何剑
- 作品数：4 被引量：6H指数：2
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- 趋化因子CXCL14通过上调MMP-2表达促进人卵巢癌细胞的迁移被引量：2
- 2012年
- 目的:探讨趋化因子CXCL14上调MMP-2的表达,促进人卵巢癌细胞系SKOV-3迁移的作用机制。方法:MTT法检测0.57ng/mlCXCL14重组蛋白处理0、24和48h后SKOV-3细胞的增殖能力;划痕实验检测0.57ng/mlrhCXCL14重组蛋白处理0、24和48h后细胞的迁移能力;半定量RT-PCR和Westernblotting检测rhCXCL14处理24h后,SKOV-3细胞中MMP-2mRNA和蛋白表达的变化。结果:0.57ng/mlrhCXCL14对SKOV-3细胞的增殖影响不显著。划痕实验发现,0.57ng/mlrhCXCL14重组蛋白可以促进SKOV-3细胞的迁移。半定量RT-PCR和Westernblotting结果显示,经rhCXCL14重组蛋白处理后可以促进SKOV-3细胞内MMP-2mRNA和蛋白上调。结论:CXCL14能够使卵巢癌细胞中MMP-2的表达上调,从而促进癌细胞的转移。
- 何剑王丹何浪
- 关键词：卵巢癌迁移基质金属蛋白酶-2
- Caveolin-1克隆、表达及其抗体的制备被引量：2
- 2010年
- 目的运用基因工程方法制备Caveolin-1重组蛋白及其抗体,为研究Caveolin-1的功能奠定基础。方法构建原核表达载体pGEX-5X-1-Caveolin-1,酶切鉴定后,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达产物经SDS-PAGE及Western blot方法鉴定基因片段的正确性及表达蛋白的特异性后,进行纯化。纯化的重组蛋白免疫Balb/c小鼠3次后,ELISA法测定兔多克隆抗体滴度。结果克隆得到的目的基因片段大小与预期相符。重组Caveolin-1蛋白相对分子质量约为48000,以包涵体形式存在Caveolin-1蛋白N端融合GST标签便于纯化及鉴定。获得的高纯度Caveolin-1融合蛋白,免疫动物后,可产生特异的高滴度抗体(ELISA滴度达1:10000)。结论构建了高表达Caveolin-1蛋白的原核表达系统,制备的Caveolin-1重组蛋白免疫动物,获得了特异、高效价的抗体,为研究Caveolin-1基因的生物学活性提供了实验材料和依据。
- 李永超何剑王丹何浪
- 关键词：原核表达纯化抗体
- 枸橼酸他莫昔芬影响人卵巢癌细胞增殖机制探讨被引量：1
- 2012年
- 目的研究枸橼酸他莫昔芬(tamoxifen citrate)对体外培养的人卵巢癌细胞SKOV-3增殖的影响及相关机制。方法采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测0.01μmol/L枸橼酸他莫昔芬在不同的时间点对SKOV-3细胞增殖的影响;采用细胞免疫化学(immunocytochemistry)和Western blotting检测0.01μmol/L枸橼酸他莫昔芬作用于SKOV-3细胞48 h后对细胞中Bcl-2表达的影响。结果枸橼酸他莫昔芬对SKOV-3细胞的增殖具有明显的抑制作用,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05);枸橼酸他莫昔芬能够下调Bcl-2蛋白的表达。结论枸橼酸他莫昔芬可显著抑制SKOV-3细胞的增殖,其增殖抑制作用可能与其诱导细胞凋亡有关,而枸橼酸他莫昔芬诱导凋亡可能与其下调Bcl-2蛋白表达有关。
- 何剑王丹何浪
- 关键词：柠檬酸盐类细胞分裂细胞增殖
- 枸橼酸他莫昔芬对人卵巢癌细胞增殖的影响被引量：1
- 2012年
- 目的:观察枸橼酸他莫昔芬(Tamoxifen Citrate)对体外培养的人卵巢癌细胞SKOV-3增殖的影响。方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度(0、1、5、10、12、14、15、16、18、20nmol/L)的枸橼酸他莫昔芬在不同的时间点(24、48、72h)对SKOV-3细胞增殖的影响;采用流式细胞技术(FCM)分析不同浓度的枸橼酸他莫昔芬处理细胞24h和48h后对细胞凋亡的影响。结果:枸橼酸他莫昔芬对SKOV-3细胞的增殖具有明显的抑制作用,与对照组相比具有显著性差异(P<0.05),并呈现剂量和时间依赖性。枸橼酸他莫昔芬能够诱导细胞凋亡,且凋亡率随着枸橼酸他莫昔芬浓度和处理时间的增加而升高(P<0.01)。结论:枸橼酸他莫昔芬可显著抑制SKOV-3细胞的增殖,其作用可能与其诱导细胞凋亡有关。
- 何剑王丹何浪
- 关键词：枸橼酸他莫昔芬卵巢癌凋亡
