徐进
- 作品数：119 被引量：430H指数：13
- 供职机构：中国水产科学研究院长江水产研究所更多>>
- 发文基金：中国水产科学研究院基本科研业务费专项基金公益性行业(农业)科研专项国家现代农业产业技术体系建设项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学环境科学与工程医药卫生更多>>
- 鲤疱疹病毒Ⅱ型TaqMan real-time PCR检测方法的建立及应用被引量：18
- 2013年
- 针对鲤疱疹病毒Ⅱ型(Cyprinid herpesvirus 2,CyHV-2)DNA解旋酶基因编码区序列设计特异性引物,利用PCR技术扩增出长度为1 446 bp的基因编码区片段,克隆到pMD19T载体上,构建重组质粒。经PCR鉴定与测序分析确认正确后,以10倍梯度稀释重组质粒,作为标准模板进行TaqMan real-time PCR扩增,制作标准曲线,建立了鲤疱疹病毒Ⅱ型的荧光定量PCR检测方法。检测结果显示,标准曲线的相关系数(R2)达到0.999 1,斜率为-3.412;对初始模板定量检测的范围为1×101～1×107copies/μL;特异性试验结果表明,该方法可特异性地检测出鲤疱疹病毒Ⅱ型,而对大鲵虹彩病毒(GSIV)、锦鲤疱疹病毒(KHV)以及空白对照无检测信号。取江苏射阳和宝应两地疑似患病鲫组织核酸作为模板进行荧光定量PCR,结果表明反应体系中的病毒量分别为6.89×104copies/μL和3.02×102copies/μL。本研究建立的鲤疱疹病毒Ⅱ型TaqMan实时荧光定量PCR方法灵敏度高、特异性强,对因鲤疱疹病毒Ⅱ感染引起的养殖鲫造血器官坏死症的诊断与病毒病原定量检测有重要意义。
- 周勇曾令兵张辉范玉顶徐进
- 关键词：TAQMANREAL-TIMEPCR
- 鲤疱疹病毒Ⅱ型TaqMan real-time PCR检测方法的建立及应用
- 针对鲤疱疹病毒Ⅱ型(Cyprinid herpesvirus 2,CyHV-2)DNA解旋酶基因编码区序列设计特异性引物,利用PCR技术扩增出长度为1 446 bp的基因编码区片段,克隆到pMD19T载体上,构建重组质粒...
- 周勇曾令兵张辉范玉顶徐进
- 关键词：鲫鱼
- 文献传递
- 大鲵虹彩病毒流行株的分离及其主衣壳蛋白编码基因序列比较分析被引量：5
- 2014年
- 大鲵虹彩病毒（giant salamander iridovirus, GSIV）是近年中国大陆新发现的引起人工养殖大鲵（Andrias david-ianus）大规模死亡的病毒病原。为了揭示大鲵虹彩病毒流行株的基因型差异,本研究对2010-2012年采集自全国不同大鲵养殖区域的患虹彩病毒病的大鲵样本进行了分子检测、病毒分离培养以及病毒主衣壳蛋白（major capsid protein, MCP）基因测序与比对分析。结果显示,采自陕西、湖北、湖南、浙江、江西、福建等省的10个样本检测为阳性,通过细胞培养获得10株病毒流行株。对该10株流行株MCP基因的测序与比对分析发现,核苷酸序列相似性达到99.7%~100%,其推测的氨基酸序列无明显差异,证实中国大鲵虹彩病毒流行株属同一基因型。系统进化树分析结果表明,所选大鲵虹彩病毒与蛙病毒分别聚为一枝,但其亲缘关系较近。本研究结果旨为大鲵虹彩病毒病的疫苗研制及其免疫防控技术研究奠定基础。
- 徐进张辉肖汉兵曾令兵
- 关键词：流行株基因序列
- 斑点叉尾呼肠孤病毒诱导斑点叉尾肾脏组织细胞凋亡的研究被引量：1
- 2013年
- 为研究斑点叉尾呼肠孤病毒(CCRV)诱导斑点叉尾肾脏细胞(CCK)发生凋亡的机理,以CCRV感染的CCK细胞为实验材料,采用Hoechst 33258染色、DNA片段化检测、TUNEL反应、亚G1期细胞检测以及线粒体膜电位变化检测等方法进行实验。感染试验结果显示,病毒感染斑点叉尾肾脏组织细胞后,细胞变圆、皱缩,随后细胞脱落,细胞单层呈网状,感染72h后出现典型细胞病变效应(CPE);病毒感染48 h后Hoechst 33258染色结果显示,细胞的染色质固缩、核边缘化或破裂,可观察到凋亡小体,细胞凋亡率随时间增加;DNA片段化检测结果显示,病毒感染细胞12 h后细胞基因组DNA出现片段化,随后逐渐增强,72 h达到最高;TUNEL反应结果表明,病毒感染细胞72 h后细胞基因组DNA断裂,有大量游离3'末端自由羟基(-OH)存在。亚G1期细胞检测结果显示,病毒感染48 h后,约53.44%细胞处于亚G1期;利用JC-1检测试剂盒检测病毒感染细胞的线粒体膜电位变化,病毒感染细胞24 h后线粒体膜通透性发生改变,膜电位变化显著。紫外线灭活与热灭活的斑点叉尾呼肠孤病毒不能诱导斑点叉尾肾脏细胞发生凋亡,表明细胞凋亡依赖于病毒复制。
