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热稳定胆固醇酯酶突变体OPE-A355E/T383E及其制备方法: 本发明提供热稳定胆固醇酯酶突变体OPE‑A355E/T383E及其制备方法，所述突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明利用FoldX等软件，结合热稳定胆固醇酯酶...; 舒正玉林红董宛阡黄建忠

理性设计盐桥构建伯克霍尔德菌脂肪酶热稳定突变体被引量：1: 2017年; 【目的】借助蛋白质工程技术提高伯克霍尔德菌ZYB002脂肪酶LipA的热稳定性,以期更好地将其应用于工业生产中。【方法】利用YASARA、Fold X、Rosetta、Gromacs等生物信息学软件,构建1个脂肪酶Lip A的热稳定性提高的微型突变体电子文库;通过对突变体的结构信息和自由能变化进行评估,筛选出潜在的有价值的突变体。继而利用基因定点突变技术,构建上述候选突变体的突变基因文库,通过实验筛选出热稳定性提高的脂肪酶LipA突变体。【结果】利用上述方法,从构建的20个脂肪酶LipA突变体中,筛选到热稳定性有显著提高的3个突变体LipA-Asn^(125)Asp、LipA-Asn^(125)Glu和LipA-Gln^(262)Glu。经55°C处理12 min后,上述3个突变体的T1250值较野生型分别提高4.0°C、5.5°C和4.4°C;在55°C下的半衰期较野生型分别提高了2.2倍、3.8倍和2.6倍。【结论】利用生物信息学软件,构建脂肪酶LipA突变体电子文库,结合蛋白质的结构信息,可以快速筛选到热稳定性提高的脂肪酶LipA突变体。; 刘艳如赵丙春董盼盼邱黎清黄建忠朱晓兰王作镇舒正玉

海洋破囊壶菌Thraustochytrium sp．FJN-10 DHA生物合成途径相关延长酶的克隆与表达被引量：11: 2008年; 二十二碳六烯酸(Docosahexaenoic acid,DHA)是具有各种重要生理功能的高度不饱和脂肪酸。以海洋真菌Thraustochytrium sp.FJN-10为研究对象,利用RT-PCR结合RACE,获得了两个碳链延长酶(TFD6和TFD5)的完整基因,其中TFD6 cDNA全长816 bp,编码271个氨基酸;TFD5 cDNA全长831 bp,编码276个氨基酸。将TFD6、TFD5酶切后分别连接到HindⅢ/XbaⅠ处理过的pYES2载体,醋酸锂法转化酿酒酵母感受态细胞,成功构建了延长酶酵母表达系统。气相色谱分析表明TFD6可延长C18:3n-6至C20:3n-6,TFD5可延长C20:5n-3至C22:5n-3。; 江贤章秦丽娜田宝玉舒正玉黄建忠; 关键词：高度不饱和脂肪酸二十二碳六烯酸破囊壶菌

响应面法优化有机溶剂极端耐受性菌株 Burkholderia sp.ZYB002产脂肪酶条件: 2009年; Burkholderia sp.脂肪酶具有较高的有机溶剂耐受性和转酯活性,广泛应用于手性化合物的拆分。本研究利用统计学方法对一株具有有机溶剂极端耐受性的脂肪酶高产菌株Burkholderia sp.ZYB002在摇瓶培养条件下产脂肪酶条件进行了优化。通过单因素实验,首先确定了最适碳源、氮源、诱导剂等。以Plackett-Burrman设计筛选影响Burkholderia sp.ZYB002产酶的主要因素,通过最陡爬坡实验和响应面分析法确定产酶最适条件。K_2HPO_4、大豆油乳化液和起始pH确定为影响菌株产酶的3个主效因素。最佳产酶条件为:糊精0.3%(W/V),牛肉膏2.0%(W/V),MgSO_4.7H_2O 0.075%(W/V),K_2HPO_40.14%(W/V),大豆油乳化液4.89%(V/V),pH 8.11,玻璃珠10颗/瓶,接种量2.0%(V/V),30℃,250r/min,发酵时间22h。在此条件下,发酵液脂肪酶酶活最高达45.6U/mL,较发酵基本培养基发酵液的脂肪酶酶活提高了3.44倍。; 张岩峰舒正玉张欢欢田宝玉江贤章黄建忠; 关键词：BURKHOLDERIA 脂肪酶

