李志强
- 作品数：8 被引量：16H指数：3
- 供职机构：中国药科大学生物制药学院更多>>
- 发文基金：江苏省应用基础研究计划更多>>
- 相关领域：化学工程医药卫生生物学更多>>
- 基因工程酶法生产N-氨基甲酰-D-对羟基苯甘氨酸反应条件的优化(英文)被引量：4
- 2002年
- 为了实现利用生物酶转化法生产D 对羟基苯甘氨酸 ,以工程菌E .coliBL2 1 pMD T7 dht细胞作酶源 ,对底物对羟基苯海因到中间体N 氨基甲酰 D 对羟基苯甘氨酸的酶转化条件进行了优化 .酶转化的最适温度为 37℃ ,最适pH为 9 0 .在Tris HCl、磷酸盐、碳酸盐和硼酸盐 4种缓冲体系中 ,底物对羟基苯海因的转化率相近 .菌体细胞经适当冻融后 ,底物对羟基苯海因的转化率被提高 .水溶性有机溶剂DMSF、DMF和Tween 80使对羟基苯海因的转化率降低 .转化时底物和菌体的合适比例为 30g L对羟基苯海因和 10g L湿菌体 .经工程菌E .coliBL2 1 pMD T7 dht细胞催化 ,底物的转化率在 13h内可达到 96 % .所制备的产物熔点。
- 李志强胡卓逸刘景晶
- 关键词：基因工程酶法生产
- 假单胞菌海因酶基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达被引量：6
- 2001年
- 目的 :构建海因酶基因工程菌 ,以便实现对羟基苯甘氨酸的工业化生产。方法 :利用PCR技术从恶臭假单胞菌 (Pseudomonasputida) 980 1中扩增得到海因酶基因 ,将该基因插入pMD18 T质粒 ,转化大肠杆菌 (Es cherichiacoli) ,通过地高辛标记原位杂交和海因酶活力测定两种方法 ,筛选出具有海因酶活力的阳性转化子。结果 :工程菌E .coliBL2 1/pMD dht的海因酶活力达到 170 0U/L ,比野生菌恶臭假单胞 980 1菌的酶活力提高 8倍。SDS PAGE显示海因酶的单体分子量约为 5 3KDa ,海因酶的表达量约占菌体总可溶性蛋白的 2 0 %。结论
- 李志强刘景晶胡卓逸王正华明欣
- 关键词：海因酶恶臭假单胞菌基因克隆基因表达大肠杆菌
- 若干蝙蝠葛碱衍生物对人红细胞膜Ca^(2+)-Mg^(2+)-ATPase活力的影响
- 1993年
- 本文测定了数种蝙蝠葛碱衍生物对钙调素(CaM)激活的人红细胞膜Ca^(2+)-Mg^(2+)-ATPase活力的影响。结果表明,这些化合物对该酶都有不同程度的抑制作用,其机制表现为竞争性抑制,过量的CaM能完全逆转这些化合物所引起的抑制。当Ca^(2+)-Mg^(2+)-ATPase被胰蛋白酶(trypsin)限制性酶解完全活化后,其活力不再受CaM激活,但仍被这些化合物所抑制。
- 李志强贡岳松胡卓逸
- 关键词：红细胞镁腺苷三磷酸蝙蝠葛碱
- 假单胞菌海因酶基因在大肠杆菌中的高效表达(英文)被引量：5
- 2002年
- 为实现利用生物酶转化法进行D 对羟基苯甘氨酸的工业化生产 ,构建了 3株海因酶基因工程菌 .利用PCR技术从恶臭假单胞菌 (Pseudomonasputida)CPU 980 1染色体DNA中扩增得到长约1.8kb的含编码区和自身启动子的海因酶全基因 .通过将海因酶全基因插入pMD18 T质粒、海因酶基因的编码区与pET 17 b质粒重组、海因酶基因编码区和T7强启动子一起插入pMD18 T质粒分别得到重组质粒pMD dht、pET dht和pMD T7 dht.将上述重组质粒分别转化大肠杆菌 (Escherichiacoli) ,通过地高辛标记菌落原位杂交和海因酶活力测定两种方法 ,筛选出具有海因酶活力的阳性转化子 .