赵秀娟
- 作品数：18 被引量：39H指数：3
- 供职机构：天津医科大学基础医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金天津市高等学校科技发展基金计划项目天津市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 低碘膳食对大鼠脑组织中同源盒基因NKX-2.2表达的影响被引量：2
- 2009年
- 目的:探讨低碘膳食对大鼠脑组织同源盒基因Nkx-2.2表达的影响,揭示低碘导致脑发育迟滞的可能分子作用机制。方法:雌性Wistar大鼠随机分为2组:低碘组和正常对照组,均饲以低碘饲料,分别饮用去离子水和碘酸钾溶液,3个月后分别取材于孕16天、新生及20日鼠龄低碘及正常仔鼠,实时荧光定量PCR检测其脑组织中Nkx-2.2 mRNA含量。结果:低碘组血清甲状腺激素水平明显低于对照组(P<0.05或P<0.01),建立缺碘Wistar大鼠动物模型。低碘及正常各年龄组的表达水平随着年龄增加表达趋势不一致,但均有明显差别(F=573.68、120.82,P<0.01)。各年龄组低碘及正常大鼠比较,孕16天正常鼠Nkx-2.2表达水平明显高于低碘鼠(t=6.86,P<0.01),而新生及20日龄低碘鼠Nkx-2.2表达水平明显高于正常鼠(t=15.85、10.61,P<0.01)。结论:同源盒基因Nkx-2.2表达差异与低碘导致脑发育迟滞密切相关。
- 张瑞戈海泽赵秀娟李媛郭刚
- 关键词：低碘同源盒基因实时荧光定量PCR脑发育
- 肿瘤发生的表观遗传学:进展与临床意义被引量：13
- 2012年
- 表观遗传（epigenetics）指所有不通过DNA序列改变就能影响基因表达（从而决定细胞乃至个体表型）的、可遗传的（即可伴随细胞分裂传递下去）调控方式,包括DNA甲基化、组蛋白修饰、染色质重塑、miRNA、朊病毒等。表观遗传调控在干细胞自我更新、定向分化、器官发育等生命过程中起着至关重要的作用：
- 王先火赵秀娟邱立华王华庆王玺
- 关键词：表观遗传肿瘤DNA甲基化组蛋白修饰
- 应用CRISPR/Cas9系统在G401细胞株中敲除p21基因被引量：1
- 2016年
- 目的运用CRISPR/Cas9基因编辑技术,在人恶性横纹肌样瘤细胞株G401中敲除p21基因。方法通过反转录定量PCR(RT-q PCR)及Western blot检测各瘤细胞株中p21的表达,针对p21基因作用的功能域,设计了靶向人p21基因第3个外显子的向导RNA(sg RNA),克隆入lenti CRISPR v2载体。将测序及酶切鉴定正确的重组质粒在293T工具细胞中制备慢病毒颗粒并感染G401细胞,使用嘌呤霉素进行阳性细胞筛选,显微镜下挑取单克隆细胞团并继续培养获得G401单克隆细胞株。提取单克隆细胞株RNA及蛋白,利用RT-q PCR及Western blot方法检测细胞株中p21的敲除效果。结果 p21在人横纹肌样瘤细胞中高表达。成功构建靶向p21基因的lenti CRISPRv2-sg RNA重组慢病毒质粒。与对照组相比,筛选得到的G401亚克隆细胞系中p21蛋白表达缺失。结论针对难转染的G401细胞,应用CRISPR/Cas9系统成功构建了p21基因敲除的稳定株,为后续深入研究p21在人恶性横纹肌样瘤中的作用机制奠定了基础。
- 赵秀娟陈万标张沛涛张娜楚晓文白向阳杨冰吴旭东王玺
- 关键词：横纹肌瘤P21基因敲除慢病毒
- 利用改良的CRISPR/Cas9基因编辑系统构建HeLa细胞SND1基因敲除稳定株被引量：2
- 2015年
