刘文枝
- 作品数：82 被引量：123H指数：8
- 供职机构：中国水产科学研究院长江水产研究所更多>>
- 发文基金：国家现代农业产业技术体系建设项目中国水产科学研究院基本科研业务费专项基金中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>
- 相关领域：农业科学经济管理生物学自动化与计算机技术更多>>
- 一种黄鳝弹状病毒CrERV及RT-PCR检测引物及应用
- 本发明属于病毒检测领域，具体公开了一种黄鳝弹状病毒CrERV及RT‑PCR检测引物及应用，发明人首次从患病黄鳝幼苗中分离出了一种黄鳝弹状病毒，该病毒为黄鳝弹状病毒（Chinese rice‑field eel rhabd...
- 刘文枝曾令兵范玉顶周勇
- 文献传递
- 嗜水气单胞菌灭活疫苗免疫后大鲵外周血免疫指标的变化研究
- 以福尔马林灭活的嗜水气单胞(Aeromonas hydrophila)作为免疫原(F-AH)，通过腹腔注射免疫健康大鲵，剂量为0.5ml/尾，分别免疫后的第1、4、7、14、21、28天采集血液样品，进行大鲵外周血液的血...
- 杨星曾令兵刘文枝肖汉兵孟彦高正勇张辉
- 关键词：嗜水气单胞菌灭活疫苗吞噬活性
- 一种罗非鱼细小病毒TiPV LAMP检测引物及应用
- 本发明属于病毒检测领域，具体公开了一种罗非鱼细小病毒LAMP检测引物及应用，发明人从患病罗非鱼成鱼中分离出了一种细小病毒，该病毒为罗非鱼细小病毒（Tilapia parvovirus）TiPV，保藏编号为：CCTCC N...
- 刘文枝曾令兵范玉顶
- 含有甲基营养型芽孢杆菌的复合菌剂及在制备水产动物疾病的药物中的应用
- 本发明属于微生物的开发和应用领域，具体公开了含有甲基营养型芽孢杆菌的复合菌剂及在制备水产动物疾病的药物中的应用。所述的复合菌剂包括：甲基营养型芽孢杆菌YFI‑1、地衣芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌。本发明提供的复合菌剂对水产动物...
- 薛明洋周勇范玉顶孟彦江南刘文枝李逸群曾令兵
- 文献传递
- 鲤疱疹病毒Ⅱ型ORF25B编码蛋白诱饵载体的构建及其互作蛋白的筛选
- 2021年
- 【目的】鲤疱疹病毒Ⅱ型(Cyprinid herpesvirus 2,CyHV-2)感染养殖鲫引起的鲫造血器官坏死病,给鲫养殖业造成了重大的经济损失。揭示CyHV-2感染宿主细胞的机制,是建立鲫造血器官坏死病有效防治技术的重要基础。【方法】本研究针对CyHV-2富含抗原表位的ORF25B区域设计引物,扩增ORF25B基因截短序列。将扩增产物克隆至酵母双杂交诱饵载体pGBKT7,构建诱饵载体pGBKT7-tORF25B,转化至酵母菌株Y2HGold中。在营养缺陷型培养基上,验证诱饵表达载体pGBKT7-tORF25B对酵母菌Y2HGold自激活现象和毒性作用。利用酵母双杂交技术,将诱饵菌株pGBKT7-tORF25B/Y2HGold与鲫脑组织细胞系(GiCB)cDNA文库杂交。【结果】ORF25B基因截短序列扩增大小约为981 bp,成功构建了诱饵菌株pGBKT7-tORF25B/Y2H Gold,自激活和毒性验证结果表明,诱饵表达载体对酵母菌株无自激活现象,也无毒性作用,初步筛选出4种与tORF25B基因编码蛋白互作的宿主蛋白。【结论】本研究结果为深入开展CyHV-2 ORF25B编码蛋白功能及病毒入侵宿主细胞的机制研究奠定了重要基础。
- 聂细荣薛明洋林格李逸群范玉顶刘文枝孟彦江南曾令兵周勇
- 关键词：酵母双杂交诱饵载体
- 鲤浮肿病病毒环介导等温扩增(LAMP)检测方法的建立被引量：4
- 2019年
- 本研究针对鲤浮肿病病毒(carp edema virus,CEV)基因组核蛋白编码基因P4a的序列,设计2对特异性引物,以克隆构建的重组质粒为标准模板,通过优化反应体系中引物浓度组合、Mg2+浓度、dNTPs浓度、反应温度和扩增时间等参数,建立了CEV环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)检测方法。结果表明,CEV-LAMP方法的最佳反应温度为62℃,引物浓度组合为引物F3/B3 0.2μmol/L,引物FIP/BIP 1.2μmol/L,Betaine 0.7 mol/L,Mg2+8.0 mmol/L,dNTPs 1.2 mmol/L,反应时间60 min。反应产物经凝胶电泳呈现梯型条带,添加SYBR Green I荧光染料后,呈现明显的绿色阳性反应。CEV-LAMP法灵敏度高,最低检测限为10 copies/μL,较常规PCR法灵敏度高100倍;CEV-LAMP法特异性强,与锦鲤疱疹病毒(KHV)、鲤疱疹病毒Ⅱ型(CyHV-2)、鳜传染性脾肾坏死病毒(ISKNV)及鲤春病毒血症病毒(SVCV)无交叉反应。CEV-LAMP应用于患病鲤样本检测结果准确,简便快速,可为鲤浮肿病的现场诊断与防控提供技术支撑。
- 翟立文刘文枝许晨范玉顶江南周勇曾令兵
- 关键词：环介导等温扩增
