钱宝鑫
- 作品数：10 被引量：6H指数：2
- 供职机构：天津医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学轻工技术与工程更多>>
- 重组真核质粒pERFP-C1-hTudor-SN-SN(1～4)的构建和表达
- 2011年
- 目的:将人类Tudor-SN蛋白SN(1～4)基因片段分别定向连入pERFP-C1质粒,使Tudor-SN蛋白SN各功能片段与红色荧光蛋白在HeLa细胞内融合表达。方法:以重组质粒pSG5-Tudor-SN-flag为模板,PCR法扩增出目的基因,利用EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切法将目的片段连接到pERFP-C1载体上,再将构建成功的pERFP-C1-Tudor-SN-SN(1～4)重组质粒转染入HeLa细胞内,在荧光显微镜下观察红色荧光蛋白的表达。结果:以单/双酶切及基因测序法鉴定构建的重组质粒均无误,荧光显微镜下观察到红色融合蛋白的表达。结论:重组pERFP-C1-h Tudor-SN-SN(1～4)质粒构建及表达成功。
- 付晓朱梦瑜高星杰钱宝鑫王保亚赵虹葛林杨洁
- 关键词：发光蛋白质类重组融合蛋白质类HELA细胞
- 口服木糖醇对糖尿病大鼠肾脏IGF-Ⅰ表达的影响
- 2011年
- 目的检测口服木糖醇对实验性1型糖尿病模型大鼠血糖及肾脏IGF-Ⅰ表达的影响。方法链脲佐菌素(STZ)一次性尾静脉注射造1型糖尿病大鼠模型,将成模大鼠随机分为糖尿病对照组(DC),糖尿病5%、10%、20%木糖醇(Xy)喂养组(D+5%、10%、20%Xy),另外设置正常对照组(NC)。喂养中分别在饲料中添加不同比例的木糖醇,开始分组喂养前留取血糖结果,第8 w末处死,处死前测量血糖。通过SABC免疫组织化学和定量分析方法观察各组大鼠肾脏IGF-Ⅰ表达的平均光密度(MOD)。结果血糖结果≥16.7 mmol/L证实模型构建成功。差异性喂养8 w后,各糖尿病组(DM)血糖与NC组相比仍升高(P<0.05),DC组血糖较0 w升高(P<0.05),而各D+Xy组8 w较0 w无明显变化。肾皮质/髓质IGF-Ⅰ表达的组间变化趋势一致:DC组较NC组IGF-Ⅰ表达量高;相比于DC组,随着饲料中添加木糖醇以及浓度的升高,IGF-Ⅰ表达量有逐渐降低趋势;皮质D+20%Xy组较DC组降低(P<0.01)且已与NC组无差异,髓质三个D+Xy组的IGF-Ⅰ表达量介于NC组、DC组之间。糖尿病大鼠在口服不同浓度木糖醇8 w后血糖与肾脏IGF-Ⅰ的表达量高度相关,r皮质=0.981(P=0.019),r髓质=0.998(P=0.002)。当血糖t∈28～35 mmol/L,皮质/髓质回归曲线方程可分别表示为y=186.036-705.932/t(R2=0.977,P=0.012),y=122.038+13.157 l nt(R2=0.997,P=0.002)。结论口服一定剂量木糖醇可稳定血糖及抑制肾脏IGF-Ⅰ表达,具有一定保护肾脏的作用。
- 钱宝鑫沈丽津李丽杨文何昌玉孙丽荣林来祥张媛
- 关键词：木糖醇糖尿病肾脏胰岛素
- Tudor-SN蛋白与乳腺癌细胞生物学行为的关系研究
- 目的 乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一,其复发和转移严重威胁患者的生命.在恶性肿瘤发生转移的过程中,肿瘤的高侵袭性和迁移能力的提高是重要的前提条件.Tudor-SN蛋白(又称p100,SND1蛋白)是一种高度同源性的,且...