- 目的:利用改良的CRISPR/Cas9基因编辑系统敲除He La细胞中SND1基因,构建He La细胞SND1基因敲除稳定株。方法:设计一对特异性识别SND1基因第二个启动子的上下游sg RNA,以PX462质粒为载体,构建出一对重组真核表达质粒。酶切和测序鉴定后,将一对重组质粒共同转染进入He La细胞中,使用嘌呤霉素进行阳性细胞筛选,挑取单克隆细胞进行培养。最后用Western Blot鉴定敲除效果。结果:sg RNA正确插入到PX462质粒载体中,转染并筛选单克隆后的细胞中没有SND1蛋白的表达。结论:成功构建出He La细胞SND1基因敲除稳定株。
- 刘郁莹崔晓腾高星杰赵秀娟付雪葛林苏超杨洁
- 关键词：基因敲除HELA细胞
- 低碘膳食对大鼠脑组织同源盒基因nkx2．1表达的影响被引量：1
- 2009年
- 目的研究低碘膳食对大鼠脑组织同源盒基因nkx2．1表达的影响。方法雌性Wistar大鼠40只，按体质量随机分为低碘组和对照组，均饲以含碘量为13．66ug／kg的低碘饲料，分别饮用去离子水和200ug／L碘酸钾溶液，3个月后用化学发光免疫分析方法测定大鼠血清甲状腺激素（TT3、TT4、FT3、FT4），再将两组大鼠与健康雄鼠进行交配，在孕16d、新生及20日龄时，取胎鼠或仔鼠脑组织，用实时荧光定量PCR（FQ-PCR）法检测脑组织nkx2．1 mRNA表达。结果大鼠血清TT3、TT4、FT3、FT4水平，低碘组[（0．89±0．20）、（0．32±0．16）nmol／L、（3．33±0．61）、（3．28±0．80）pmol／L]明显低于对照组[（1．04±0．06）、（39．42±14．68）nmol／L、（4．83±0.33）、（26．99±4．48）pmol／L；t值分别为2．71、6．52、5．70、12．89，P〈0．05或〈0．01]。对照组孕16d、新生及20日龄大鼠脑组织nkx2．1 mRNA表达分别为（5．60±0．30）×10^-3、（1．20±0．29）×10^-3、（0．18±0．06）×10^-3，低碘组同日龄大鼠nkx2．1 mRNA表达分别为（3．00±0．55）×10^-3、（1．90±0．21）×10^-3、（0．69±0．15）×10^-3。对照组、低碘组各日龄胎、仔鼠之间nkx2．1 mRNA表达水平比较，差异有统计学意义（F值分别为2102．07、162．40，P均〈0．01），对照组、低碘组新生仔鼠nkx2．1 mRNA的表达比孕16d胎鼠低（P均〈0．01），20日龄仔鼠nkx2．1 mRNA表达比孕16d和新生降低（P均〈0．01）；低碘组与同日龄对照组比较，对照组孕16d胎鼠nkx2．1 mRNA表达明显高于低碘组胎鼠（t=16．073，P〈0．01），而新生及20日低碘组明显高于对照组（t值分别为7．537、12．227．P均〈0．01）。结论低碘导致的脑发育迟滞与nkx2．1在脑组织中的差异表达密切相关。
- 赵秀娟张瑞戈海泽舒剑波郭刚
- 关键词：碘缺乏症基因同源盒基因表达
- 大鼠EZH2基因过表达质粒以及催化亚基缺失质粒构建及鉴定
- 2016年
- 目的 构建特异性的大鼠EZH2过表达质粒以及EZH2催化亚基SET domain缺失质粒，并在293T细胞中评估其表达水平。 方法 提取大鼠心脏组织RNA，逆转录为cDNA，重叠PCR扩增催化亚基SET domain缺失的EZH2的cDNA，以其为模板进行PCR扩增，将PCR产物和载体双酶切，切胶回收目的片段，经T4连接酶连接，连接产物转入感受态细胞，涂板挑取单克隆摇菌测序，提取质粒，采用脂质体转染法转染293T细胞。 结果 Western Blot 法和RT-PCR法检测结果表明，质粒在293T细胞中实现EZH2基因的过表达。 结论 构建的2种质粒为进一步研究EZH2基因与心肌肥厚的关系及EZH2催化亚基的作用奠定了基础。
