郭怀祖
- 作品数：12 被引量：14H指数：2
- 供职机构：第二军医大学国际合作肿瘤研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划“重大新药创制”科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人IgE分子Fc段受体结合区的表达、纯化及功能鉴定
- 2011年
- 利用哺乳动物细胞表达、纯化具有生物学功能的人IgE Fc段与受体结合的功能区(Fcε2-4)。以CRL8033细胞株为模板,PCR扩增人IgE Fcε2-4的cDNA并构建到真核表达载体pcDNA3.1(+)中,脂质体转染CHO-K1细胞并以G418加压筛选。利用有限稀释法、Dot-blot及FACS筛选出高表达目的蛋白的稳定细胞株并进行扩增。CHO-K1培养上清经偶联抗IgE抗体(Omalizumab)的亲和层析柱分离纯化后,聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定纯度,并采用表面等离子共振(SPR)法对该蛋白与其抗体的亲和力进行检测。结果表明,SDS-PAGE显示最终获得了纯度高于95%的人IgE Fcε2-4蛋白,呈二聚体状态,分子量约78kD,SPR检测结果显示,该蛋白与Omalizumab抗体特异性高亲和力结合(kD值约3.8nmol/L)。提示,本实验获得了结构及糖基化修饰正确的人IgE Fcε2-4结构域,为进一步研究其功能及探索新的抗体药物奠定了基础。
- 李晶郭怀祖杨扬钱卫珠张大鹏薛静亚朱磊王皓
- 关键词：IGE克隆表达CHO
- IgA型抗体:新型治疗性抗体?
- 2015年
- 单克隆抗体作为生物治疗药物,日益成为人类对抗肿瘤、炎症、自身免疫性疾病等的重要手段。目前已上市的单克隆抗体药物全部是IgG型抗体或其衍生物(片段、双特异抗体、抗体偶联药物),而免疫球蛋白A(immunoglobulin A,IgA)在传统观念上被认为主要参与机体黏膜免疫,组成人体免疫系统对抗外界病原体的第一道防线。近年来,对IgA型抗体性质和功能的进一步研究显示IgA型抗体的某些性质,包括其不同于IgG型抗体的结构和体内分布、独特的ADCC效应、参与免疫系统调节和不能通过胎盘等,使其具有新型治疗性抗体的应用前景。本文主要对IgA型抗体的结构、作为新型抗体药物的应用前景及作为治疗性抗体仍存在的一些问题进行综述。
- 夏懋郭怀祖侯盛
- 关键词：免疫球蛋白A单克隆抗体治疗性抗体
- 抗CTLA-4嵌合抗体的制备及生物学活性鉴定被引量：1
- 2012年
- 制备新型抗CTLA-4人鼠嵌合抗体并进行活性鉴定。通过杂交瘤技术获得高亲和力小鼠抗人CTLA-4单克隆抗体22G11和16C11;利用分子克隆技术将鼠源抗体可变区基因与人源抗体恒定区拼接后,最终通过CHO-K1工程株细胞表达高亲和力抗CTLA-4嵌合抗体。经SDS-PAGE电泳显示最终获得了纯度高于90%的CTLA-4嵌合抗体c22G11和c16C11,抗原结合活性结果表明两株嵌合抗体都能很好地与Jurkat细胞结合,竞争抑制实验表明它们都能与各自对应的鼠源抗体竞争。据此,本实验获得了两株抗人CTLA-4胞外区的高亲和力和特异性嵌合抗体。
- 许静李晶杨扬郭怀祖钱卫珠张大鹏王皓
- 关键词：CTLA-4单克隆抗体免疫原性嵌合抗体
- 抗CD20人源化抗体的制备及生物学活性鉴定被引量：4
- 2009年
- 在前期实验中,我们制备了一株抗CD20的嵌合抗体c8F6并证实其可有效杀伤CD20阳性的B淋巴瘤细胞。为了进一步降低c8F6的免疫原性,在研究中我们采用同源模建的方法模拟8F6的三维结构,通过分析其空间结构,确定可能影响抗体与抗原结合的框架区(FR)氨基酸残基,然后将鼠源抗体互补决定区(CDR)和FR区的关键氨基酸移植到人源模板上,构建出人源化抗体hu8F6。此人源化抗体除CDR区外,仅含有11个鼠源残基,但具有与嵌合抗体相似的亲和力和特异性。体外生物学功能实验进一步表明,hu8F6具有与c8F6相似的补体依赖的细胞溶解作用(CDC)和抗体依赖细胞介导的细胞毒作用(ADCC),可有效杀伤人B淋巴瘤细胞Raji和Daudi,提示hu8F6有望发展成为一个用于B淋巴瘤治疗的低免疫原性抗体制剂。
- 杨扬张大鹏吴兰郭怀祖聂丽钱卫珠王皓李博华
- 关键词：人源化免疫原性同源模建
- 抗CD20嵌和抗体的体外生物学活性研究被引量：2
- 2010年
