吴志伟
- 作品数：7 被引量：6H指数：2
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- 5-氮杂胞苷对SMMC-7721细胞增殖与侵袭的影响及作用机制
- 2013年
- 目的观察5-氮杂胞苷(5-Aza-CdR)对人肝癌细胞株SMMC-7721细胞增殖及侵袭的影响,并探讨其可能的机制。方法常规方法培养SMMC-7721细胞,加入不同浓度的5-氮杂胞苷,以CCK-8法测定终浓度为0、5、10、25、50 umol/L的5-氮杂胞苷对SMMC-7721细胞作用24、48、72 h后增殖的影响,并计算细胞生长抑制率;Transwell小室侵袭实验检测各不同浓度5-氮杂胞苷处理SMMC-7721细胞后24 h后的细胞侵袭能力特点;Western blotting法检测Caspase-3、MMP-2的表达。结果 5-氮杂胞苷能显著抑制人肝癌细胞株SMMC-7721细胞增殖,并呈时间浓度依赖性(P<0.05);与对照组相比,随5-氮杂胞苷浓度增加Caspase-3明显增加,MMP-2蛋白表达量明显增加。结论 5-氮杂胞苷对人肝癌细胞株SMMC-7721细胞增殖有明显抑制作用,且表现为时间浓度依赖性,其机制可能与上调Caspase-3蛋白表达量,诱导细胞凋亡,及对细胞的直接毒性作用有关。5-氮杂胞苷能增强人肝癌细胞株SMMC-7721细胞的侵袭能力,其机制可能与上调MMP-2蛋白表达量有关。
- 段建文吴晓叶海林符俊惠吴志伟张启瑜
- 关键词：5-氮杂胞苷肝细胞半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3基质金属蛋白酶-2
- 肝星状细胞对大鼠肝部分切除术后肝损伤修复影响的实验研究
- 目的：探讨肝星状细胞((hepatic stellate cells，HSCs)对肝细胞活性的调节及其在大鼠肝部分切除术后肝损伤修复的影响。 方法：体外实验部分:将大鼠HSCs与大鼠肝细胞系(BRL-3A)共培养，CC...
- 吴志伟
- 关键词：肝星状细胞肝再生肝部分切除术增殖细胞核抗原
- 文献传递
- 辣椒素调节肝星状细胞活性延缓肝纤维化的实验研究被引量：1
- 2014年
- 目的 探讨辣椒素对大鼠肝星状细胞（hepatic stellate cells,HSCs）活性的影响及其对活体肝纤维化的治疗作用.方法 DCFH-DA法检测辣椒素对HSCs中活性氧的影响；用酶标法检测辣椒素对HSCs增殖的影响；Western blot检测HSCs α-肌动蛋白（α-SMA）的表达；RT-PCR检测辣椒素对HSCs纤维化相关基因表达的影响；流式细胞仪检测辣椒素对HSCs凋亡的影响；Western blot法检测bcl-2、bax、细胞色素酶c（cytochrome,cyt-c）等蛋白的表达；建立鼠肝纤维化模型,经腹腔输注辣椒素,检测肝组织病理切片,肝纤维化指标.结果 辣椒素抑制HSCs中活性氧的产生,抑制HSCs的活化（F=57.392,P＜0.05）与增殖（F=13.267,P＜0.05）,促进HSCs的凋亡（F=235.571,P＜0.05）,促进凋亡相关蛋白Bax、cyt-c、caspase-3的表达（分别F=29.334,38.274,138.329,均P＜0.05）.改变HSCs纤维化相关基因TGF-β1、TIMP-1的表达（分别F=376.534,253.751,均P＜0.05）,活体实验显示辣椒素可降低肝羟脯氨酸含量及血清Ⅲ型胶原和透明质酸水平（分别F=153.397,27.149,38.392,均P＜0.05）.结论 辣椒素抑制HSCs增殖活化并诱导其凋亡.辣椒素对肝纤维化具有一定的抑制作用.
- 俞富祥吴志伟朱千东符竣惠张启瑜
- 关键词：肝硬化辣椒辣素肝星状细胞
- 肝星状细胞对大鼠肝部分切除术后肝再生修复的影响
- 2014年
- 目的 探讨肝星状细胞（hepatic stellate cells,HSCs）在大鼠肝部分切除术后对肝损伤修复的影响.方法 体外实验部分：将大鼠肝星状细胞（HSCs）与大鼠肝细胞系（BRL-3A）共培养,CCK-8比色法检测细胞增殖情况;ELISA法检测培养肝星状细胞上清液中细胞因子,即肝细胞生长因子（hepatic growth factor,HGF）、胰岛素样生长因子（insulin growth factor,IGF）、表皮细胞生长因子（epidermal growth factor,EGF）、转化生长因子-α（transfactor growth factor-α,TGF-α）含量.体内实验部分;将45只260 ～330 g健康雄性SD大鼠随机分为三组：正常组（生理盐水组）、对照组（肝星状细胞培养液组）、实验组（肝星状细胞培养上清液组）.各组分别于肝大部切除术后第3、7、12天取血清检测肝功能情况并计算肝再生指数;HE染色切片显微镜下观察肝脏病理结构改变情况;免疫组织化学染色法检测增殖细胞核抗原（proliferating cell nucleus antigen,PCNA）、平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）、甲胎蛋白（a1pha feta1 protein,AFP）及白蛋白（albumin,ALB）的表达情况.结果 ①CCK-8法检测肝星状细胞能促进肝细胞增殖（P＜0.05）;②上清液较培养液中细胞因子HGF、TGF-α含量多,差别有统计学意义（P＜ 0.05）;③实验组肝再生指数比对照组大,差别具有统计学意义（P＜0.05）;④实验组大鼠AST随着时间的推移,较对照组下降明显,差别有统计学意义（P＜0.05）;⑤实验组PCNA表达量较正常组、对照组增多,差别有统计学意义（P＜ 0.05）;⑥平滑肌肌动蛋白、白蛋白、甲胎蛋白三组间差别不显著（P＞ 0.05）.结论 ①体外肝星状细胞能促进肝细胞增殖;②肝星状细胞培养上清液能促进大鼠肝部分切除术后肝再生,其分泌的多种细胞因子在肝损伤再生修复中起了重要作用.