结果表明 ,大肠杆菌的RNA聚合酶能够识别和结合来自恶臭假单胞菌海因酶基因的自身启动子 ,该启动子在大肠杆菌中能够工作 .基因工程菌E .coliBL2 1 pMD dht、E .coliBL2 1 pET dht和E .coliBL2 1 pMD T7 dht的海因酶活力分别为 170 0U L、190 0U L和 2 5 0 0U L ,比野生菌P .putidaCPU 980 1的海因酶活力分别提高了 8倍、9倍和 12倍 .薄层扫描结果显示 ,这些工程菌的海因酶表达量分别约占菌体总可溶性蛋白质的 2 0 %、31%和 5 7%.SDS PAGE显示 ,海因酶的单体分子量约为 5 0kD .经工程菌E .coliBL2 1 pMD T7 dht催化 ,底物对羟基苯海因的转化率在 13h内可达到
- 李志强胡卓逸刘景晶
- 关键词：假单胞菌大肠杆菌
- 双苄基异喹啉类化合物对人红细胞膜Ca<'2+>-Mg<'2+>-ATPase及兔血管平滑肌收缩的影响
- 李志强
- 用基因工程菌生产D-对羟基苯甘氨酸
- 刘景晶李志强胡卓逸李隽黄红辉刘猛六陈正兰罗雪
- D-对羟基苯甘氨酸(D-p-HPG)是制备羟氨苄青霉素、羟氨苄头孢菌素和羟氨唑头孢菌素等β-内酰胺类抗生素的重要中间体, 同时它也用于多种多肽类激素及农药的合成。在D-对羟基苯甘氨酸的多种制备方法中,生物酶转化法具有原料...
- 关键词：
- 关键词：D-对羟基苯甘氨酸D-海因酶基因工程
- 用D-海因酶基因工程菌酶法制备D-对羟基苯甘氨酸
- 该文构建了三株海因酶基因工程菌.首先利用PCR技术从恶臭假单胞菌（Pseudomonas putida）CPU 9801染色体DNA中扩增得到长约1.8kb的含编码区和自身启动子的海因酶全基因.通过将海因酶全基因插入pM...
- 李志强
- 关键词：D-对羟基苯甘氨酸D-海因酶恶臭假单胞菌基因克隆基因工程菌
- 文献传递
- 用基因工程菌酶法和化学法制备-D-对羟基苯甘氨酸(英文)被引量：3
- 2003年
- D 对羟基苯甘氨酸 (D p HPG)是制备羟氨苄青霉素、羟氨苄头孢菌素和羟氨唑头孢菌素等β 内酰胺类抗生素的重要中间体 ,同时它也用于多种多肽类激素及农药的合成 .在D 对羟基苯甘氨酸的多种制备方法中 ,生物酶转化法具有原料易得、工艺简单、耗能少、产率高、成本低、光学纯度好、三废污染少等优势 .为利用生物酶转化法制备D 对羟基苯甘氨酸 ,首先用尿素、乙醛酸和苯酚合成底物D ,L 对羟基苯海因 ,然后利用D 海因酶基因工程菌E .coliBL2 1 pMD T7 dht细胞作酶源 ,进行底物D ,L 对羟基苯海因到中间体N 氨基甲酰 D 对羟基苯甘氨酸的酶法转化 ,最后用化学法将N 氨基甲酰 D 对羟基苯甘氨酸进一步转化为D 对羟基苯甘氨酸 .结果表明 ,底物D ,L 对羟基苯海因的收率为 60 % .8L体积的发酵小试实验表明 ,发酵 12h ,工程菌E .coliBL2 1 pMD T7 dht的海因酶活力为 30 0 0U L ,SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳薄层扫描结果显示海因酶表达量约占菌体总可溶性蛋白质的 60 % ,菌体收率为 6% .8L体积的海因酶转化实验表明 ,在 4 %底物D ,L 对羟基苯海因和 1%菌体 (湿重 )pH 9 0情况下 ,反应 5h ,D ,L 对羟基苯海因的转化率可达 96% .在酸性条件下 ,用NaNO2 将N 氨基甲酰 D 对羟基苯甘氨酸转化为D 对羟基苯甘氨酸 ,反应 2h ,转?
- 李志强胡卓逸刘景晶
- 关键词：D-对羟基苯甘氨酸中间体化学法基因工程菌
