李永超
- 作品数：1 被引量：2H指数：1
- 供职机构：攀枝花学院更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- Caveolin-1克隆、表达及其抗体的制备被引量：2
- 2010年
- 目的运用基因工程方法制备Caveolin-1重组蛋白及其抗体,为研究Caveolin-1的功能奠定基础。方法构建原核表达载体pGEX-5X-1-Caveolin-1,酶切鉴定后,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达产物经SDS-PAGE及Western blot方法鉴定基因片段的正确性及表达蛋白的特异性后,进行纯化。纯化的重组蛋白免疫Balb/c小鼠3次后,ELISA法测定兔多克隆抗体滴度。结果克隆得到的目的基因片段大小与预期相符。重组Caveolin-1蛋白相对分子质量约为48000,以包涵体形式存在Caveolin-1蛋白N端融合GST标签便于纯化及鉴定。获得的高纯度Caveolin-1融合蛋白,免疫动物后,可产生特异的高滴度抗体(ELISA滴度达1:10000)。结论构建了高表达Caveolin-1蛋白的原核表达系统,制备的Caveolin-1重组蛋白免疫动物,获得了特异、高效价的抗体,为研究Caveolin-1基因的生物学活性提供了实验材料和依据。
- 李永超何剑王丹何浪
- 关键词：原核表达纯化抗体
