刘昆梅 作品数:46 被引量:60 H指数:5 供职机构: 宁夏医科大学 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 宁夏回族自治区自然科学基金 宁夏医科大学校级科研项目 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 轻工技术与工程 农业科学 更多>>
幽门螺旋杆菌重组尿素酶B亚基的纯化及其免疫学性质的研究(英文) 被引量:2 2014年 目的:幽门螺旋杆菌(Hp)尿素酶是Hp重要的定制因子和致病因子,Hp尿素酶活性位点位于Hp尿素酶B亚基(Ure B),研发基于Ure B的Hp疫苗是一种很有前景的防治Hp感染的策略。方法:主要利用基因克隆技术从幽门螺旋杆菌标准菌株SS1(Hp SS1)获得Hp尿素酶B亚基基因,并构建含有重组Hp尿素酶B亚基(rU reB)基因的重组表达载体p ET-rU re B及其重组菌株;重组菌株经蛋白表达和优化后,利用Ni-NTP镍离子亲和层析和DEAE Sepharose FF阴离子交换层析纯化重组尿素酶B亚基(rU re B),并进一步通过腹腔注射免疫BALB/c小鼠,研究rU re B的免疫学性质。结果:通过基因克隆技术成功获得了Hp尿素酶B亚基基因,并成功构建了重组表达载体p ET-rU re B及其重组菌株BL21(DE3)/p ET-rU re B,经蛋白表达优化及纯化,可获得高纯度(96.5%)的重组蛋白rU re B。重组蛋白rU re B辅以弗氏佐剂腹腔注射免疫BALB/c小鼠,经间接ELISA鉴定小鼠能够产生针对天然Hp尿素酶和Ure B的高滴度特异性抗体,且能够显著性抑制Hp尿素酶的活性。结论:重组Hp尿素酶B亚基能够在大肠杆菌表达系统中获得较高水平的表达,具有较高的免疫学特异性,其抗体能够有效抑制Hp尿素酶活性。为研究基于尿素酶的防治Hp感染的Hp疫苗奠定了一定的实验基础。 秦玉红 刘昆梅 廖国玲 杨华 徐广贤 李秀萍 郭乐关键词:幽门螺旋杆菌 尿素酶 幽门螺旋杆菌ATCC 43504感染BALB/c小鼠动物胃炎模型的建立及分析 被引量:4 2015年 利用幽门螺旋杆菌标准菌株建立稳定可靠的幽门螺旋杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染小鼠胃炎模型对Hp疫苗研制、Hp致病机制的研究及抗Hp药物的筛选具有重要意义。通过灌胃国际标准菌株幽门螺旋杆菌Hp ATCC 43504,构建了BALB/c小鼠动物胃炎模型。利用小鼠胃部Hp尿素酶活性检测、Hp的定量培养、PCR检测、组织病理学等多种方法鉴定BALB/c小鼠动物胃炎模型。通过Hp诊断试剂盒检测,造模组小鼠的胃组织能使Hp尿素酶试剂变色,呈现玫瑰红色,而健康小鼠的胃组织不能使Hp尿素酶试剂变色,依旧呈现黄色;通过小鼠胃组织匀浆液培养Hp,造模组小鼠的胃组织匀浆液均可在BHI血平板长出Hp菌落,而对照组小鼠的胃组织匀浆液不能培养出Hp菌落;利用PCR对造模组和对照组BALB/c小鼠的胃组织进行Hp检测,造模组小鼠胃组织可扩增出150 bp的DNA产物,而对照组小鼠胃组织无扩增产物;通过HE染色法观察小鼠胃部病理变化和炎症情况,与健康BALB/c小鼠比较,造模组小鼠胃粘膜和粘膜下层有大量白细胞浸润,胃部炎症明显。利用国际标准菌株Hp ATCC 43504菌株成功构建了BALB/c小鼠胃炎模型,为评价防治Hp感染药物的效果奠定了实验基础。 