许忠
- 作品数：9 被引量：31H指数：4
- 供职机构：南方医科大学珠江医院更多>>
- 发文基金：广东省科技计划工业攻关项目国家自然科学基金重庆市科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 脑源性神经营养因子对骨髓基质细胞分化过程中致瘤性的影响被引量：4
- 2005年
- 目的:观察脑源性神经营养因子对体外培养骨髓基质细胞致瘤性的影响。方法:实验于2003-05/2004-06在南方医科大学临床解剖学研究所及珠江医院神经医学研究所完成。分离培养大鼠骨髓基质细胞,用含有脑源性神经营养因子受体trkB基因的增强型绿色荧光蛋白真核表达载体(pEGFP)-C2-trkB转染骨髓基质细胞。分别收集转染了增强型绿色荧光蛋白真核表达载体-C2-trkB及增强型绿色荧光蛋白真核表达载体-C2的细胞,以未转染的骨髓基质细胞为阴性对照,采用半定量的反转录聚合酶链式反应法测定各组细胞中trkB信使核糖核酸(trkBmRNA)的表达水平。在培养基中加入脑源性神经营养因子,应用双层软琼脂糖培养的方法,观察经过不同处理的细胞的克隆形成率。结果:增强型绿色荧光蛋白真核表达载体-C2-trkB可高效地转染骨髓基质细胞。转染增强型绿色荧光蛋白真核表达载体-C2-trkB组trkB信使核糖核酸表达水平明显高于未转染细胞组及转染增强型绿色荧光蛋白真核表达载体-C2细胞组犤13.6073±1.8957,0.3052±0.0043,0.3075±0.0037,(P<0.05)犦。转染增强型绿色荧光蛋白真核表达载体-C2-trkB组克隆形成率明显小于转染增强型绿色荧光蛋白真核表达载体-C2细胞组、未转染细胞组及胶质瘤细胞U251组犤0.2347±0.0389,0.6751±0.0506,0.
- 黄涛徐如祥姜晓丹袁军许忠丁涟沭滕小华
- 关键词：骨髓细胞脑源性神经营养因子
- 缺血缺氧后海马神经元突触后膜谷氨酸受体-2含量变化的研究被引量：5
- 2005年
- 目的探讨缺血缺氧后大鼠海马神经元突触后膜谷氨酸受体-2(GluR2)含量变化情况。方法体外培养胚胎大鼠海马神经元,模拟临床缺血过程致神经元缺氧损伤,运用双重免疫荧光技术标记和共聚焦检测技术观察缺血缺氧后不同时间点海马神经元突触后膜GluR2含量变化情况。结果体外培养海马神经元进行模拟缺血处理后,膜表面的GluR2总含量、含有GluR2突触的相对含量以及含有突触部位GluR2的相对含量均明显降低,而且上述变化随着模拟缺血时间的延长而增加,各组间均存在显著性差异(P<0.05)。结论缺血缺氧损伤可致突触后膜表面GluR2含量降低并随着缺血时间的延长而增加,形成缺乏GluR2的新的AMPA受体通道,介导Ca2+的快速内流,引起神经元的延迟性死亡。
- 许忠徐如祥刘宝松黄涛丁涟沭袁军
- 关键词：突触后膜缺血缺氧GLUR2培养海马神经元胚胎大鼠模拟缺血
- 5-氨基乙酰丙酸介导的光动力对人脑胶质瘤细胞的治疗作用(英文)被引量：5
- 2006年
- 目的探讨5-氨基乙酰丙酸(5-ALA)介导的光动力学对人脑胶质瘤U251细胞的治疗作用方法使用荧光显微镜及共聚焦显微镜检测5-ALA所产生的光敏剂原卟啉(PpIX)在U251细胞中的定位。将5-ALA加入U251细胞中,随之以635nm的激光辐射,使用MTT法测定细胞生存率结果5-ALA与U251细胞共培养可以产生光敏剂原卟啉。原卟啉弥散地分布在U251细胞的胞浆中,胞核区未见分布。5-ALA介导的光动力对人脑胶质瘤U251细胞的杀伤作用随着5-ALA与U251细胞孵育时间的延长及5-ALA浓度的增加而增加,但在孵育6h、5-ALA浓度为2mmol/L时达饱和。而单用5-ALA或单纯激光辐射,对U251细胞无明显的杀伤作用。结论5-ALA介导的光动力治疗是很有前途的人脑胶质瘤治疗方法,5-ALA与U251细胞孵育的最佳时间为6h。
