周进宏 作品数:16 被引量:45 H指数:4 供职机构: 西安建筑科技大学环境与市政工程学院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 国家科技重大专项 陕西省教育厅科研计划项目 更多>> 相关领域: 环境科学与工程 更多>>
城市污水中人类星状病毒的检测及变化规律 被引量:3 2014年 人类星状病毒是典型的水媒病毒,可引起腹泻等疾病.为了明确污水中人类星状病毒的分布及去除规律,利用常规PCR和定量PCR方法对西安市3个污水处理厂的进水和出水进行了为期1 a的监测;采用特异性引物,确立了人类星状病毒在环境水体中的定性PCR和荧光定量PCR的检测方法.结果表明,人类星状病毒在进水和未消毒二级出水中呈较高的阳性率,分别为91.5%和36.6%.经过核苷酸测序鉴定,人类星状病毒的主要血清型为HAst V-1和HAst V-4.人类星状病毒在进水和未消毒二级出水中的平均浓度分别为1.47×104和1.03×103copies/mL,污水处理厂对人类星状病毒的去除率为93.15%.污水处理厂进水中人类星状病毒浓度呈季节性变化,春季和冬季较高,夏季和秋季较低,这一分布规律与该地区历年人类星状病毒的流行规律相似. 周进宏 王晓昌 张崇淼关键词:常规PCR 实时定量PCR 城市生活污水 污水处理厂 紫外线和次氯酸钠对Escherichia coli和Poliovirus的消毒作用 被引量:9 2017年 本研究选用大肠杆菌(Escherichia coli)和脊髓灰质炎病毒(poliovirus)分别作为典型的细菌和病毒,利用培养和定量PCR的检测技术,对比研究紫外线消毒和次氯酸钠消毒对细菌和病毒的作用特点.结果表明:脊髓灰质炎病毒比大肠杆菌更难被灭活,达到1-log所需的氯剂量分别为19.2 mg·L^(-1)·min和10.14 mg·L^(-1)·min;所需的紫外线剂量分别为6.37 m J·cm^(-2)和1.81 m J·cm^(-2).定量PCR方法检测大肠杆菌和脊髓灰质炎病毒达到1-log的核酸损伤所需的紫外线剂量和氯剂量要比培养法高出1~2数量级,紫外线消毒对脊髓灰质炎病毒的RNA损伤量明显大于对大肠杆菌的DNA损伤,病毒的单链RNA对紫外线的敏感性更强,该结果与培养法正好相反.达到1-log核酸损伤脊髓灰质炎病毒所需的紫外线剂量为135 m J·cm^(-2),大肠杆菌所需的剂量为270.3 m J·cm^(-2),核酸损伤需要更多的消毒剂量,可能由于消毒过程微生物进入活性但处于非可培养状态(VBNC),以及灭活对微生物其他分子的损伤和微生物死后核酸的持续性. 徐丽梅 张崇淼 王晓昌 吉铮 周进宏关键词:紫外线 氯消毒 一种环境水体中EV71病毒的检测方法 本发明公开了一种环境水体中EV71病毒的检测方法。方法中以根据肠道病毒属VP1血清分型区的基因保守片段设计的针对EV71病毒的引物和探针,制备重组质粒作为标准品,建立了半巢式RT-PCR和实时荧光定量RT-PCR反应体系... 周进宏 王晓昌 张崇淼 船水尚行 佐野大辅文献传递 小型景观水体中病原微生物的分布特性 被引量:3 2015年 为了研究病原微生物在景观水体中的分布特性,采用定量PCR方法,监测了校园景观湖水中指示微生物(粪大肠菌群和大肠杆菌),病原性细菌(沙门氏菌和志贺氏菌)和病毒(肠道病毒、轮状病毒和诺如病毒)等典型肠道微生物的分布及变化情况。结果显示,粪大肠菌群未在景观水体中检出,而其他微生物均可检出,表明该水体未受到来自粪便源的污染,其他病原微生物来源于非粪便来源的面源污染。大肠杆菌、沙门氏菌和肠道病毒的检出率(>50%)比其他病原微生物的高;细菌和病毒的浓度分别分布在10^(-2)~10~1copies/m L和10~0~10~2copies/m L。统计学分析结果表明,各病原微生物的浓度均服从对数正态分布,大肠杆菌与沙门氏菌和志贺氏菌无显著相关性。而肠道病毒与轮状病毒和诺如病毒在0.05置信水平上显著相关,相关系数分别为0.744和0.609。进一步分析病原微生物在景观水体中一年的变化,结果表明,随着降雨的汇入病原微生物的浓度明显增大,在高温和日光照射可致使病原微生物检出率和浓度明显降低。 周进宏 王晓昌 徐丽梅关键词:病原性细菌 病毒 景观水 水中肠道病毒检测方法的分析评价 2016年 采用Hep-2细胞分离培养水中的肠道病毒,根据肠道病毒5’-UTR核酸的保守区,建立了一种细胞培养与实时荧光定量PCR(ICC-RT-q PCR)联合检测感染性肠道病毒的方法。