张昕
- 作品数：2 被引量：0H指数：0
- 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院更多>>
- 发文基金：国家重大基础研究前期研究专项国家高技术研究发展计划国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 一个可能与T细胞发育相关的新的C2H2型锌指蛋白基因的克隆(英文)
- 2004年
- 一些在组织和细胞分化中起重要作用的蛋白质包含锌指结构域 .为了克隆分离和研究与造血细胞分化和发育成熟相关的蛋白基因 ,利用编码C2H2型锌指蛋白结构域中部分保守氨基酸序列设计简并引物 ,以骨髓cDNA为模板 ,进行PCR扩增 ,得到若干新的锌指蛋白基因EST .用其中一条为探针筛选人骨髓cDNA文库 ,获得了一个新的锌指蛋白基因全长cDNA ,GenBank收录号为AF2 4 6 12 6 ,长 3888bp ,包括一个完整阅读框 ,编码 6 86个氨基酸 ,包括 17个典型的和 2个非典型的C2H2模体 ,命名为HZF2 .RNA印迹、人多组织mRNA斑点杂交分析结果显示 ,其在T淋巴细胞发育和定居的器官组织胸腺、淋巴结中有较高表达 ,在脾脏、胎肝有中度表达 ,在B淋巴细胞发育的骨髓中表达很低 ,在外周血几个淋巴细胞系中仅有极微量的表达 ,提示HZF2可能对于T淋巴细胞发育和增殖有重要功能 .该基因也在脑组织的若干部位、胎盘及肾上腺有较高表达 ,在多种其他组织细胞有微量表达 ,说明其可能对维持这些组织细胞的生理功能也起一定作用 .将编码HZF2读框的DNA顺序克隆到pEGFP N1载体中 ,转染 3T3细胞 ,证明表达的HZF2 GFP融合蛋白定位于细胞核 ,这与根据HZF2蛋白结构推测其可能作为DNA结合蛋白行使调节基因转录的功能是一致的 .
- 杜占文张昕张俊武
- 关键词：锌指蛋白表达谱T细胞发育
- HZF1在大肠杆菌中的表达及多克隆抗体的制备
- 2007年
- 目的在大肠杆菌中表达HZF1融合蛋白,制备抗HZF1抗体。方法构建包含编码HZF1非锌指区DNA的重组表达质粒pET30a-HZF1,转化大肠杆菌并用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导表达相应的融合蛋白,采用镍柱纯化。以纯化蛋白作为免疫抗原,对新西兰大白兔实施多次免疫(间隔时间分别为3、2和2周)。用ELISA和Westernblot检测抗体效价和特异性。结果获得兔抗HZF1抗体,经过ELISA检测,效价在1:100000以上。Westernblot显示兔抗HZF1抗体能够特异性检测氯高铁血红素诱导的K562细胞中的HZF1蛋白。结论得到高特异性的兔抗HZF1抗体,为HZF1的功能研究以及组织和细胞中HZF1的检测奠定了一定基础。
- 彭瀚张昕杜占文张俊武
- 关键词：原核表达抗体
