王聃
- 作品数：19 被引量：33H指数：4
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室更多>>
- 发文基金：中央级公益性科研院所基本科研业务费专项国家重点基础研究发展计划黑龙江省科技厅青年科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 利用Red重组系统敲除大肠杆菌菌株ClpP基因方法的研究被引量：1
- 2011年
- 为了研究ClpP基因的功能,试验利用Red系统的重组功能,通过PCR扩增出两端与大肠杆菌菌株ClpP基因上、下游序列同源,中间为氯霉素抗性基因cat的DNA片段,电击转化含质粒pKD46的大肠杆菌菌株DH091,筛选替换ClpP基因的阳性转化子,再导入质粒pCP20去除氯霉素抗性基因。结果表明:成功敲除大肠杆菌菌株ClpP基因。
- 司微刘慧芳王春来彭玮赫明雷杜艳芬赵海玲王聃杨金国林靖凯倪洪波刘思国
- 关键词：RED重组系统基因敲除
- 牛分枝杆菌Spoligotyping和VNTR-MIRU的基因分型研究被引量：1
- 2009年
- 为了探讨间隔区寡核苷酸分型(Spoligotyping)和数目可变串联重复序列-结核分枝杆菌散在分布重复单元(VNTR-MIRU)基因分型法用于国内牛分枝杆菌的基因分型研究,初步了解我国牛分枝杆菌基因型种类、分布以及2种方法在我国应用的可行性。本研究收集东北、西北、华北、华南4个地区分离的10株牛分枝杆菌分离株,分别采用Spoligotyping和VNTR-MIRU对这些分离株进行基因分型,比较两种方法的分型效果,评价其在牛分枝杆菌基因分型中的应用。结果表明,使用Spoligotyping方法,10株牛分枝杆菌呈现出4种基因型,使用VNTR-MIRU方法,10株分离株也呈现4种基因型;当两种方法联合使用时,可以分为5种基因型,其中的2个菌株具有独特的基因型,显示来自不同地区的牛分枝杆菌存在主要的流行型为BCG家族。将Spoligotyping和VNTR-MIRU联合使用,可有效提高牛结核病的分子流行病学调查和病原学的监测效果。
- 杜艳芬林靖凯刘思国王春来刘慧芳司微王聃赵海玲
- 关键词：牛分枝杆菌SPOLIGOTYPINGVNTR基因分型
- 利用体内诱导抗原技术检测胸膜肺炎放线杆菌体内表达基因
- 本研究利用体内诱导抗原技术(IVIAT)对胸膜肺炎放线杆菌(APP)体内表达的基因进行了研究。.将收集到的5份感染了APP1的猪血清混合,分别吸附体外培养的APP1和大肠杆菌DE3的全菌及全菌
- 刘慧芳刘思国王春来司微王聃杜艳芬赫明雷常月红
- 文献传递
- 胸膜肺炎放线杆菌体内表达基因的筛选被引量：8
- 2008年
- 利用体内诱导抗原技术对胸膜肺炎放线杆菌（APP）体内表达的基因进行了初步筛选。将收集到的5份感染了APP1型的猪血清混合．分别用体外培养的APP1和大肠杆菌BL21（DE3）的全菌及全菌裂解物进行吸附。用ELISA方法检测吸附效果，经吸附后血清D150nm分别由原来的0．927和0．239降低为0．196和0．078。同时,将APP1基因组DNA以Bsp143I进行酶切，回收500～2000bp的片段，与pET30a／b／c载体连接，构建了APP1基因组质粒表达文库，库容量（CFU）为2．0×10^5。用吸附后的血清通过菌落原位免疫杂交筛选该基因组表达文库，从3000个菌落中获得了12个阳性克隆。
- 刘慧芳刘思国王春来司微王聃杜艳芬赵海玲赫明雷
- 关键词：胸膜肺炎放线杆菌
- 牛分枝杆菌Spoligotyping和VNTR-MIRU的基因分型研究
- 为了探讨间隔区寡核苷酸分型(Spacer oligotyping,Spoligotyping)和数目可变串联重复序列-结核分枝杆菌散在分布重复单元(variable number tandem repeats-mycob...
- 杜艳芬林靖凯刘思国王春来刘慧芳司微王聃赵海玲
- 关键词：牛分枝杆菌SPOLIGOTYPINGVNTR基因分型
- 文献传递
- 牛分枝杆菌Spoligotyping和VNTR-MIRU的基因分型研究
- 为了探讨间隔区寡核苷酸分型(Spacer oligo-typing,Spiligotyping)和数目可变串联重复序列-结核分枝杆菌散在分布重复单元(Variable number tan-dem repeats-myc...