- c8F6是我们实验室制备的一株抗CD20的鼠/人嵌合抗体。本研究对c8F6的体外生物学活性进行了测定并与临床上使用的CD20抗体Rituximab进行了比较。实验结果表明,c8F6具有与Rituximab相似的抗原结合活性,抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用(ADCC),肿瘤细胞凋亡诱导活性及肿瘤细胞生长抑制作用。但c8F6的补体依赖性细胞毒作用(CDC)明显强于Rituximab,在10μg/ml浓度时c8F6对Daudi细胞和Raji细胞的杀伤率分别为91%和86%,而Rituximab的杀伤率分别为65%(Daudi细胞)和32%(Raji细胞)。研究结果提示,c8F6可能发展成为一个比Rituximab更为有效的用于治疗B细胞非霍奇金淋巴瘤的抗体制剂。
- 杨扬张大鹏郭怀祖吴兰聂丽钱卫珠李博华
- 关键词：CD20B细胞非霍奇金淋巴瘤
- 重组GluV8的克隆表达、纯化及酶学性质研究被引量：3
- 2014年
- 谷氨酰内切酶在生物制药及检测中应用较多,但来源受限,将全基因合成的金黄色葡萄球菌来源的谷氨酰内切酶功能区部分对应的基因进行改造后,克隆入表达载体pGEX-4T-2,导入E.coli BL21(DE3),重组蛋白以可溶性形式表达。采用亲和层析等纯化步骤对重组蛋白进行纯化,用底物Z-Phe-Leu-Glu-pNA(L-2135)对重组蛋白的酶学性质进行了研究,用HPLC、LC-MS/MS检测方法对酶切融合蛋白的位点特异性进行了鉴定。结果表明该酶的相对活性为1568U/mg,最适作用温度为42℃、最适作用pH为8.0,在pH 9.0,50℃时仍有较高的酶活,将该酶与胰酶酶切融合蛋白所得肽段结合能够提升质谱检测结果的精确度。以上结果表明该重组酶具有良好的应用前景。
- 段树燕郭怀祖李晶郑娟赵自叶张大鹏王皓
- 关键词：克隆酶学性质
- 抗体药物英夫利昔单抗结合TNFα的结构基础研究
- 肿瘤坏死因子α(TNFα)是一个炎症细胞因子，主要由活化的巨噬细胞和淋巴细胞产生，在急性炎症中扮演着中心角色，而且参与多种细胞事件，启动坏死或凋亡。另外，TNFα在成纤维细胞、平滑肌细胞和肿瘤细胞等其它细胞中也有少量表达...
- 郭怀祖
- 关键词：肿瘤坏死因子Α英夫利昔单抗晶体结构抗体药物
- 重组可溶性人IL-6的原核表达纯化和活性鉴定
- 2013年
- 使用大肠杆菌BL21(DE3)重组表达可溶性人IL-6并对其进行纯化和活性鉴定。以人激活T细胞总RNA为模板,逆转录PCR扩增人IL-6的基因片段并将其克隆到原核表达载体pET32a(+)中,重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),优化表达条件获得可溶性表达目的蛋白。细菌裂解上清经镍金属螯和层析纯化,SDS-PAGE鉴定其分子量大小,western blot鉴定其免疫原性,并通过IL-6依赖的细胞株T1165分析重组蛋白的活性。成功构建了pET32a(+)/IL-6表达载体,并获得了可溶性表达的重组人IL-6蛋白。SDS-PAGE显示,其分子量约为21kD,可被抗IL-6抗体特异性识别,并且该重组蛋白可刺激IL-6依赖的细胞株T1165增殖,比活性与标准品一致,约为1×106 U/mg。本实验获得了可溶性高表达的重组人IL-6蛋白,为进一步研究人IL-6奠定了基础。
- 刘彩艳赵自叶郑娟段树燕郭怀祖徐进王皓
- 关键词：IL-6原核表达纯化活性鉴定
- 靶向人表皮生长因子受体的抗体药物研究进展被引量：1
- 2015年
- 人表皮生长因子受体(EGFR)是肿瘤治疗,尤其是肿瘤的靶向治疗中重要的靶标。以其为靶点开发的抗体药物已经广泛用于癌症的治疗,尤其是转移性结直肠癌、头颈部癌症等的治疗。本文综述了靶向EGFR的抗体药物相关研究背景及最新研究进展,将为开发针对该靶点新型抗体提供参考。
- 杨赟彭晓芸李彦涛郭怀祖侯盛王皓
- 关键词：EGFR靶向治疗皮肤毒性
- 重组内肽酶AspN的原核表达纯化和活性鉴定
- 2015年
- 蛋白内肽酶AspN是一种锌金属内切肽酶,能选择性切割天冬氨酸的N端肽键,广泛应用于蛋白的多肽制备及质量肽图谱鉴定。目前内肽酶AspN来源于细菌分泌,产量低,制备困难,成本高,极大地限制了该酶的应用。将脑膜脓毒性黄杆菌分泌的蛋白内肽酶Asp N所对应的基因克隆入表达载体p ET32a,导入E.coli BL21(DE3),首次运用原核表达系统进行可溶性融合表达,亲和层析对重组蛋白进行纯化。用HPLC、SDS-PAGE和荧光底物Anthranilyl-Ala-Phe-Ala-Phe-Asp-Val-Phe(NO2)-Tyr-Asp对重组酶进行酶活鉴定。结果表明重组的内肽酶Asp N具有与标准品基本一致的酶切活性,能够较好地应用于生物和制药领域。
- 郑娟郭怀祖李晶段树燕赵自叶张大鹏郭尚敬王皓
- 关键词：原核表达纯化活性鉴定
