δ方面...
- 郭子好杨志刚刘志伟王瑶杨筱珍成永旭
- 关键词：中华绒螯蟹基因克隆基因表达
- 文献传递
- 规格和饵料对中华绒螯蟹雌蟹可食部分含量和体成分的影响
- 中华绒螯蟹，俗称大闸蟹，又称河蟹。通过本实验室进行的河蟹配合饲料的筛选试验发现，只有投喂通过人工向基础饲料中添加3％的全豆油组雌蟹的生长状况比投喂冰鲜野杂鱼组雌蟹的生长状况差，所以本实验以这两组雌蟹为研究对象，分析投喂添...
- 纪连元杨志刚阙有清郭子好曾奇轁王瑶成永旭
- 关键词：中华绒螯蟹配合饲料可食部分
- 文献传递
- 中华绒螯蟹FAD6-b基因的全长克隆及原核表达分析被引量：3
- 2016年
- 根据已登录的中华绒螯蟹一种Δ6去饱和酶基因(Accession Number:JX946434)及菁夜蛾去饱和酶基因(Accession Number:KJ622055.1)的保守区设计引物,通过逆转录PCR以及RACE技术克隆了中华绒螯蟹另一种Δ6去饱和酶基因FAD6-b的全长序列。经序列分析,中华绒螯蟹FAD6-b cDNA全长为2 310 bp,其中开放阅读框(ORF)为1 326 bp,共编码442个氨基酸(Accession Number:KP876058),理论分子量为50.86 ku,理论等电点为8.47,FAD6-b基因的氨基酸序列与已公布的一条中华绒螯蟹Δ6去饱和酶基因的一致性为76%。原核表达载体构建及其表达实验表明,中华绒螯蟹FAD6-b基因成功重组到原核表达载体pCold-TF DNA中,重组质粒pCold TF-fad6b在大肠杆菌BL21(DE3)pLysS中进行表达,经SDS-PAGE电泳分析表明,IPTG诱导后的重组菌出现了单一的蛋白条带,且大小与预期(105.86 ku)一致,可溶性分析显示目的蛋白主要存在于蛋白上清液中。对重组蛋白进行纯化,蛋白纯化液经电泳检测后显示出特异性单一条带,进一步证明了pCold TF-fad6b的成功构建和表达。目的蛋白经Western-blotting检测,结果表明获得的重组蛋白与6×His抗体进行了特异性结合,显示出良好的免疫学活性。
- 杨志刚姚琴琴成永旭施秋燕杨青何杰马明君王瑶常东
- 关键词：中华绒螯蟹基因克隆原核表达
- 中华绒螯蟹△9脂肪酸去饱和酶基因的原核表达研究
- △9去饱和酶(△9 fatty acid desaturase,FAD9)是一种存在于内质网膜上的结合蛋白,其在脂肪酸代谢及细胞膜流动性的调节中发挥着重要作用.实验根据本实验室已克隆得到的中华绒螯蟹FAD9基因的cDNA...
- 姚琴琴杨志刚郭子好王瑶刘启彬施秋燕成永旭
- 关键词：中华绒螯蟹原核表达重组蛋白