对RT-q PCR、TCID50和ICC-RT-q PCR 3种检测方法进行灵敏度、相关性分析,评价RT-q PCR、ICC-RT-q PCR用于估计水中感染性病毒含量的可行性。结果表明,RT-q PCR方法高估了水中病毒的感染性。肠道病毒低浓度(4.4×10-1-4.4×10^3TCID50/m L)时TCID50与ICC-RT-q PCR线性关系良好,相关系数R2=0.99。水样经浓缩,ICC-RT-q PCR检测病毒含量为1.0×10^3-3.2×104copies/L,估计含量为3-30 TCID50/L,与病毒感染性11-29 TCID50/L结果相近,检出率为83.3%。高于TCID50的检测结果(33.3%)。因此,ICC-RT-q PCR方法快速、灵敏,可对水中感染性肠道病毒进行准确的定量分析。 徐丽梅 王晓昌 周进宏 徐丽华 吉铮 张崇淼关键词:肠道病毒 感染性 TCID50 RT-QPCR 一种环境水体中CVA10病毒的检测方法 本发明公开了一种环境水体中CVA10病毒的检测方法。方法中以根据肠道病毒属VP1血清分型区的基因保守片段设计的针对CVA10病毒的引物和探针,制备重组质粒作为标准品,建立了半巢式RT-PCR和实时荧光定量RT-PCR反应... 周进宏 王晓昌 张崇淼 船水尚行 佐野大辅文献传递 生活污水中肠道病毒分布特性的定量PCR研究 被引量:4 2016年 为了明确污水中肠道病毒的分布及去除规律,采用定量PCR方法对西安市3个污水厂进行了为期一年的监测。结果表明,肠道病毒和人类肠道病毒在进水和二级出水中呈较高浓度,约分布在10^2-10^5copies/m L和10^2-10^4copies/m L范围内。肠道病毒和人类肠道病毒浓度呈现季节性变化,秋季浓度最高,冬季次之,春夏最低。经统计学分析发现,肠道病毒和人类肠道病毒浓度在3个水厂间无显著差异性(p〈0.05)且肠道病毒和人类肠道病毒很好地服从对数正态分布。通过病毒的检测数据及分布特性,明确了函数参数并确定人类肠道病毒占肠道病毒的39%。经过常规二级处理,肠道病毒可去除1.12 log左右,与人类肠道病毒去除率相近,且不同水厂对病毒的去除率也相近。 周进宏 王晓昌 张崇淼 徐丽梅关键词:定量PCR 肠道病毒 生活污水 多管发酵-菌落PCR法定量检测水中可培养沙门氏菌 被引量:6 2012年 采用膜吸附-洗脱法浓缩水样,通过多管发酵法筛选出以可培养沙门氏菌为主的活体细菌.根据沙门氏菌invA基因的保守性,利用沙门氏菌属通用引物进行菌落PCR鉴定,进而确定沙门氏菌阳性平板数量.运用最大可能数法分析数据,计算出水样中可培养沙门氏菌的含量.该方法对沙门氏菌具有良好的特异性和涵盖性.通过对人工污染水样和城市污水厂二级处理出水的检测,证明了多管发酵-菌落PCR方法的检测结果较为准确,可操作性强,能够更真实地反映样品中沙门氏菌的活性. 张崇淼 王晓昌 周进宏 孙婷婷 魏梦楠 曾颂一种环境水体中CVA16病毒的检测方法 本发明公开了一种环境水体中CVA16病毒的检测方法。方法中以根据肠道病毒属VP1血清分型区的基因保守片段设计的针对CVA16病毒的引物和探针,制备重组质粒作为标准品,建立了半巢式RT-PCR和实时荧光定量RT-PCR反应... 周进宏 王晓昌 张崇淼 船水尚行 佐野大辅文献传递 水中抑制物对定量PCR与膜过滤法检测E.coli的影响 2015年 针对水中病原微生物的污染,选择大肠埃希氏菌E.coli作为病原示踪剂,以E.coli染色体上β-葡萄糖醛酸酶uid A目的基因建立了SYBR Green实时荧光定量PCR的检测方法。该定量PCR方法灵敏度高,检测限可达104CFU/L,线性关系良好,相关系数为R2=0.999。研究表明,定量PCR与菌液浓度呈显著正相关R2=0.935。通过人工投加腐殖酸、COD,研究了水中抑制物对定量PCR和膜过滤MF培养法的影响。结果显示,腐殖酸可使E.coli在培养皿上的菌落变小聚集,且显色不明显,当腐殖酸量为20 mg/L时,浓度为50 CFU/100 m L的E.coli完全受到抑制,没有菌落出现。腐殖酸对PCR扩增的抑制作用明显,当腐殖酸浓度增加到10 mg/L,定量PCR检测结果基因拷贝数减少约1 log,增加到20 mg/L定性PCR检测结果为阴性。 徐丽梅 王晓昌 周进宏 吉铮 张崇淼关键词:E.COLI 实时荧光定量PCR 膜过滤