刘昆梅 刘宏鹏 郭乐关键词:幽门螺旋杆菌 胃炎模型 小鼠 幽门螺旋杆菌四价毒力因子GEM颗粒疫苗及制备方法与应用 本发明提供了幽门螺旋杆菌四价毒力因子GEM颗粒疫苗及制备方法与应用,属于生物医学及生物工程领域。本申请提供的幽门螺旋杆菌四价毒力因子GEM颗粒疫苗GEM‑SAM<Sup>E</Sup>‑FVpE,主要是将含有核心组件SA... 刘昆梅 郭乐 杨华 王淑娥 张帆 姜中佳M细胞靶向性重组乳酸菌疫苗及制备方法与应用 本申请提供了M细胞靶向性重组乳酸菌疫苗及制备方法与应用,属于生物医学及生物工程领域。本申请提供的M细胞靶向性重组乳酸菌疫苗,主要将幽门螺旋杆菌多表位肽WAE连接进靶向M细胞的重组乳酸菌表面展示系统,转化进乳酸菌,制备出可... 刘昆梅 郭乐 姜中佳 王淑娥 张帆 李元文献传递 幽门螺杆菌的免疫学检测技术及其主要抗原表位 2021年 目的了解幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)的免疫学检测技术和主要抗原表位及其应用,为临床诊断及生物技术药物开发提供参考。方法查阅相关文献并结合本课题组的研究,分析H.pylori的免疫学检测技术和主要抗原表位及其应用。结果基于抗原-抗体反应的免疫层析技术是H.pylori的主要体外检测技术。H.pylori特异性抗原是基于免疫反应H.pylori检测的关键,也是相关疫苗开发的关键。尿素酶(Ure)、细胞毒素相关蛋白A/L(CagA/L)、空泡毒素相关蛋白A(VacA)、中性粒细胞激活蛋白(NAP)是H.pylori致病性关键表面抗原和病理学基础。结论基于多种抗原(或抗体)的组合表位同时具备了高灵敏度和高特异性的优点,其在H.pylori诊断和疫苗及抗体等生物技术药物开发方面具有广阔的前景。 景荣先 刘昆梅 徐铠琳 邢以文 薛满 汤锋 郭乐 张国林幽门螺旋杆菌四价毒力因子GEM颗粒疫苗及制备方法与应用 本发明提供了幽门螺旋杆菌四价毒力因子GEM颗粒疫苗及制备方法与应用,属于生物医学及生物工程领域。本申请提供的幽门螺旋杆菌四价毒力因子GEM颗粒疫苗GEM‑SAM<Sup>E</Sup>‑FVpE,主要是将含有核心组件SA... 刘昆梅 郭乐 杨华 王淑娥 张帆 姜中佳文献传递 乌索酸通过抑制miR-21表达诱导肝癌HepG2细胞凋亡的机制 被引量:6 2015年 探讨乌索酸通过调控miR-21表达从而诱导肝癌HepG2细胞凋亡的作用机制。采用MTT方法检测乌索酸对肝癌细胞增殖的抑制作用;qPCR检测肝癌细胞中miR-21的表达水平及乌索酸对HepG2细胞中miR-21表达的调控作用;转染miR-21 mimics进HepG2细胞中上调miR-21的表达后,MTT、流式细胞检测法、RT-PCR方法分别分析miR-21在乌索酸对细胞的增殖、凋亡以及对凋亡相关基因的调控过程中的作用。结果显示,与肝正常细胞L-02以及肝癌SMCC-7721、Bel-7402细胞相比较,乌索酸对肝癌HepG2细胞的增殖抑制效果最强,且HepG2细胞中miR-21的表达水平最高。乌索酸可下调HepG2细胞中miR-21的表达,且在24 h的下调作用最强。miR-21的表达上调可以部分抵消乌索酸对HepG2细胞的抑制增殖及促进凋亡,部分抵消下调凋亡抑制基因Bcl-2、survivin表达和上调促凋亡基因Bax表达的作用。结果提示,乌索酸通过抑制miR-21的表达诱导肝癌HepG2细胞凋亡。 刘昆梅 郭乐 奚涛关键词:乌索酸 肝癌细胞 MIR-21 增殖 凋亡 靶向M细胞的重组乳酸菌表面展示系统、重组乳酸菌疫苗及制备方法与应用 本申请提供了靶向M细胞的重组乳酸菌表面展示系统、重组乳酸菌疫苗及制备方法与应用,属于生物医学及生物工程领域。