- 熊显佳杨冰赵秀娟孙琰赵建松武莉莉刘艺洁张玲
- 关键词：EZH2催化亚基重组质粒心肌肥厚
- 低碘膳食对大鼠脑组织同源盒基因Nkx-6．1和Nkx-6．2 mRNA表达的影响被引量：3
- 2009年
- 目的研究低碘膳食对大鼠脑组织同源盒基因Nkx-6．1、Nkx-6．2 mRNA表达的影响，探讨低碘导致脑发育迟滞的可能分子作用机制。方法20只雌性Wistar大鼠按体质量随机分为2组：低碘组和对照组，均饲以低碘饲料（含碘量为13．66μg／kg），分别饮用去离子水和含碘200μg／L的碘酸钾溶液，3个月时采用化学发光免疫分析法检测大鼠血清甲状腺激素水平，然后将雌鼠与正常饲养的Wistar雄鼠进行交配，分别取孕16d、新生期及生后20日龄仔鼠脑组织，采用实时荧光定量PCR检测Nkx-6．1、Nkx-6．2 mRNA的表达。结果①低碘组大鼠血清TT3、TT4、FT3、FT4水平[（0．89±0．20）、（0．32±0．16）nmol／L，（3．33±0．61）、（3．28±0．80）pmol／L]均明显低于对照组[（1．04±0．06）、（39．42±14．68）nmol/L，（4．83±0．33）、（26．99±4．48）pmol，t=2．71、6．52、5．70、12．89，P〈0．05或〈0．01]。②对照组孕16d、新生期及20日龄仔鼠脑组织Nkx-6．1 mRNA表达水平分别为（1．90±0．23）×10^-3、（1．86±0．40）×10^-4、（1．11±0．27）×10^-4，各日龄间比较差异有统计学意义（F=827．58．P〈0．01），随着日龄增加Nkx-6．1mRNA表达水平明显下降．两两比较差异均有统计学意义（P均〈0．01）；低碘组各日龄仔鼠脑组织Nkx-6．1mRNA表达水平分别为（1．16±0．16）×10^-3、（3．44±0．49）×10^-4、（3．58±0．64）×10^-4，差异有统计学意义（F=297．25，P〈0．01），但变化趋势与对照组不同，孕16d表达水平最高，与新生期及20日龄比较，差异有统计学意义（P〈0．01）；低碘组与对照组比较，孕16d明显降低（t=10．14，P〈0．01），而新生期及20日龄则明显增高（t值分别为9．69、13．81，P均〈0．01）。③对照组和低碘组各日龄仔鼠脑组织Nkx-6．2 mRNA表达水平分别为（1．03±0．19）×10^-2、（1．33±0.10）×10^-3、（8�
- 张瑞戈海泽赵秀娟李媛郭刚
- 关键词：聚合酶链反应
- EZH2基因RNAi慢病毒载体的包装及鉴定
- 2014年
- 目的 外周T细胞淋巴瘤（PTCL）源于成熟的胸腺后淋巴细胞,是一类少见的生物学行为及临床表现均高度异质性的疾病,且预后差.包装zeste基因增强子同源物2（EZH2）RNA干扰（RNAi）慢病毒载体,可为今后相关实验研究奠定基础.方法 靶向EZH2基因的短发夹RNA（EZH2-shRNA）质粒转化感受态细菌,筛选阳性克隆,经测序鉴定正确后通过脂质体将慢病毒三质粒系统共转染293T细胞,进行慢病毒包装.病毒载体感染Hut78细胞后,观察感染效率,并用反转录定量PCR（RT-qPCR）和Western Blot检测EZH2mRNA和蛋白表达水平.结果 成功包装了慢病毒表达载体,对Hut78细胞的感染效率在95％以上.RT-qPCR和Western Blot检测结果显示,EZH2基因在靶细胞中的表达水平降低.结论 成功包装并鉴定了EZH2基因RNAi慢病毒表达载体.