- 一株湖北源大口黑鲈蛙病毒的分离鉴定被引量：2
- 2022年
- 采用电子显微镜观察和细胞培养等技术,从湖北黄陂某养殖场患病大口黑鲈(Micropterus salmoides)体内发现并分离到一株蛙病毒。患病大口黑鲈的临床症状主要表现为体表出血、溃疡,肝脏发白。将病鱼内脏组织匀浆超微滤液接种鳜脑细胞系(mandarin fish brain,MFB)细胞能产生典型细胞病变效应(cytopathic effect,CPE),病毒滴度达到10;TCID;/m L。细胞培养病毒的超薄切片电镜观察结果显示,细胞质中存在大量直径约为150 nm左右的正六边形病毒粒子,呈晶格排列。细胞培养病毒的人工感染大口黑鲈试验结果显示,7 d内试验鱼死亡率高达100%,其临床症状与自然发病鱼相似。采用大口黑鲈病毒(largemouth bass virus,LMBV)的特异性PCR检测方法对患病鲈组织样品和细胞培养病毒样品进行检测,均能扩增出241 bp的单一目的条带。进一步根据Gen Bank中LMBV主衣壳蛋白(major capsid protein,MCP)基因序列设计特异性引物,均能从上述样品中扩增出1392 bp的MCP基因开放阅读框(open reading frame,ORF)全长。将MCP氨基酸全序列进行比对,结果显示其与Santee-Cooper蛙病毒、孔雀鱼病毒6型及大口黑鲈溃疡综合征病毒的MCP氨基酸序列同源性高达100%。系统进化结果显示,与感染鱼类的虹彩病毒科蛙病毒属病毒,如鳜鱼蛙病毒、Santee-Cooper蛙病毒、孔雀鱼病毒6型和大口黑鲈溃疡综合征病毒等聚成一支。这些结果证明,该分离株为虹彩病毒科蛙病毒属的成员,暂命名为大口黑鲈蛙病毒(largemouth bass ranavirus,LMBRa V)湖北株LMBRa V-HB001。病毒敏感细胞系筛选试验结果表明,病毒LMBRa V-HB001感染鲤上皮瘤细胞(epithelioma papulosum cyprinid,EPC)、草鱼性腺细胞(grass carp ovary,GCO)、大鲵肌肉细胞(giant salamander muscle,GSM)和鲫脑组织细胞(gibel carp brain,Gi CB)均能产生典型CPE,病毒滴度可达10^(0.8)TCID_(50)/m L以上。本研究首次在湖北省养殖大口黑鲈体内分离与鉴
- 罗晓雯沈锦玉阳涛曾令兵周勇范玉顶刘文枝李逸群薛明洋孟彦江南
- 关键词：大口黑鲈细胞培养病毒分离鉴定
- 一种甲基营养型芽孢杆菌YFI-1及在制备水产细菌抑菌剂中的应用
- 本发明属于微生物的开发和应用领域，具体公开了及一种甲基营养型芽孢杆菌YFI‑1及在制备水产细菌抑菌剂中的应用。所述的甲基营养型芽孢杆菌YFI‑1的保藏编号为CCTCC NO：M2019651。本发明提供的甲基营养型芽孢杆...
- 薛明洋周勇范玉顶孟彦江南刘文枝李逸群曾令兵
- 文献传递
- 锦鲤疱疹病毒单交叉引物等温扩增检测方法的建立被引量：4
- 2015年
- 为建立一种操作简单、结果准确可靠、结果判定直观、成本低廉的现场快速检测方法,为锦鲤疱疹病毒（Koi herpes virus,KHV）疾病的防控提供技术支撑,根据KHV保守的DNA聚合酶（DNA polymerase,Sph）基因,设计一组单交叉扩增引物,以构建的Sph基因重组质粒作为标准DNA模板,采用单交叉引物等温扩增技术（single cross priming amplification,SCPA）进行扩增,优化反应体系的引物浓度组合、Mg2＋浓度、d NTPs浓度、反应温度和时间,并结合核酸试纸条技术（nucleic acid test strip detection method）,建立了快速可视化检测锦鲤疱疹病毒的单交叉引物等温扩增检测方法（KHV-SCPA）。结果表明,最佳引物浓度组合为引物2a1s1.0μmol/L,2a（2a-Bio）和3a（3a-FIT）各0.5μmol/L,4s和5a各0.6μmol/L,M g2＋浓度为8.0 mmol/L,d NTPs浓度为1.2 mmol/L,反应温度63℃,时间60 min。本实验扩增产物经凝胶电泳呈现梯形条带,可特异性地检测出KHV,灵敏度较常规PCR方法提高约1 000倍。带有探针的反应产物采用核酸试纸条检测,在3～5 min内即可通过条带出现与否对反应产物进行可视化检测。KHV-SCPA检测方法不依赖昂贵的仪器设备与专业技术人员,可应用于锦鲤疱疹病毒的现场快速检测中,为锦鲤疱疹病毒病的准确快速诊断和有效防控提供了技术支撑。
- 李聪慧徐进刘文枝周勇曾令兵
- 关键词：锦鲤疱疹病毒
- 一种乳酸菌复合菌剂及其在抗大鲵虹彩病毒中的应用
- 本发明涉及水产抗病毒微生态制剂技术领域，具体涉及一种乳酸菌复合菌剂及其在抗鲤疱疹病毒II型中的应用。本发明的复合菌剂，是有保藏编号为CCTCC NO：M2019655的鼠李糖乳杆菌和植物乳杆菌、拟干酪乳杆菌混配或混合发酵...
- 周勇薛明洋范玉顶孟彦江南刘文枝李逸群曾令兵
- 文献传递