- 丁涟沭徐如祥姜晓丹郁毅刚黄涛袁军许忠陈镇洲蔡颖谦邹雨汐杜谋选
- 关键词：胶质瘤5-氨基乙酰丙酸光动力学治疗U251
- 乳鼠预损伤周围神经雪旺细胞的培养及增殖能力研究被引量：3
- 2004年
- 目的:从乳鼠预损伤的坐骨神经中分离培养雪旺细胞。方法:预损伤SD乳鼠坐骨神经,3d后取损伤的坐骨神经,手术显微镜下分离神经外膜,用胰酶、胶原酶消化,差速贴壁除去成纤维细胞,接种培养后对细胞进行计数、MTT活性检测,并用S-100蛋白标记观察。结果:该方法所培养的雪旺细胞形态正常,数量及纯度高,增殖旺盛。结论:此实验为神经组织工程研究中雪旺细胞的来源提供了一个有效的方法。
- 黄涛秦建强王宏亮武雷杨俊余磊许忠徐如祥
- 关键词：乳鼠周围神经损伤雪旺细胞细胞培养细胞增殖
- 缺血损伤对神经元膜表面AMPA受体构成变化的影响(英文)被引量：3
- 2004年
- 背景:α-氨基-3-羟基-5-甲基-4-异恶唑丙酸(AMPA)受体的过度激活在继发性脑损害的发生过程中起重要作用,研究表明,AMPA受体第二亚单位(GluR2)的减少是引起Ca2+快速内流主要原因,但缺血损伤后神经元膜表面AMPA受体数量及结构(亚单位组成比例)变化特征尚不清楚。目的:探讨缺血后神经元膜表面AMPA受体亚单位(GluRs)含量组成变化及其对Ca2+内流和细胞死亡的影响,为脑缺血治疗的特异性干预途径提供理论依据。设计:随机对照的实验研究。单位:解放军第三军医大学大坪医院野战外科研究所。材料:孕18dSD大鼠8只(解放军第三军医大学野战外科研究所动物所提供),进行胚胎海马神经元分离和培养。干预:缺血损伤组更换无糖细胞外液后置专用缺氧箱内缺氧30min,然后重新添加维持培养基继续培养,对照组在相同时刻更换正常培养基。采用PI染色、双重免疫荧光标记和细胞比色分析技术定量观察神经元死亡和膜表面GluRs含量变化,采用Fura-2法测定胞内Ca2+含量。主要观察指标:①伤后神经元死亡数目。②突触内和膜表面GluRs含量。③胞内Ca2+含量。结果:缺氧损伤后24hGluR2阳性突触数目构成比为0.42±0.16,与对照组(0.58±0.15)相比显著降低,差异有显著性意义(t=2.348,P=0.023),膜表面GluR2含量也显著减少,差异有显著性意义(t=2.
- 刘宝松陈恒胜许忠陈力学曾琳龙在云
- 关键词：AMPA受体缺血损伤神经元死亡CA^2+突触
- 光动力疗法对人脑胶质瘤细胞存活率影响的实验研究被引量：1
- 2005年
- 目的:探讨5-氨基乙酰丙酸(5-ALA)介导的光动力(ALA-PDT)对人脑胶质瘤细胞U251的治疗作用。方法:实验于2003-01/2004-05在解放军第一军医大学珠江医院全军神经医学研究所完成。将不同浓度的5-ALA加入到细胞培养基中,随之以激光辐照;固定浓度的5-ALA给予不同剂量的激光辐射。MTT法测定细胞存活率。结果:激光能量恒定于25.0J/cm时,ALA-PDT对U251细胞的杀伤力2在较低5-ALA浓度范围内,随着5-ALA的浓度的增高而增强。各组与对照组间相比较,差异均有显著性意义(F=770.12,P=0.0000)。在较高5-ALA浓度范围内,则存在着饱和现象;相同的5-ALA浓度下,细胞生存率随着激光能量的增加而下降。单用5-ALA或激光处理,均不对细胞造成显著杀伤。结论:5-ALA本身对细胞无明显毒性作用,其介导的PDT是很有前途的胶质瘤治疗方法。
- 丁涟沭徐如祥姜晓丹黄涛许忠袁军陈镇洲蔡颖谦邹雨汐杜谋选徐宗俊
- 关键词：光化学疗法脑肿瘤神经胶质瘤
- 脑源性神经营养因子受体trkB基因扩增和真核表达载体的构建被引量：2
- 2003年
