杜占文
- 作品数：5 被引量：26H指数：2
- 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院更多>>
- 发文基金：国家教育部博士点基金国家自然科学基金国家重大基础研究前期研究专项更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 一个可能与T细胞发育相关的新的C2H2型锌指蛋白基因的克隆(英文)
- 2004年
- 一些在组织和细胞分化中起重要作用的蛋白质包含锌指结构域 .为了克隆分离和研究与造血细胞分化和发育成熟相关的蛋白基因 ,利用编码C2H2型锌指蛋白结构域中部分保守氨基酸序列设计简并引物 ,以骨髓cDNA为模板 ,进行PCR扩增 ,得到若干新的锌指蛋白基因EST .用其中一条为探针筛选人骨髓cDNA文库 ,获得了一个新的锌指蛋白基因全长cDNA ,GenBank收录号为AF2 4 6 12 6 ,长 3888bp ,包括一个完整阅读框 ,编码 6 86个氨基酸 ,包括 17个典型的和 2个非典型的C2H2模体 ,命名为HZF2 .RNA印迹、人多组织mRNA斑点杂交分析结果显示 ,其在T淋巴细胞发育和定居的器官组织胸腺、淋巴结中有较高表达 ,在脾脏、胎肝有中度表达 ,在B淋巴细胞发育的骨髓中表达很低 ,在外周血几个淋巴细胞系中仅有极微量的表达 ,提示HZF2可能对于T淋巴细胞发育和增殖有重要功能 .该基因也在脑组织的若干部位、胎盘及肾上腺有较高表达 ,在多种其他组织细胞有微量表达 ,说明其可能对维持这些组织细胞的生理功能也起一定作用 .将编码HZF2读框的DNA顺序克隆到pEGFP N1载体中 ,转染 3T3细胞 ,证明表达的HZF2 GFP融合蛋白定位于细胞核 ,这与根据HZF2蛋白结构推测其可能作为DNA结合蛋白行使调节基因转录的功能是一致的 .
- 杜占文张昕张俊武
- 关键词：锌指蛋白表达谱T细胞发育
- 用RACE结合cDNA文库筛选的方法获取新的锌指蛋白基因被引量：22
- 2002年
- 大多数有重要功能的蛋白质都含相应的由保守氨基酸顺序组成的功能结构域。本文首先根据蛋白质功能结构域保守氨基酸序列设计简并引物 ,用PCR方法扩增出基因EST序列 ,再利用改进的快速扩增cDNA末端(RACE)方法从cDNA文库中扩增出基因非同源部位 ,然后以非同源序列为探针 ,筛选cDNA文库。利用此方法成功地从人骨髓cDNA文库中克隆到几个编码锌指蛋白并代表原有EST的新的全长cDNA。这一策略也应适用于筛选编码具有其他序列保守性功能结构域蛋白的基因。
- 杜占文刘立仁张俊武
- 关键词：RACECDNA文库锌指蛋白基因新基因
- HZF1在大肠杆菌中的表达及多克隆抗体的制备
- 2007年
- 目的在大肠杆菌中表达HZF1融合蛋白,制备抗HZF1抗体。方法构建包含编码HZF1非锌指区DNA的重组表达质粒pET30a-HZF1,转化大肠杆菌并用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导表达相应的融合蛋白,采用镍柱纯化。以纯化蛋白作为免疫抗原,对新西兰大白兔实施多次免疫(间隔时间分别为3、2和2周)。用ELISA和Westernblot检测抗体效价和特异性。结果获得兔抗HZF1抗体,经过ELISA检测,效价在1:100000以上。Westernblot显示兔抗HZF1抗体能够特异性检测氯高铁血红素诱导的K562细胞中的HZF1蛋白。结论得到高特异性的兔抗HZF1抗体,为HZF1的功能研究以及组织和细胞中HZF1的检测奠定了一定基础。
- 彭瀚张昕杜占文张俊武
- 关键词：原核表达抗体
- 应用简并引物RT-PCR扩增锌指结构域筛选新基因被引量：4
- 2001年
- 目的 应用简并引物RT-PCR扩增并克隆TF-ⅢA型锌指蛋白基因表达序列标签（EST），以最终获得新的锌指蛋白基因。方法分别用TPA和Hemin诱导人红白血病（HEL）细胞，提取总RNA。根据TF-ⅢA型锌指蛋白保守序列设计简并引物，并以之进行RT-PCR扩增，然后将其克隆到pGEM-T easy载体中测序，应用DNAsis软件分析序列并通过GenBank blast进行序列比较。结果克隆并测序了30个扩增片段，22个是锌指蛋白基因的EST,其中17个是新的锌指蛋白基因EST。结论应用简并引物RT-PCR克隆一些具有保守氨基酸顺序结构域的蛋白基因EST是可行的，并具有简便、高效等优点。此外，还可有目的地克隆一些具有重要功能结构域的蛋白质基因。
- 杜占文张俊武
- 关键词：锌指蛋白RT-PCR基因克隆
- 两个编码C2H2型锌指蛋白新基因的克隆、表达及初步功能分析
- 真核生物的发育以及细胞和组织分化本质上是由基因的特异表达实现的。转录调节蛋白在基因的表达调控中具有十分重要的作用。这类蛋白的一个重要特征是其DNA结合结构域常具有典型的组成和结构。
锌指蛋白...
- 杜占文
- 关键词：全长CDNA克隆锌指结构域
- 文献传递