- 刘欣王保亚苏超高星杰朱梦瑜段中潮钱宝鑫付晓杨洁
- 关键词：TGF-Β信号通路SMAD蛋白乳腺癌
- Tudor-SN蛋白TSN结构域亚结构片段重组质粒的构建与表达
- 2011年
- 目的：研究人类Tudor-SN蛋白TSN结构域4个亚片段的功能，构建重组质粒pEGFP-C2-Tudor-SN-TSN（Ⅰ一Ⅳ）。方法：以重组质粒pSG5-Tudor-SN-flag为模板，聚合酶链反应（PCR）扩增出目的基因，将双酶切后带有粘性末端的目的片段和pEGFP-C2载体连接，从而构建重组质粒pEGFP-C2-Tudor-SN-TSN（I-IV）。将构建成功的重组质粒用脂质体法转染HeLa细胞，并在荧光显微镜下观察融合蛋白的荧光表达情况，Western印迹检测融合蛋白的表达。结果：对重组质粒进行双酶切鉴定可见Tudor-SN-TSN（Ⅰ～Ⅳ）的cDNA片段；脂质体转染重组质粒后可观察到绿色荧光蛋白的表达。Western印迹后可在相应位置检测到融合蛋白pEGFP-C2-Tudor-SN-TSN（Ⅰ～Ⅳ）。结论：真核pEGFP-C2-Tudor-SN-TSN（Ⅰ～Ⅳ）重组质粒构建及表达成功。
- 钱宝鑫高星杰朱梦瑜杨震霞宋娟段中潮邵洁杨洁
- 关键词：DNA结合蛋白质类质粒重组融合蛋白质类
- 口服木糖醇对糖尿病大鼠血糖及肾脏胰岛素样生长因子Ⅰ的影响及机制的探讨被引量：1
- 2011年
- 目的检测口服木糖醇对实验性1型糖尿病模型大鼠血糖及肾脏胰岛素样生长因子Ⅰ(IGF-I)表达的影响,探讨口服木糖醇对于糖尿病大鼠肾脏的影响及机制。方法链脲佐菌素(STZ)一次性尾静脉注射造1型糖尿病大鼠模型,将成模的大鼠随机分为四组:糖尿病对照组(DC组)、糖尿病5%木糖醇喂养组(D+5%Xy组)、糖尿病10%木糖醇喂养组(D+10%Xy组)、糖尿病20%木糖醇喂养组(D+20%Xy组)。另外设置正常对照组(NC组)。实验前留取各组血糖测定结果。喂养中分别在饲料中添加不同比例的木糖醇。于实验第4周末处死动物,处死前测量血糖。通过SABC免疫组织化学方法检测各组大鼠肾脏IGF-I蛋白的表达水平。结果模型制备后,成模的大鼠血糖高于NC组,差异有显著性(P<0.05)。差异性喂养4周后,各糖尿病组大鼠血糖仍高于NC组(P<0.05),但D+20%Xy组较DC组的血糖下降,差异有显著性(P<0.05)。肾皮质、髓质IGF-I的基础表达量不同(P<0.01),但变化趋势一致,除D+20%Xy外,其他DM组较NC组均增高,差异有显著性(P<0.01);与DC组相比,D+5%Xy组肾脏皮质IGF-I表达增高(P<0.01),D+10%Xy组、D+20%Xy组降低,且D+20%Xy组表现出差异显著性(P<0.01)。结论口服木糖醇可调节糖尿病大鼠血糖水平,通过调节IGF-I表达进而影响肾脏功能。
- 钱宝鑫沈丽津李丽闫睿朱梦瑜孙丽荣林来祥张媛
- 关键词：木糖醇糖尿病大鼠胰岛素肾脏
- 多功能蛋白SND1在5-Fu诱导的肝细胞肝癌凋亡中的机制
- 目的：肝细胞肝癌(Hepatocellular Carcinoma,HCC)对化疗药物的敏感性降低常会导致HCC患者的临床化疗效果不佳。原癌基因 SND1(Staphylococcal Nuclease And Tudo...
- 崔晓腾高星杰赵春妍钱宝鑫杨洁
- 关键词：肝细胞肝癌凋亡
- SND1延缓CCl4诱导的转基因小鼠的肝纤维化进程但促进肝癌的发生及发展
- 目的： 多功能蛋白SND1可以影响肝脏代谢、肝癌发生、肝癌血管生成以及肝癌细胞增殖等过程，但其在肝纤维化过程中发挥的作用仍不得而知。本课题主要旨在探讨SND1蛋白在肝纤维化的发生和发展中所起的作用，以及相关的分子机制，...