热稳定胆固醇酯酶突变体OPE-D136P及其制备方法: 本发明提供热稳定胆固醇酯酶突变体OPE‑D136P及其制备方法，所述突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明利用FoldX等软件，结合热稳定胆固醇酯酶突变体自由能的变化值，构建突变体电...; 舒正玉林红董宛阡黄建忠

破囊壶菌△4-脂肪酸脱饱和酶基因5′端侧翼区域的克隆与鉴定: 二十二碳六烯酸(Docosahexaenoic acid,简称DHA)是目前发现的碳链最长、不饱和度最高的ω-3长链高度不饱和脂肪酸(Long-chain polyunsaturated fatty acids,Lc-P...; 江贤章陈金卿田宝玉高媛媛舒正玉李欣蓝灿华黄建忠; 关键词：破囊壶菌启动子绿色荧光蛋白; 文献传递

细菌脂肪酶的结构和功能研究进展被引量：24: 2006年; 细菌脂肪酶是一类广泛应用于工业领域的生物催化剂,具有重要的应用价值。迄今为止,已有7个细菌脂肪酶的三维结构被阐明,30个细菌脂肪酶的基因序列被测定和分析。作者综述了细菌脂肪酶的分子结构、分泌和折叠过程及其催化机制。; 闫云君舒正玉杨江科; 关键词：脂肪酶分子结构分泌过程

黑曲霉F044脂肪酶的分离纯化及酶学性质研究被引量：43: 2007年; 黑曲霉F044脂肪酶发酵上清液经硫酸铵沉淀、透析、DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换层析和Sephadex G-75凝胶过滤层析得到电泳纯的脂肪酶，纯化倍数为73．71倍，活性回收率为34％。对纯化脂肪酶性质研究表明：该脂肪酶分子量约为35～40kD，水解橄榄油的最适温度和最适pH分别为45℃和7．0，在60℃以下和pH2．0～9．0之间有很好的稳定性。该脂肪酶的水解活性对Ca^2＋表现明显的依赖性，而Mn^2＋、Fe^2＋和Zn^2＋对脂肪酶则有显著的抑制作用。在最适条件下水解pNPP的Km和Vmax分别为7．37mmol／L和25．91μmol／（min·mg）。其N-端的15个氨基酸序列为Ser（Glu／His）-Val-Ser-Thr-Ser-Thr-Leu-Asp-Glu-Leu-Gln-Leu-Phe-Ala-Gln。; 舒正玉杨江科闫云君; 关键词：黑曲霉脂肪酶分离纯化理化性质

耐受过氧化氢的枯草芽胞杆菌脂肪酶突变体及其制备方法: 本发明提供了耐受过氧化氢的枯草芽胞杆菌脂肪酶突变体及其制备方法，脂肪酶突变体多肽链的氨基酸序列及其基因序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。本发明还包含了所含的脂肪酶突变基因的重组质粒及转化子。本发明...; 舒正玉江虹林红黄建忠; 文献传递

生物柴油生产用脂肪酶资源及研发现状被引量：18: 2007年; 归纳分析了目前生物柴油酶法生产工艺中使用的脂肪酶种类、国内外产品市场供求情况,并重点介绍了南极假丝酵母脂肪酶、洋葱假单胞菌脂肪酶以及米根霉脂肪酶的研发现状。; 舒正玉杨江科黄瑛闫云君; 关键词：生物柴油脂肪酶

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