本申请提供的靶向M细胞的重组乳酸菌表面展示系统,作为一种黏膜免疫投递工具,可用于表达多种来源不同的疫苗抗原,制备... 郭乐 刘昆梅 李元 王淑娥 刘宏鹏 姜中佳一种新型奥沙利铂衍生物5a的抗肿瘤活性研究及其机制探索 2013年 铂类配合物5a是从200多个新合成的铂类配合物中筛选得到。该文旨在研究其对多种肿瘤细胞的体外抗肿瘤作用,对正常细胞的毒性,同时对其抗肿瘤作用机制进行初步探讨。采用CCK8试剂盒检测5a对不同来源的肿瘤细胞的抑制作用。用透射电子显微镜观察5a作用后人结肠癌细胞HCT-116形态的变化。采用流式细胞术检测细胞凋亡及细胞内活性氧水平的变化,并通过Western blot检测相关凋亡蛋白表达。结果显示5a可以抑制多种肿瘤细胞的增殖,呈剂量依赖性。透射电镜和流式细胞术检测结果表明,5a能诱导HCT-116发生凋亡,并使细胞内活性氧水平显著提高。5a作用后的HCT-116细胞呈现典型凋亡特征,并促使细胞色素C从线粒体释放到胞浆内,从而激活Caspase-9。总之,配合物5a在体外显示了良好的抗肿瘤活性,有成为一种新一代铂类抗癌药物的潜能,并能诱导HCT-116细胞发生内源性凋亡。 鲍维维 王琰 谢美娟 刘昆梅 邢莹莹 奚涛关键词:铂类药物 抗肿瘤 线粒体 活性氧簇 幽门螺杆菌多价表位疫苗CWAE的表达及其免疫学性质的研究 被引量:1 2019年 目的:利用生物信息学软件评价幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)多价表位疫苗CWAE的抗原结构,经原核表达获得高纯度CWAE蛋白,进而鉴定多价表位疫苗CWAE的免疫学性质。方法:通过生物信息学软件分析H. pylori多价表位疫苗CWAE的抗原结构;用人工合成的H. pylori多价表位肽融合基因WAE替换重组质粒pET28a-CUE中的UE基因,构建重组质粒pET28aCWAE。然后,将pET28a-CWAE转入大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达,并通过Ni-NTP镍离子亲和层析纯化抗原蛋白CWAE;利用GM1-ELISA鉴定CWAE中CTB组分的黏膜免疫佐剂活性。最后,通过ELISA和小鼠脾脏淋巴细胞增殖实验检测CWAE激发BALB/c小鼠产生抗H.pylori抗体体液免疫和淋巴细胞免疫应答的能力。结果:通过生物信息学软件证实H. pylori多价表位疫苗CWAE具有科学合理的结构;重组表达质粒pET28a-CWAE经PCR、双酶切和基因测序鉴定,融合基因CWAE与设计序列完全一致;重组基因工程菌株pET28a-CWAE/BL21(DE3)经IPTG诱导表达,抗原蛋白CWAE主要以包涵体形式存在,经Ni-NTP镍离子亲和层析纯化,纯度约达93. 2%;GM1-ELISA实验证实,CWAE中CTB组分依旧保持有较好的黏膜佐剂活性;ELISA结果证实CWAE能够激发BALB/c小鼠产生H. pylori特异性抗体,而小鼠脾脏淋巴细胞增殖实验进一步证实CWAE能够激发针对H. pylori多种致病因子的淋巴细胞免疫反应。结论:H. pylori多价表位疫苗CWAE具有科学合理的抗原结构,经原核表达可获得高纯度抗原蛋白,能够激发BALB/c小鼠产生H. pylori特异性抗体体液免疫和淋巴细胞免疫应答。为研发防治H. pylori感染的多价表位疫苗奠定实验基础。 郭乐 郭乐 何萌 张帆 刘宏鹏 刘宏鹏关键词:幽门螺杆菌 特异性抗体