马民强
- 作品数：3 被引量：8H指数：1
- 供职机构：中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国际科技合作与交流专项项目卫生部艾滋病防治应用性研究项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学化学工程更多>>
- HIV-1 CN54 Gag P55和P24蛋白的高效表达、纯化和鉴定被引量：7
- 2004年
- 目的 探讨HIV 1中国株CN5 4GagP5 5和P2 4重组蛋白的高效表达并纯化 ,为研究HIV疫苗和诊断试剂创造条件。方法 分别将CN5 4GagP5 5和P2 4基因克隆至 pBV2 2 0和 pThioHisC载体 ,构建非融合表达载体 ;将重组质粒转化大肠杆菌BL2 1codonplus RIL ,对工程菌进行诱导表达。Western Blot检测目的蛋白 ,用DEAE SeparoseFF阴离子交换层析柱纯化目的蛋白 ;纯化的P5 5和P2 4抗原蛋白分别包被酶标板作ELISA检测。结果 P5 5以包涵体的形式表达 ,表达量占菌体总蛋白的 30 % ,P2 4实现了可溶性表达 ,表达量占总菌体总蛋白的4 0 % ;纯化后P5 5纯度达到 80 % ,P2 4纯度超过 90 %。Western Blot和ELISA检测均显示了良好的的灵敏度和特异性。结论 HIV 1CN5 4GagP5 5和P2 4抗原蛋白可在大肠杆菌中高效表达 ,纯化的抗原蛋白具有良好抗原性 。
- 王道毅刘勇郝彦玲马民强傅晶晶李海山王贻杰陈静娴邵一鸣
- 酵母表达的HIV-1中国株CN54 Gag蛋白的免疫原性研究被引量：1
- 2004年
- 目的 评价毕赤酵母表达的HIV 1中国株CN5 4Gag蛋白在Balb c小鼠诱导体液和细胞免疫的能力。方法 利用重组Gag蛋白单独及与重组DNA或痘苗联合免疫Balb c小鼠 ,检测小鼠产生的特异性结合抗体和IgG1 IgG2a ,同时检测T淋巴细胞增殖反应和CTL反应。结果 3个蛋白单独免疫组均能诱导小鼠产生抗体和T淋巴细胞增殖反应 ,其中不加佐剂的免疫组诱导免疫反应低于其它两组。但 3组的CTL杀伤活性均不明显。重组蛋白和重组DNA及痘苗联合免疫均诱导产生了较好的体液和细胞免疫反应 ,而且重组痘苗初始免疫 蛋白加强免疫组还诱导产生了较强的CTL反应。结论 酵母表达的HIV 1Gag蛋白具有良好的免疫原性 ,在与重组DNA和痘苗疫苗联合使用时具有协同作用 ,能刺激动物产生更强的HIV 1特异性体液和细胞免疫反应。本研究为构建HIV 1蛋白疫苗和探讨各类疫苗的联合免疫方式提供了有价值的参考数据。
- 郝彦玲马民强李海山黄灿平周克民刘勇洪坤学邵一鸣
- 关键词：酵母HIV-1GAG免疫原性
- HIV-1中国株CN54 Gag蛋白在毕赤酵母中的表达纯化和鉴定被引量：1
- 2005年
- 目的 利用毕赤酵母表达系统高效表达HIV 1中国株CN5 4的Gag蛋白,初步确立发酵和纯化工艺。方法 PCR扩增CN5 4Gag基因,插入毕赤酵母表达载体pPS1 0 ,电转化毕赤酵母菌株GS115 ,G4 18筛选高表达工程菌,利用5L发酵罐进行高密发酵,通过SPSepharoseFF和DEAESeparoseFF柱层析,用HIV 1阳性血清和p2 4抗原检测试剂盒对纯化后的Gag蛋白进行免疫学性质的鉴定。结果 构建了高效表达CN5 4Gag蛋白的毕赤酵母工程菌株,发酵罐培养的菌体密度吸光度(A6 0 0 值)超过30 0 ,Gag蛋白表达量达到12 0mg L。纯化后的Gag蛋白纯度高于90 % ,p2 4检测强阳性并能够与HIV 1阳性血清发生特异的抗原抗体结合反应。结论 本研究在毕赤酵母中高效表达了HIV 1中国株CN5 4的Gag蛋白,并进行了纯化和鉴定,为针对我国新一代HIV蛋白亚单位疫苗的研制奠定了基础。
- 郝彦玲马民强傅晶晶李海山王贻杰刘颖吴岚刘勇邵一鸣
- 关键词：GAG蛋白HIV-1中国株SEPHAROSEGAG基因免疫学性质
