龚曼曼
- 作品数：3 被引量：3H指数：1
- 供职机构：北京肿瘤医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- P37腺病毒表达载体的构建及对乳癌细胞的促迁移作用被引量：1
- 2007年
- 胃癌组织中存在着较高的猪鼻支原体感染率,而P37是猪鼻支原体的主要免疫原.以往研究表明,P37能抑制肿瘤细胞的黏附,促进肿瘤细胞浸润和转移.为了更好地研究P37在肿瘤发生和转移中的功能,通过基因克隆的方法,利用Ad-easy体系,在细菌BJ5183中同源重组后,转染293细胞,成功包装出重组P37腺病毒.它能有效感染乳腺癌细胞BICR.通过RT-PCR和蛋白质印迹检测表明,感染重组P37腺病毒后的BICR细胞能大量表达并分泌P37蛋白.运用该腺病毒体系进行细胞迁移实验表明,P37能显著增强BICR细胞的体外迁移能力.
- 龚曼曼孟麟寿成超
- 关键词：腺病毒支原体肿瘤迁移
- 四环素调控型猪鼻支原体蛋白P37表达细胞系的建立被引量：2
- 2005年
- 目的建立四环素调控型猪鼻支原体蛋白P37的表达细胞系,为研究p37对细胞表型的影响及相关机制奠定基础。方法构建pcDNA5/FRT/TO-p37重组质粒,酶切鉴定后用脂质体方法将质粒与重组酶表达载体pOG44共转染Flp-In-T-REx-293细胞,用Hygromycin和Blasticidin双药筛选出阳性克隆,分别提取细胞总RNA和总蛋白,应用反转录-聚合酶链反应(reverse transcriptase polymerase chain reaction,RT-PCR)和Western印迹对其表达进行鉴定,并确定四环素诱导的最适时间和浓度。通过噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)检测P37对细胞增殖的影响。结果转染pcDNA5/FRT/TO-p37的Flp-In-T-REx-293细胞克隆能成功表达P37蛋白(相对分子质量为43.5×103),且能将该蛋白分泌至胞外。四环素对其表达显示出明显的调控作用,不加四环素的细胞不表达P37蛋白。四环素质量浓度在2mg/L并作用60h其表达水平即可达到最高峰。P37的表达对细胞增殖具有一定的促进作用。结论已建立受四环素调控的P37高效表达细胞系,为进一步研究p37的功能和作用机制提供了实验细胞模型。
- 龚曼曼孟麟刘文斌张建芝寿成超
- 关键词：四环素支原体属细胞系