- 目的构建大鼠脑源性神经营养因子受体trkB基因真核表达载体。方法根据trkB基因已知序列,设计合成一对引物,上、下游引物分别引入EcoRⅠ及BamHⅠ酶切位点,用反转录PCR(RT-PCR)方法从大鼠脑组织总RNA中扩增编码trkB的基因片断,插入克隆载体pMD 18-T,构建pMD 18-trkB载体。经EcoRⅠ、BamHⅠ双酶切出trkB基因片断,再克隆至载体pEGFP-C2中构建pEGFP-C2-trkB真核表达载体。结果trkB基因RT-PCR扩增产物大小约1 461 bp,真核表达载体经酶切鉴定表明为正确重组子,基因测序结果与已知序列基本吻合。结论成功扩增出完整trkB基因,构建了真核表达载体pEGFP-C2-trkB。
- 黄涛徐如祥武雷姜晓丹邱晓忠秦建强余磊许忠
- 关键词：TRKB基因扩增基因表达
- 缺血缺氧及再灌注后海马神经元损伤的时间窗特性被引量：2
- 2005年
- 目的:探讨缺血缺氧及再灌注损伤后大鼠海马神经元在伤后不同时间的凋亡及死亡特性,阐明神经元损伤发生的时间窗特征。方法:实验于2004-05/06在解放军第三军医大学大坪医院野战外科研究所进行。体外培养胚胎大鼠海马神经元,模拟临床缺血过程致神经元缺氧损伤,采用AnnexinV联合PI标记和流式细胞检测技术观察伤后不同时间点的凋亡与死亡情况。结果:海马神经元缺氧损伤后,其细胞损伤的形式为凋亡和坏死同时存在;模拟缺血15,30min,1.0,1.5,2.0,2.5和3.0h,其坏死率分别为(1.37±0.12)%,(3.71±0.34)%,(16.47±1.27)%,(18.73±2.02)%,(19.77±2.32)%,(22.13±2.12)%和(28.78±2.69)%,相互间差异有显著性意义(P<0.05),各时间点的凋亡率分别为(6.23±1.67)%,(6.56±2.38)%,(6.73±2.42)%,(6.95±1.89)%,(7.16±2.82)%,(6.93±2.56)%和(7.23±2.89)%,凋亡率无明显变化(P>0.05)。各时间点再恢复糖和氧供应后至24h,海马神经元存活率进一步明显下降,坏死率进一步增多,各时间点神经元坏死率分别为(6.98±1.23)%,(8.46±1.37)%,(17.68±2.97)%,(20.79±3.16)%,(21.67±3.05)%,(35.53±3.33)%和(50.22±4.19)%,差异亦有显著性意义(P<0.05);凋亡率亦逐渐增多,模拟缺血15,30min,1.0,1.5和2.0h时间点的再灌注24h。
- 许忠徐如祥姜晓丹黄涛丁涟沭袁军刘宝松
- 关键词：脑缺氧神经元
- 缺氧所致神经元AMPA受体的结构组成及功能变化被引量：6
- 2004年
- 目的 探讨缺氧损伤后神经元膜表面谷氨酸AMPA受体亚单位 (GluRs)含量、受体结构组成、功能的变化及其在Ca2 + 超载和延迟性细胞死亡中的作用。方法 建立神经元缺氧损伤模型 ,采用PI染色、双重免疫荧光标记和细胞比色分析技术定量观察神经元死亡和膜表面GluRs含量变化 ,采用Fura 2法测定胞内Ca2 + 含量 ,以膜片钳技术检测微兴奋性突触后电流 (mEPSCs)的变化。结果 伤后胞内Ca2 + 含量和神经元死亡数量明显高于对照组 ;膜表面GluR2含量及含GluR2的突触数目显著减少 (P <0 .0 5 ) ,而GluR3含量较对照组则显著升高 (P <0 0 5 ) ;缺乏GluR2的AMPA受体通道对Ca2 + 有很高的通透性。结论 缺氧可致神经元膜表面AMPA受体的结构组成发生变化 ,缺乏GluR2的受体通道数目增加 ,介导了Ca2 + 的快速内流 ,引起神经元的延迟性死亡。
- 刘宝松陈恒胜许忠陈力学曾琳龙在云
- 关键词：GLUR2AMPA受体CA^2+
