戴雪娟
- 作品数:3 被引量:0H指数:0
- 供职机构:扬州大学生物科学与技术学院更多>>
- 发文基金:国家自然科学基金江苏省自然科学基金更多>>
- 相关领域:生物学农业科学更多>>
- 缺失pk-1影响AcMNPV启动子表达的分析
- 2015年
- [目的]分析缺失pk-1对AcMNPV早期、晚期及极晚期基因表达的影响。[方法]将egfp基因片段分别插入到pFastBacDual载体上的p10和ph启动子下游,得到供体质粒pBac-Pp10-egfp和pBac-Pph-egfp。PCR扩增ie1、ie2、lef2、p6.9、vp39启动子片段,插入到pBac-egfp载体上的egfp基因上游,得到供体质粒pBac-Pie1-egfp、pBac-Pie2-egfp、pBac-Plef2-egfp、pBac-Pp6.9-egfp、pBac-Pvp39-egfp。将供体质粒分别转化含缺失pk-1基因的AcMNPV bacmid和Helper质粒的大肠杆菌DH10Bac中,得到一系列重组的AcMNPV bacmid。提取Bacmid DNA,转染Sf9细胞,转染120h后荧光显微镜下观察eGFP蛋白的表达。[结果]缺失pk-1后ie1、ie2、lef2、p6.9、vp39、p10、ph启动子均能启动下游egfp基因的表达。[结论]缺失pk-1不影响ie1、ie2、lef2、p6.9、vp39、p10、ph启动子启动的基因表达。
- 赵淑玲戴雪娟薛亚男郝佳慧
- 关键词:ACMNPV启动子
- 杆状病毒P6.9蛋白的表达及自身互作研究
- 2012年
- 目的:在大肠杆菌中表达苜蓿银纹夜蛾核多角体病毒P6.9蛋白并制备抗体,研究P6.9的自身互作。方法:用PCR方法扩增p6.9基因,将其分别克隆到原核表达载体pMAL-c2x、pGEX-4T-1、pET28a中,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。选取可溶性较好的融合蛋白纯化后免疫家兔制备抗体。然后利用该抗体进行Western blot检测、分析P6.9的自身互作。结果:构建了pMAL-P6.9、pGEX-P6.9、pET-P6.9三种原核表达质粒,分别在大肠杆菌中经IPTG诱导表达产生了与预期分子量相符的MBP-P6.9(49.4kDa)、GST-P6.9(32.9kDa)、HIS-P6.9(12.5kDa)融合蛋白。制备了P6.9的多克隆抗体,能与P6.9蛋白发生特异反应。Pull-down结果表明P6.9自身互作。结论:获得了兔抗P6.9的多克隆抗体,为深入研究P6.9的功能提供了检测工具。证明了P6.9之间的互作,说明该蛋白功能的发挥可能是通过多聚体起作用的。
- 梁昌镛张高瞻赵淑玲李敏戴雪娟侯艳玲
- 关键词:原核表达抗体
- 酵母双杂交系统筛选与水稻条纹病毒Pc2互作的寄主蛋白基因片段
- 2012年
- 水稻条纹病毒编码的Pc2蛋白在病毒侵染及宿主症状发生中起作用。研究其与寄主间的分子互作有助于揭示病毒侵染与致病的分子机制。分别将编码Pc2N端(Pc2-N)与Pc2C端(Pc2-C)的基因片段克隆到酵母双杂交诱饵载体pGBKT7上.并构建水稻叶片cDNA文库.然后分别用Pc2-N和Pc2-C为诱饵筛选文库寻找与其互作的寄主因子。结果表明.诱饵载体中插入的Pc2-N和Pc2-C编码框和氨基酸序列均正确。Pc2-N对酵母菌株AHl09无毒性和自主激活能力,但Pc2-C对酵母具有细胞毒性。文库滴度为4x107CFU/mL.且大多数插入片段在500~2000bp之间。利用Pc2-N为诱饵筛选水稻cDNA文库.获得有8个候选阳性克隆。经序列测定和BLAST分析结果表明.这些克隆共编码5种蛋白.主要为胁迫相关蛋白与光系统相关蛋白。
- 梁昌镛赵淑玲侯艳玲戴雪娟
- 关键词:水稻条纹病毒CDNA文库酵母双杂交筛选