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侯艳玲
侯艳玲
作品数:
2
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供职机构:
扬州大学生物科学与技术学院
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发文基金:
国家自然科学基金
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相关领域:
生物学
农业科学
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合作作者
戴雪娟
扬州大学生物科学与技术学院
梁昌镛
扬州大学生物科学与技术学院
赵淑玲
扬州大学生物科学与技术学院
张高瞻
扬州大学生物科学与技术学院
李敏
扬州大学生物科学与技术学院
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赵淑玲
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侯艳玲
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张高瞻
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年份
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2012
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杆状病毒P6.9蛋白的表达及自身互作研究
2012年
目的:在大肠杆菌中表达苜蓿银纹夜蛾核多角体病毒P6.9蛋白并制备抗体,研究P6.9的自身互作。方法:用PCR方法扩增p6.9基因,将其分别克隆到原核表达载体pMAL-c2x、pGEX-4T-1、pET28a中,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。选取可溶性较好的融合蛋白纯化后免疫家兔制备抗体。然后利用该抗体进行Western blot检测、分析P6.9的自身互作。结果:构建了pMAL-P6.9、pGEX-P6.9、pET-P6.9三种原核表达质粒,分别在大肠杆菌中经IPTG诱导表达产生了与预期分子量相符的MBP-P6.9(49.4kDa)、GST-P6.9(32.9kDa)、HIS-P6.9(12.5kDa)融合蛋白。制备了P6.9的多克隆抗体,能与P6.9蛋白发生特异反应。Pull-down结果表明P6.9自身互作。结论:获得了兔抗P6.9的多克隆抗体,为深入研究P6.9的功能提供了检测工具。证明了P6.9之间的互作,说明该蛋白功能的发挥可能是通过多聚体起作用的。
梁昌镛
张高瞻
赵淑玲
李敏
戴雪娟
侯艳玲
关键词:
原核表达
抗体
酵母双杂交系统筛选与水稻条纹病毒Pc2互作的寄主蛋白基因片段
2012年
水稻条纹病毒编码的Pc2蛋白在病毒侵染及宿主症状发生中起作用。研究其与寄主间的分子互作有助于揭示病毒侵染与致病的分子机制。分别将编码Pc2N端(Pc2-N)与Pc2C端(Pc2-C)的基因片段克隆到酵母双杂交诱饵载体pGBKT7上.并构建水稻叶片cDNA文库.然后分别用Pc2-N和Pc2-C为诱饵筛选文库寻找与其互作的寄主因子。结果表明.诱饵载体中插入的Pc2-N和Pc2-C编码框和氨基酸序列均正确。Pc2-N对酵母菌株AHl09无毒性和自主激活能力,但Pc2-C对酵母具有细胞毒性。文库滴度为4x107CFU/mL.且大多数插入片段在500~2000bp之间。利用Pc2-N为诱饵筛选水稻cDNA文库.获得有8个候选阳性克隆。经序列测定和BLAST分析结果表明.这些克隆共编码5种蛋白.主要为胁迫相关蛋白与光系统相关蛋白。
梁昌镛
赵淑玲
侯艳玲
戴雪娟
关键词:
水稻条纹病毒
CDNA文库
酵母双杂交筛选
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