陈勇 作品数:144 被引量:359 H指数:10 供职机构: 温州医科大学 更多>> 发文基金: 浙江省自然科学基金 浙江省科技厅项目 浙江省科技计划项目 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 农业科学 文化科学 更多>>
大鼠骨髓间充质干细胞的分离冻存及向成骨细胞和软骨细胞诱导分化 被引量:13 2006年 目的建立大鼠骨髓间充质干细胞(MSC)体外分离、纯化、增殖、冻存的方法,并观察其体外分化为成骨细胞及软骨细胞的潜能活性。方法取SD大鼠的股骨及胫骨,冲取骨髓液,采用密度梯度离心法结合贴壁培养法以及单独用贴壁培养法分离纯化MSC,增殖,并测定其生长曲线。MSC在12.5%DMSO条件下经液氮冻存半年复苏,测其存活率。对第3代大鼠MSC进行成骨矿化诱导,测定其碱性磷酸酶(ALP)活性及成骨矿化情况。对第3代大鼠MSC进行诱软骨细胞的诱导分化,测定诱导后的细胞表型情况。结果大鼠MSC为均一的梭形的成纤维细胞样生长,贴壁及增殖能力强,生长曲线呈S型。MSC于液氮冻存半年后复苏,其存活率为80%。在成骨诱导剂作用下,MSC具有成骨能力,诱导后ALP活性显著提高,并出现矿化结节沉积。在成软骨诱导剂作用下,可见细胞由成纤维细胞样的梭形变为椭圆形及肾形,并分泌异染基质,甲苯胺蓝染色呈阳性,表现为软骨细胞分化特点。结论获得的SD大鼠MSC生长旺盛,增殖能力强。在特定诱导条件下,大鼠MSC体外可定向分化为成骨细胞及软骨细胞,具有成骨及成软骨分化潜能。 张文元 杨亚冬 房国坚 陈勇关键词:SD大鼠 间充质干细胞 分化 成骨细胞 软骨细胞 禽流感的病原学和流行病学研究进展 被引量:3 2004年 禽流行性感冒(Aviam influnza,AI)简称禽流感,是由A型流感病毒引起的一种从呼吸系统到严重全身败血症等多种症状的禽类烈性传染病,又称真性鸡瘟或欧洲鸡瘟。迄今已在世界许多国家和地区发生过,每次爆发,均对养禽业造成毁灭性打击。近年来。 王怡婷 经络 陈勇关键词:禽流感 病原学 流行病学 基因组结构 传染源 CD40L对单纯疱疹病毒2型DNA疫苗的免疫增强作用研究 2015年 目的研究重组质粒pc DNA3-Kan/CD40L辅佐HSV-2 DNA疫苗增强小鼠体液免疫和细胞免疫的作用效果,探讨其作为HSV-2 DNA疫苗佐剂的潜力。方法 (1)构建鼠CD40L基因的重组真核表达质粒pc DNA3-Kan/CD40L。(2)体外细胞实验:检测重组质粒p CD40L刺激小鼠外周血淋巴细胞增殖情况和脾细胞分泌IFN-γ的能力。(3)体内动物实验:48只雌性BALB/c小鼠随机分为4个免疫组p K组、pg D组、pc CD40L+pg D组和p K+pg D组。小鼠后腿肌内注射,共免疫2次,间隔3周。末次免疫3周后,每组随机取4只小鼠进行致死剂量攻毒实验验证疫苗的保护作用。ELISA检测小鼠血清抗HSV-2 Ig G抗体水平和趋化因子RANTES;流式细胞术检测全血中CD4+和CD8+T细胞百分率以及分泌IFN-γ和IL-4的T细胞的百分率;MTS法检测小鼠脾脏T细胞的增殖能力。结果 (1)体外实验结果:重组质粒pc DNA3-Kan/CD40L对小鼠外周血淋巴细胞的增殖能力和刺激脾细胞分泌IFN-γ的能力均显著大于空质粒pc DNA3-Kan(P<0.05)。