- 杜艳芬林靖凯刘思国王春来刘慧芳司微王聃赵海玲
- 文献传递
- 大肠杆菌“菌影”的制备被引量：4
- 2009年
- 通过PCR扩增噬菌体PhiX174的裂解基因E,将该基因连接到含有PR/cI启动阻遏系统的pBV220载体中,从而使裂解基因E和启动阻遏系统λPL/PR-cI857串联成为温度敏感的裂解盒,构建溶菌质粒pBV-E。采用CaCl2法将其转入大肠杆菌BL21(DE3),含有裂解质粒的大肠杆菌在28℃条件下生长到对数生长期,然后升温到42℃诱导其溶解,制成了大肠杆菌菌影。电镜观察发现菌影形态完整,内容物全部被释放到胞外。
- 彭玮王聃刘思国常月红王春来刘慧芳司薇赫明雷杜艳芬
- 关键词：大肠杆菌
- 哈尔滨市鲜肉中单核细胞增生性李斯特菌的分离鉴定及耐药性分析被引量：4
- 2009年
- 为了解哈尔滨市单核细胞增生性李斯特菌(Lm)的污染状况及耐药状况。在哈尔滨市市场随机采集158份鲜肉样品,采用显色培养基分离,API试剂条和PCR鉴定等方法对样品中的Lm进行分离鉴定,并通过Kirby-Barer法测定分离菌株对24种抗生素的耐药性。结果从鲜肉中共分离到Lm23株,检出率为14.56%,其中鲜猪肉检出率最高,达20.00%(14/70);23株分离菌株中耐药菌株为22株,耐药率高达95.65%。这表明哈尔滨市鲜肉中存在一定程度的Lm污染,并且分离菌株存在较严重的耐药现象。应加强控制动物饲料亚治疗抗生素的使用并严格遵守休药期,防止耐药菌株产生进而控制食源性疾病的发生。
- 尹录杜艳芬赫明雷司微刘慧芳王春来彭玮王聃李继昌邵美丽刘思国
- 关键词：鲜肉单核细胞增生性李斯特菌耐药性
- 猪传染性胸膜肺炎放线杆菌“菌影”的制备被引量：11
- 2008年
- 本试验通过PCR扩增噬菌体PhiX174的裂解基因E,将该基因连接到含有λPL/PR-cI857启动阻遏系统的pBV220载体中,从而使裂解基因E和启动阻遏系统λPL/PR-cI857串联成为温度敏感的裂解盒,构建重组质粒pBV-E。再将含有E基因的裂解盒插入到App-E.coli穿梭载体pGZRS-18中,构建胸膜肺炎放线杆菌打孔质粒。采用电击穿孔法将其转入胸膜肺炎放线杆菌中,含有打孔质粒的胸膜肺炎放线杆菌在28℃条件下生长到对数生长期,升温42℃诱导E基因的表达,制备了胸膜肺炎放线杆菌菌影。电镜观察菌影形态完整,内容物全部被释放到胞外。本试验为进一步研究菌影这一新型菌苗及佐剂奠定了基础。
- 常月红刘思国王春来刘慧芳司薇彭玮王聃赫明雷杜艳芬
- 关键词：胸膜肺炎放线杆菌
- 放线杆菌外膜蛋白酵母双杂交诱饵质粒的构建及自激活与毒性检测被引量：1
- 2010年
- 为了筛选胸膜肺炎放线杆菌外膜蛋白在肺泡上皮细胞上的作用受体,应用酵母双杂交技术构建诱饵质粒载体pGBKT7-omp(胸膜肺炎放线杆菌外膜蛋白),从胸膜肺炎放线杆菌提取基因组DNA,用PCR方法获得omp,克隆于pGBKT7载体上,进行酶切鉴定及序列分析,并检测pGBKT7-omp在酵母双杂交系统中的自激活和毒性作用。结果表明,成功构建了诱饵质粒载体pGBKT7-omp,并证明其在酵母双杂交系统中无自激活及毒性作用。表明pGBKT7-omp可应用在酵母双杂交系统中,用于寻找猪肺泡上皮细胞cDNA文库中与omp相互作用的蛋白质。
- 倪宏波刘思国杜艳芬林靖凯刘慧芳王春来司薇常月红彭玮王聃赫明雷
- 关键词：胸膜肺炎放线杆菌外膜蛋白自激活作用