- 王瑶曾令兵徐进周勇肖艺
- 关键词：斑点叉尾鮰呼肠孤病毒细胞凋亡
- 安宁河流域夏季底栖动物多样性及其空间分布格局被引量：5
- 2021年
- 为了解安宁河底栖动物空间分布格局及其关键驱动因子,于2018年6—7月对安宁河干支流的底栖动物进行了调查,并分析了河流纵向梯度下的底栖动物空间格局。结果表明:共检出底栖动物5门34科57种,其中水生昆虫最多(44种);安宁河干流物种丰富度低于支流;干流优势种为霍甫水丝蚓(Limnodrilus hoffmeisteri)、四节蜉(Baetissp.)、纹石蛾(Aethalopsychesp.)和尖膀胱螺(Physa acuta),支流优势种为短脉纹石蛾(Cheumatopsyche sp.)、弯握蜉未定种1(Drunellasp1)、扁蜉(Heptageniasp.)和角石蛾(Stenopsychesp.);安宁河干支流底栖动物的密度较为接近;沿"上游-下游"纵向梯度,安宁河干流底栖动物密度呈下降趋势。典型对应分析(CCA)结果显示,安宁河底栖动物优势种的密度与水温、pH和底质类型密切相关。
- 马宝珊魏开金徐进徐滨朱祥云
- 关键词：底栖动物环境因子
- 斑点叉尾肾脏组织细胞系的建立及其生物学特性被引量：22
- 2009年
- 采用组织块移植培养技术,对来源于斑点叉尾(Ictalurus punctatus Rafinesque)肾脏组织的细胞进行原代培养,建立了斑点叉尾肾脏组织细胞系,定名为CCK,目前已稳定传代培养70多次。斑点叉尾肾脏组织细胞为成纤维样细胞,最佳培养基为M199,最适培养温度范围为28～32℃,培养基血清体积分数为10%。在此条件下,CCK细胞的倍增时间为38.9～41.0h。斑点叉尾肾脏细胞的集落形成效率为(74.16±3.54)%,第9代传代细胞的染色体数目为正常二倍体2n=58,第33代传代细胞的染色体众数为60。液氮冷冻保存6个月后复苏的细胞经台盼兰染色检验,(86.69±1.04)%的细胞仍保持活性,细胞复苏后培养生长旺盛。通过对第17代离体培养细胞的28SrRNA基因进行PCR扩增及序列分析与比对,表明该细胞系来源于斑点叉尾。
- 曾令兵李晓莉张林徐进张燕
- 关键词：肾脏组织细胞系生物学特性
- 一种鲤疱疹病毒2型的巢式PCR检测试剂盒
- 本发明公开了一种鲤疱疹病毒2型的巢式PCR检测试剂盒，其特征在于：盒体(1)内衬垫(2)上放置6个盛有试剂的1.5mL离心管，包括10×反应缓冲液：含Tris-HCl100mM，KCl500mM，MgCl<Sub>2</...
- 徐进张辉曾令兵
- 文献传递
- 吡喹酮不同给药方式对鲫的急性和亚急性毒性研究被引量：6
- 2008年
- 研究了吡喹酮不同给药方式对鲫(Carassius auratus)的急性和亚急性毒性试验。急性毒性试验结果显示:浸泡时吡喹酮对鲫的24、48、96 h的半致死浓度(LC50)分别为54.80 mg/L、51.07 mg/L、50.78 mg/L;按每千克鱼体重10 g吡喹酮的剂量灌胃时,96 h未见明显中毒症状。亚急性试验结果显示:在不同的给药方式下,与对照组相比,低浓度的吡喹酮未对碱性磷酸酶(ALP)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷丙转氨酶(ALT)的活性造成显著影响(P>0.05);随着试验时间的延长,较高浓度的吡喹酮使SOD活性先升高后降低,ALT活性显著(P<0.05)或极显著高于对照组(P<0.01)。
- 姚静周定刚艾晓辉袁科平徐进
- 关键词：吡喹酮急性毒性亚急性毒性超氧化物歧化酶(SOD)
- 一种鲫鱼疱疹病毒病JDORF25疫苗及制备方法和应用
- 本发明公开一种鲫鱼疱疹病毒病疫苗（JDORF25）及制备方法和应用。本发明的鲫鱼疱疹病毒病疫苗为将鲤疱疹病毒Ⅱ型免疫相关ORF25基因截短优化后翻译的重组蛋白，其序列为SEQ ID NO.2所示。合成该基因片段，转入酵母...
- 周勇曾令兵范玉顶徐进马杰
- 文献传递
- 草鱼呼肠孤病毒SYBR Green I实时荧光定量PCR检测方法
- 本发明提供了一种草鱼呼肠孤病毒SYBR Green I实时荧光定量PCR检测方法。该方法至少包括：抽提草鱼呼肠孤病毒总RNA、引物设计、草鱼呼肠孤病毒外衣壳蛋白基因RT-PCR扩增、草鱼呼肠孤病毒外衣壳蛋白基因的克隆与鉴...
- 周勇曾令兵范玉顶罗晓松徐进马杰
- 文献传递