(2)体内实验结果:小鼠血清抗HSV-2 Ig G水平、趋化因子RANTES、脾淋巴细胞刺激指数和外周血CD4+T细胞数和分泌IFN-γ的Th1细胞数均高于其他免疫组(P<0.05)。pc DNA3-Kan/CD40L+pg D组预防小鼠感染HSV-2效果好于其他免疫组。结论 (1)重组质粒pc DNA3-Kan/CD40L能够诱导外周血淋巴细胞增殖并刺激脾细胞分泌IFN-γ具有作为疫苗佐剂的潜力。(2)pc DNA3-Kan/CD40L可以辅助HSV-2 DNA疫苗诱导BALB/c小鼠产生特异性抗HSV-2的体液免疫和细胞免疫,具备作为HSV-2 DNA疫苗免疫佐剂的能力。 胡如西 陶薇 傅婷 何卓晶 贾岚 洪艳 陈勇分期针灸法对缺血性脑卒中患者P-Jak2、P-Stat3蛋白水平改变的研究 被引量:7 2019年 JAK/STAT信号通路广泛参与细胞的增殖、分化成熟、凋亡及免疫调节等过程,其对脑损伤后的神经元再生已成为研究脑缺血再灌注的热点。我们在近几年的动物实验中发现电针在脑缺血模型的大鼠的急性期对PJak2、P-Stat3的蛋白水平的改变存在一定的影响,故在临床中对分期针灸的缺血性脑卒中患者进行不同时期P-Jak2、P-Stat3表达的检测,探讨不同的治疗方法如何影响P-Jak2、P-Stat3蛋白水平的改变。现总结报道如下。 胡斌 郑学伦 陈勇 谢文霞关键词:康复治疗 缺血性脑卒中 P-STAT3 兔骨髓间充质干细胞表面抗原检测及其变化特点 被引量:2 2007年 目的:应用流式细胞仪对兔骨髓间充质干细胞的表面抗原进行检测,观察骨髓间充质干细胞传代次数、克隆纯化与骨髓间充质干细胞表面抗原表达之间的关系。方法:实验于2004-01/2006-08在浙江省医学科学院生物工程所完成。取3月龄新西兰大白兔用于骨髓间充质干细胞的分离培养。兔骨髓间充质干细胞的克隆化:将铺满培养瓶底的原代骨髓间充质干细胞,用D-Hanks液小心的洗1次,加入0.25%胰蛋白酶消化约4min,弃消化液,加LG-DMEM培养液收集细胞,1000r/min,离心10min,然后用LG-DMEM培养液充分混匀沉淀细胞。细胞计数后以10倍递减稀释至细胞密度为103个/mL。取0.1mL稀释后的细胞悬液加入10mL培养液,使最终细胞密度为10个/mL。将细胞悬液加入96孔培养板,每孔100μL。置37℃、体积分数为0.05的CO2饱和湿度条件下培养,每天观察克隆细胞的增殖生长状况。待克隆细胞生长至60%~80%融合时,逐步扩大培养,在液氮冻存保种的同时进行细胞连续传代。将体外普通法分离的骨髓间充质干细胞第5代、第7代、第13代、第16代、第21代、第22代及克隆纯化的骨髓间充质干细胞第3代、第5代、第15代、第26代均标记上CD14-FITC及CD44-PE,通过流式细胞仪检测其阴性率及阳性率。结果:①普通法分离的骨髓间充质干细胞各代的CD44表达呈阳性,且随着培养代次的增加,其表达的阳性率逐渐增强,到P16代以后又呈下降趋势;各代骨髓间充质干细胞表面抗原CD14出现了微弱阳性,但随着培养代次增加,其阳性率呈下降趋势。②克隆纯化的骨髓间充质干细胞其CD44呈现阳性,表达在80%以上,至P26代时CD44表达下降到70.49%;其CD14基本呈阴性。结论:兔骨髓间充质干细胞其CD44呈阳性表达,CD14呈阴性表达。随着传代代数增加CD14阴性符合率逐渐提高,CD44阳性表达率也提高。