- 钱宝鑫
- 关键词：肝纤维化肝癌细胞成分
- 文献传递
- 重组真核质粒pEGFP-C2-hG3BP-Domain(1～5)的构建及表达被引量：3
- 2011年
- 目的:将人类G3BP(Ras-GTPase activating protein SH3 domain binding protein)蛋白Domain(1～5)基因片段分别定向连入pEGFP-C2质粒,使G3BP蛋白各功能片段与绿色荧光蛋白在HeLa细胞内融合表达。方法:以重组质粒pEGFP-C1-G3BP为模板,PCR法扩增出目的基因,利用EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切法将目的片段连接到pEGFP-C2载体上,再将构建成功的pEGFP-C2-hG3BP-Domain(1～5)重组质粒转染入HeLa细胞内,以荧光显微镜及Western印迹法检测绿色荧光蛋白与目的蛋白的融合表达情况。结果:以单/双酶切及基因测序法鉴定构建的重组质粒均无误,荧光显微镜及Western印迹结果均检测到绿色融合蛋白的表达。结论:重组pEGFP-C2-hG3BP-Domain(1～5)质粒成功构建并表达。
- 朱梦瑜高星杰钱宝鑫葛林赵虹赵秀娟杨洁
- 关键词：绿色荧光蛋白质类质粒重组融合蛋白质类
- 转染pcDNA-FLAG-EXOSC2质粒对宫颈癌HeLa细胞增殖与凋亡的影响被引量：2
- 2017年
- 目的观察转染pcDNA-FLAG-EXOSC2质粒对宫颈癌He La细胞增殖与凋亡的影响。方法构建pcDNA-FLAG-EXOSC2重组质粒。将体外培养的He La细胞分为EXOSC2过表达组、空质粒组,分别转染pcDNA-FLAGEXOSC2重组质粒、pcDNA3.1(+)质粒。采用CCK-8法观察各组细胞增殖情况(结果以OD450表示),采用流式细胞术检测各组细胞凋亡率。结果 EXOSC2过表达组、空质粒组OD450分别为0.665 2±0.050 94、0.443 6±0.035 19,两组OD450相比,P<0.05。EXOSC2过表达组、空质粒组细胞凋亡率分别为5.99%±0.37%、7.57%±0.64%,两组细胞凋亡率相比,P<0.05。结论转染pcDNA-FLAG-EXOSC2可以促进宫颈癌He La细胞增殖并抑制其凋亡。
- 赵春妍崔晓腾钱宝鑫任媛媛杨洁高星杰
- 关键词：宫颈癌细胞增殖
- Tudor-SN蛋白一级结构间断的SN5结构域质粒的拼接构建
- 2011年
- 目的 实现Tudor-SN蛋白TSN结构域内间断的SN5基因片段（SN5α、SN5β）的拼接以及与绿色荧光蛋白在HeLa细胞中的融合表达.方法 利用Geno 3D对拼接的SN5进行结构预测.以重组质粒pSG5-Tudor-SN-flag为模板,PCR分别扩增出SN5α和SN5β的基因,双酶切并纯化后,先将SN5β引入pEGFP-C2,完成重组质粒pEGFP-C2-SN5β,再将SN5α引入pEGFP-C2-SN5β,完成重组质粒pEGFP-C2-SN5.将pEGFP-C2-SN5β/ SN5脂质体法转染HeLa细胞,荧光显微镜下观察融合蛋白的荧光表达情况,Western印迹检测融合蛋白的表达.结果 ① 拼接的SN5结构预测显示与TSN完整结构中的SN5高度重合;②对重组质粒进行双酶切鉴定可见SN5α、SN5β、SN5的cDNA片段;③ 转染重组质粒后可观察到绿色荧光蛋白的表达;④ Western印迹后可在相应位置检测到融合蛋白.结论 pEGFP-C2-SN5/SN5β重组质粒构建成功,SN5α和SN5β在pEGFP-C2中实现了顺序拼接;目的片段可与绿色荧光蛋白在HeLa细胞中融合表达,融合蛋白可与抗GFP抗体结合用于蛋白检测.
- 钱宝鑫朱梦瑜高星杰刘欣苏超付晓王保亚王鑫廷杨洁
- 关键词：PEGFP-C2重组质粒