- 陈青青杨冰赵秀娟马芹刘超梁绍平闵琦吴少华孟歆怿王玺王华庆张会来
- 关键词：外周T细胞淋巴瘤慢病毒载体RNA干扰
- 甲状腺功能减低孕鼠补充甲状腺素对子代脑组织同源盒基因Nkx2．1mRNA表达的影响被引量：4
- 2010年
- 目的通过对妊娠期甲状腺功能减低（甲低）大鼠补充左旋甲状腺素（L-thyroxine，L-T4），探讨甲状腺素对子代鼠脑组织同源盒基因Nkx2．1 mRNA表达影响，探讨该基因的表达与甲状腺素水平之间的关系。方法Wistar雌性大鼠120只，按体重分层随机分为对照组、甲低非治疗组，甲低孕鼠妊娠早期（妊娠第1—17天）补充L—T4高、中、低剂量组，甲低孕鼠妊娠晚期（妊娠第18天至分娩后第20天）补充L．T4高、中、低剂量组，共8组，每组15只；补充L—T4高、中、低剂量分别为：3．5、2．0,0．5μg/100g体重。各组均给予低碘饮食，对照组饮用碘浓度为200μg／L碘酸钾溶液，其余7组饮用去离子水。3个月后各组均与正常雄性大鼠交配，确定受孕后各甲低给药组于不同时期给予补充L-T4。各组分别取孕第17天胎鼠、新生及出生后第20天龄仔鼠前脑组织，实时荧光定量PCR（Real-time PCR）检测Nkx2．1mRNA水平。结果甲低孕鼠妊娠早期补充L-T4高、中、低剂量组，甲低孕鼠妊娠晚期补充L—T4高、中、低剂量组，甲低非治疗组、对照组大鼠血清TT3，分别为（0．85±0．17）、（0．81±0．18）、（0．86±0．21）、（0．85±0．20）、（0．89±0．18）、（0．85±0．20）、（0．86±0．20）、（1．08±0．07）nmol／L（F：4．08，P〈0．01）；TT4分别为（0．43±0．16）、（0．39±0．11）、（0．39±0．13）、（0．43±0．17）、（0．51±0．19）、（0．43±0．16）、（0．41±0．15）、（39．43±14．16）nmol／L（F=31．99，P〈0．01）；FT3分别为（3．29±0．61）、（3．29±0．61）、（3．24±0．61）、（3．28±0．63）、（3．31±0．59）、（3．28±0．50）、（3．24±0．49）、（4．93±0．46）pmol／L（F：5．79，P〈0．01）；FT4分另0为（3．38±0．80）、（3．31±0．67）、（3．29±0．73）、（3．27±0．71）、（3．48±0．81）、（3．56±0�
- 李敬华张瑞汪蓓蕾娜仁李媛赵秀娟梁东春郭刚
- 关键词：甲状腺功能减退症基因同源盒甲状腺素
- 白藜芦醇对H2O2及TGF-β2诱导人小梁网细胞的影响及机制探讨被引量：2
- 2016年
- 目的观察过氧化氢（H2O2）及转化生长因子（TGF）-β2诱导人小梁网细胞（HTMCs）后对纤维连接蛋白（FN）、胶原蛋白1型（COL1）、核因子（NF）-κBP65蛋白和白细胞介素（IL）-1β基因表达的影响及白藜芦醇（RSV）的干预作用。方法（1）选取汇合度70%～80%的HTMCs分为5组。实验组于无血清培养基中分别加入浓度为150、300、450、800μmol/L的H2O2处理，对照组的培养基中不加H2O2。Westernblot法检测各组FN、COL1、NF-κBP65、NF-κBP65磷酸化（P-NF-κBP65）蛋白的表达，实时定量PCR法检测IL-1β基因的表达。（2）HTMCs细胞分为3组。对照组以不含H2O2及RSV的无血清培基处理，H2O2组以300μmol/L的H2O2处理，H2O2+RSV组同时加入300μmol/L的H2O2及25μmol/L的RSV处理。检测各组上述蛋白和基因的表达情况。免疫荧光检测各组NF-κBP65在HTMCs中的定位。（3）HTMCs细胞分为3组。对照组以不含TGF-β2及RSV的无血清培基处理，TGF-β2组以5μg/L的TGF-β2处理，TGF-β2+RSV组为同时加入5μg/L的TGF-β2及25μmol/L的RSV处理。检测各组上述蛋白和基因的表达情况。结果（1）与对照组比较，150、300、450、800μmol/L组FN和P-NF-κBP65蛋白表达水平均增高，300、450、800μmol/L组COL1蛋白和IL-1β基因表达水平增高（P<0.05），其他指标比较差异均无统计学意义。（2）H2O2组较对照组FN、COL1、P-NF-κBP65蛋白和IL-1β基因表达水平均增高，而H2O2+RSV组较H2O2组上述指标均降低，H2O2+RSV组较对照组仅IL-1β降低（P<0.05）。对照组仅细胞质表达NF-κBP65，H2O2组细胞胞质及核中均有NF-κBP65表达，且核中表达较多；H2O2+RSV组细胞胞质中表达NF-κBP65较核中多。（3）TGF-β2组较对照组FN、COL1、P-NF-κBP65的蛋白和IL-1β基因水平表达均增高（P<0.05），TGF-β2+RSV组较TGF-β2组上述指标均降低（P<0.05）。结论H2O2和TGF-β2能上调HTMCs的FN、COL1、P-NF-κBP65蛋白及IL-1β基因的�
- 齐艳赵秀娟徐琳琪吴旭东汪建涛
- 关键词：小梁网转化生长因子Β2白细胞介素1Β白藜芦醇