普通法分离的骨髓间充质干细胞较克隆纯化的骨髓间充� 杨亚冬 张文元 房国坚 陈勇关键词:间质干细胞 细胞学 抗原 抗原 CD44 抗原 新型单纯疱疹病毒Ⅱ型DNA疫苗 本发明涉及医药和基因技术领域,特别是用于预防和治疗单纯疱疹病毒II型感染疾病的一种单纯疱疹病毒II型DNA疫苗。本发明通过分子生物学手段,将单纯疱疹病毒II型的糖蛋白D基因组合到含卡那抗性的真核表达载体pKan中,构建包... 洪艳 陈勇 何方 杨连华文献传递 HEV跨物种感染的研究进展 HEV 是引起经肠道传播的戊型肝炎的病原体,是发展中国家急性病毒性肝炎的重要病因之一, 在美国和其它发达国家也散发出现 HEV 感染。由 HEV 引起的戊型肝炎的典型特征是急性、自限性和较低的致死率,但是近期报道急性戊肝... 陶薇 陈勇关键词:HEV 戊型肝炎 种间传播 文献传递 壳聚糖季铵盐对戊型肝炎病毒多肽疫苗免疫效果的研究 被引量:3 2014年 目的研究壳聚糖季铵盐(3-氯-2-羟丙基三甲基壳聚糖,HTCC)作为免疫佐剂,对戊型肝炎病毒(hepatitis E virus,HEV)多肽疫苗接种小鼠的免疫增强效果。方法 IPTG诱导重组质粒pET28a-ORF23在大肠杆菌BL21中表达HEV重组蛋白作为多肽疫苗,以3-氯-2-羟丙基三甲基氯化铵(CTA)作为化学改性剂对壳聚糖进行接枝改性合成水溶性HTCC作为多肽疫苗佐剂。50只雌性BALB/c小鼠随机分为5个免疫组,小鼠后腿肌内注射,共免疫2次,间隔3周。ELISA检测3个免疫阶段鼠血清抗HEV-IgG抗体水平;末次免疫5周后,四色流式细胞术检测免疫小鼠全血中CD4+、CD8+、IFN-γ+和IL-4+细胞的百分率;MTS法检测小鼠脾脏T淋巴细胞的增殖反应。结果加HTCC佐剂组的抗HEV-IgG抗体均显著高于不加佐剂组(P<0.05),其小鼠脾脏T淋巴细胞的蛋白刺激指数显著高于不加佐剂组(P<0.05)。各组间的CD4+细胞百分率无显著差异。加HTCC佐剂组的IFN-γ+细胞百分率显著高于不加佐剂组和两个阴性组(P<0.05),其IL-4+细胞百分率显著低于不加佐剂组和两个阴性组(P<0.05)。结论壳聚糖季铵盐对HEV重组多肽疫苗接种小鼠有一定的免疫加强效果。 郑海群 陶薇 何卓晶 傅婷 陈勇 洪艳关键词:壳聚糖季铵盐 戊型肝炎病毒 多肽疫苗 重组蛋白 一种戊型肝炎病毒嵌合基因疫苗 本发明涉及生物医药技术领域,是一种预防戊型肝炎病毒感染的嵌合基因疫苗。它是一种含戊型肝炎病毒开放读码框2(ORF2)和开放读码框3(ORF3)嵌合基因的真核表达重组质粒。该基因疫苗可诱导机体产生特异性细胞和体液免疫,用于... 陈勇 洪艳 杨连华 经络 蒋骏航 王怡婷 凌志强文献传递 庚型肝炎病毒杭州株E_2/NS_1基因区的克隆及序列分析 2001年 目的 获得散发性庚型肝炎病毒杭州株E2 /NS1区部分核酸序列。方法 选择 1例浙江杭州散发性庚型肝炎患者 ,从其血清中分离HGVRNA ,通过逆转录套式聚合酶链反应(RT nPCR)法 ,扩增该散发性HGV(HZ 2株 )E2 /NS1区部分cDNA片段 ,然后克隆到质粒 pGEX 4T 3中 ,并进行核苷酸序列分析。结果 HGV杭州株与河北株 (HGVC96 4、美国株 )(HGU44 40 2 )的核苷酸同源性为 92 5 %和 89 8% ,氨基酸同源性为 98 0 %和 93 9%。 陈勇 洪艳 杨连华 凌志强 俞为群关键词:庚型肝炎病毒 CDNA克隆