- 吴志伟段文彪刘赞宋才鑫段建文俞富祥张启瑜
- 关键词：肝星状细胞肝再生
- 脂肪间质干细胞通过SDF-1促进胰腺癌细胞增殖、侵袭的体外研究
- 2013年
- 探讨脂肪间质干细胞(adipose tissue-derived mesenchymal stem cells,ADSCs)对胰腺癌(pancreatic cancer,PaCa)细胞增殖、侵袭的影响及其产生作用的原因。从腹腔脂肪分离纯化培养ADSCs,通过半透膜在6孔塑料培养板上建立PaCa细胞与ADSCs的双层培养体系,单独培养的PaCa细胞作为对照。通过CCK-8比色法检测ADSCs对PaCa细胞增殖的影响;ELISA法测定培养液中基质细胞源性因子-1(SDF-1)的浓度;RT-PCR法测定PaCa细胞及ADSCs中CXCR4的表达;评估测定SDF-1对PaCa细胞增殖的影响;AMD3100对ADSCs与PaCa细胞共培养的影响。结果显示,ADSCs可促进PaCa细胞的增殖与侵袭;SDF-1在ADSCs中高表达而在PaCa细胞几乎不表达;相反,CXCR4mRNA在PaCa细胞中高表达,而在ADSCs中低表达;SDF-1对PaCa的促增殖作用呈浓度依赖性;AMD3100能降低ADSCs对PaCa活性的影响。ADSCs具有促进PaCa细胞增殖及侵袭的潜能,这种作用可能与SDF-1/CXCR4轴有关。
- 俞富祥宋才鑫吴志伟朱千东季世强张启瑜
- 关键词：脂肪间质干细胞胰腺癌增殖SDF-1
- 脂肪特异性蛋白27对大鼠肝星状细胞活化的影响被引量：3
- 2013年
- 目的:探讨脂肪特异性蛋白27(Fsp27)对肝星状细胞(HSCs)增殖和活化的影响及其对纤维化相关蛋白的调节作用。方法:从SD大鼠肝脏提取HSCs并培养,采用实时荧光定量PCR、免疫荧光染色和Western blotting检测原代HSCs和活化HSCs中Fsp27 mRNA和蛋白的表达。构建携带Fsp27基因的慢病毒,转染活化的HSCs并继续培养72 h,通过CCK-8比色法检测Fsp27对HSCs增殖的影响;Western blotting检测HSCs中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达,了解HSCs的活化状态;实时荧光定量PCR检测Fsp27对HSCs中纤维化相关蛋白[包括基质金属蛋白酶2(MMP-2)、金属蛋白酶组织抑制物1(TIMP-1)和转化生长因子β1(TGF-β1)]mRNA表达的影响。结果:成功分离大鼠原代HSCs。Fsp27在原代HSCs和活化HSCs中的表达差异显著(P<0.01);活化HSCs成功转染携带Fsp27基因的慢病毒后继续培养72 h,与对照组比较,HSCs的活化与增殖被明显抑制(P<0.05);Fsp27促进MMP-2 mRNA的表达(P<0.05),降低TIMP-1和TGF-β1mRNA的表达(P<0.05)。结论:Fsp27可抑制HSCs的增殖和活化,并调节纤维化相关蛋白的表达。Fsp27的作用可能与其维持HSCs静息状态细胞表型有关。
- 俞富祥宋才鑫吴志伟张启瑜
- 关键词：肝星状细胞
- 脂肪特异性蛋白27基因抑制大鼠肝星状细胞增殖活化被引量：2
- 2013年
- 目的探讨脂肪特异性蛋白27（Fsp27）基因对活化态肝星状细胞（HSCs）增殖、活化的影响及其对纤维化相关基因的调节作用。方法提取HSCs并培养。用实时定量PCR技术检测原代HSCs及活化HSCs中的Fsp27基因表达。构建携带Fsp27目的基因的慢病毒，转染活化的HSCs并继续培养72h。通过CCK-8比色法检测Fsp27基因对HSCs增殖的影响。Western blot检测HSCs α-肌动蛋白（α—SMA）的表达，了解HSCs的活化状态。实时定量PCR技术研究Fsp27基因对HSCs纤维化相关基因表达的影响。结果成功分离原代HSCs，Fsp27基因在原代HSCs及活化HSCs中表达差异显著（P〈0．01）。活化HSCs成功转染携带Fsp27目的基因的慢病毒后继续培养72h，与对照组比较，HSCs的活化与增殖受到明显抑制（P〈0．05）；Fsp27基因促进MMP-2的表达（P〈0．05），降低了TIMP-1及TGF-β1的表达（P〈0．05）。结论Fsp27基因具有抑制HSCs活化增殖的潜能，Fsp27基因可调节纤维化相关基因的表达。Fsp27基因的作用可能与维持HSCs静息状态细胞表型有关。
- 俞富祥宋才鑫吴志伟朱千东张启瑜
- 关键词：基因肝星状细胞增殖活化
