廖贵芹
- 作品数：5 被引量：20H指数：3
- 供职机构：武汉生物工程学院更多>>
- 发文基金：武汉市科技攻关计划项目国家重点实验室开放基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学文化科学更多>>
- β-1,4-内切葡聚糖酶基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达被引量：6
- 2005年
- 运用选择性培养基LBCMC从环境土样中分离得到一株能利用羧甲基纤维素的芽孢杆菌Bacillus sp.NW-2004 a,并运用“鸟枪”克隆法构建了其基因组文库,且从此基因组文库中筛选得到两个阳性克隆.对其中一阳性克隆中插入的DNA片段(命名为GLUD)进行序列测定,发现了一长度为2 502 bp的开放阅读框(ORF),可编码834个氨基酸.BLAST分析结果表明,该基因与Bacillus sp.KSM-S237来源的纤维素酶基因AB018420具86%相似性,所编码的多肽与Bacillus sp.KSM-64来源的β-1,4-内切葡聚糖酶具89%的相似性,故该基因是一新发现的β-1,4-内切葡聚糖酶基因.该序列已收录于Genebank,登录号AY663839.另外,以CpoI andNotI限制性内切酶双酶切衍生于质粒pGEX的大肠杆菌表达载体pHBM625,然后将经T4 DNA polym erase处理后的β-1,4-内切葡聚糖酶基因克隆至载体pHBM625中得到重组质粒pH-BM625G lu,最后通过平板检测及SDS-PAGE凝胶电泳,均检测到该基因在大肠杆菌XL10-G lod中的表达.
- 李春华廖贵芹张桂敏马立新
- 关键词：基因组文库大肠杆菌表达
- 酵母及细菌双杂交载体的改造及人肝来源ORF的高通量克隆
- 本实验室购买了两套酵母双杂交系统及一套细菌双杂交系统,这三套系统在使用上可相互验证,互为补充,。其中一套酵母双杂交系统为CLONTECH公司的BD MatchmakerSystem,另一套为Invitrogen公司的PR...
- 汪娜廖贵芹彭海勇甘翔马立新
- 文献传递
- β-1,4-内切葡聚糖酶基因在毕赤酵母中的表达研究被引量：5
- 2007年
- 根据芽孢杆菌β-1,4-内切葡聚糖酶基因序列设计引物,以pHBM102为模板,扩增得到β-1,4-内切葡聚糖酶GluD基因片段,克隆至毕赤酵母(Pichia pastoris)表达载体pHBM905上,获得重组毕赤酵母表达载体pHBM905D,将此质粒分别转化毕赤酵母GS115,KM71和SMD1168菌株,筛选获得GS115(pHBM905D),KM71(pHBM905D),和SMD1168(pHBM905D),平板诱导培养表明,GS115(pHBM905D)所产生的水解圈最大,酶活力最高.摇瓶诱导培养,表达β-1,4-内切葡聚糖酶,此酶的最适反应温度为65℃,最适反应pH值6.4,在诱导8 d后酶活力达到最高为0.185 8 U/mL.
- 廖贵芹汪娜马立新
- 关键词：Β-1,4-内切葡聚糖酶芽孢杆菌毕赤酵母基因表达
