严晓晔
- 作品数:9 被引量:13H指数:2
- 供职机构:天津医科大学更多>>
- 发文基金:天津市科技攻关项目天津市科技发展战略研究计划项目更多>>
- 相关领域:医药卫生生物学更多>>
- 间充质干细胞对心肌损伤修复的研究进展被引量:2
- 2009年
- 严晓晔李彤
- 关键词:心肌损伤间充质干细胞
- 缺氧脐带间充质干细胞对脐血CD34^+祖细胞免疫反应的影响
- 2010年
- 目的:探讨脐带来源的缺氧间充质干细胞(MSCs)是否能有效抑制脐血CD34+祖细胞免疫排斥反应,影响反应过程中免疫调节细胞因子的分泌。方法:从脐带中分离、培养MSCs,观察其生长形态,流式细胞术检测其表面标志;将缺氧处理后的脐带MSCs加到脐血CD34+祖细胞、外周血单个核细胞(PBMC)共培养体系中,96h后收集上清液,ELISA检测IFN-γ和IL-10水平。结果:脐带MSCs不表达CD40、CD80、CD86、HLA-DR、CD34;缺氧的脐带MSCs能抑制共培养体系中淋巴细胞IFN-γ的分泌(与对照组比,P<0.05),同时促进IL-10分泌(与对照组比,P<0.05),但与非缺氧脐带MSCs组相比,IFN-γ的分泌量增多,IL-10的分泌量减少。结论:缺氧脐带MSCs能抑制脐血CD34+祖细胞的免疫排斥反应,抑制IFN-γ的分泌,同时促进IL-10分泌,但与非缺氧脐带MSCs相比,免疫调节功能下调。
- 严晓晔李彤侯跃龙张臣
- 关键词:间充质干细胞脐血缺氧
- 脐带间充质干细胞对脐血CD34+细胞向内皮细胞分化的影响研究
- 李彤段大为胡晓旻王少程赵成秀吴鹏张强侯跃龙严晓晔张臣
- 1、脐带间充质干细胞对脐血CD34+细胞的免疫反应的影响,研究运用酶消化法从脐带中分离、培养 间充质干细胞(MSCs),流式细胞仪对其表面特异性抗体及免疫相关性抗体进行鉴定,将CD34+祖细胞与外周血单个核细胞共培养组设...
- 关键词:
- 关键词:CD34+细胞充质干细胞内皮细胞脐血
- 脐血CD34^+细胞向内皮细胞诱导分化的体外研究被引量:1
- 2010年
- 目的:探讨从脐血中分离CD34+细胞,并诱导、鉴定其分化为内皮细胞的方法。方法:羟乙基淀粉沉降、密度梯度离心两步法制备脐血单个核细胞,免疫磁珠分选法(MACS)获得CD34+细胞,在含有细胞因子的M199培养基中诱导。观察细胞形态变化,摄取Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白(Dil-AcLDL)的情况,流式鉴定细胞表面标志。结果:分选CD34+细胞纯度在91%以上,培养3d有明显集落形成及部分细胞贴壁,14d贴壁细胞呈条索状,逐渐增多后呈铺路石样改变。流式检测贴壁细胞表达血管内皮细胞特异性标志物CD144、vWF、CD31、CD34,而白细胞共同抗原CD45为阴性表达,与成熟的脐静脉内皮细胞表达率相近。免疫荧光发现贴壁细胞呈现红色荧光,提示细胞摄取Dil-AcLDL,证明CD34+细胞分化为有功能的内皮细胞。结论:脐血中存在CD34+细胞且用两步法和MACS可获得高纯度CD34+细胞,在特定条件下可分化为内皮细胞。
- 张臣李彤侯跃龙严晓晔朱争艳高英堂孙淑梅
- 关键词:脐血CD34+细胞内皮细胞分化
- CoCl_2缺氧处理对脐带间充质干细胞促血管生长因子表达的影响被引量:2
- 2011年
- 目的:探讨氯化钴(CoCl2)模拟缺氧预处理对人脐带间充质干细胞(UC-MSCs)中碱性成纤维生长因子(bFGF)和血管内皮生长因子(VEGF)基因表达及蛋白分泌的影响。方法:分离、培养UC-MSCs。取第3代的UC-MSCs,运用含150μmol/L的CoCl2培养液培养细胞72 h,用流式细胞仪检测缺氧对UC-MSCs表面标志物(CD34、CD45、CD90、CD105、CD29及CD49)的影响。依据CoCl2的浓度(0、50、100μmol/L及150μmol/L)将UC-MSCs分为4个组,即对照组、低、中、高CoCl2组,每个组处理24 h、48 h和72 h。用SYBRGREN荧光定量RT-PCR检测bFGF、VEGF mRNA的表达,用ELISA法检测bFGF和VEGF蛋白的表达。结果:经含150μmol/L CoCl2的培养液缺氧处理,没有改变细胞的形态和表面标记物。在缺氧培养时间相同的情况下,bFGF、VEGF基因的表达均随着CoCl2浓度的增加而增加,CoCl2为150μmol/L时达到峰值(P<0.05)。当CoCl2浓度为150μmol/L培养不同时间(24 h、48 h及72 h)时,随着缺氧预处理时间的延长,bFGF、VEGF基因的表达随之增加,于48 h时达到峰值(P<0.05),bFGF、VEGF基因的表达分别为8.15±0.10和16.67±0.17,延长缺氧培养的时间基因的表达减小(P<0.05);蛋白与基因表达的变化基本一致。在含150μmol/L CoCl2的培养液培养48 h,bFGF和VEGF的表达达到顶峰(P<0.05),分别为(69.63±7.90)ng/L和(89.55±5.45)ng/L。结论:适当浓度的CoCl2(<150μmol/L)对UC-MSCs的生物学功能影响轻微。CoCl2可用于细胞的模拟缺氧,缺氧对UC-MSCs bFGF、VEGF的分泌具有时间和剂量依赖性,以含150μmol/L CoCl2的培养液培养48 h,为促进bFGF、VEGF基因和其蛋白表达的最适条件。
- 侯跃龙李彤张臣严晓晔朱争艳高英堂吴鹏
- 关键词:缺氧脐带间充质干细胞血管内皮生长因子碱性成纤维生长因子
- 脐带间充质干细胞对CD34+祖细胞免疫反应的影响
- 目的:探讨缺氧及非缺氧脐带来源的间充质干细胞(UC-MSCs)是否能有效抑制脐血CD34+祖细胞免疫反应,影响其反应过程中免疫细胞因子的分泌。
方法:通过胶原酶及胰酶消化法从脐带中分离获得MSCs,观察其生长形态,...
- 严晓晔
- 关键词:脐带免疫排斥反应
- 文献传递
- 缺氧预处理对脐带间充质干细胞bFGF分泌的影响被引量:4
- 2010年
- 目的探讨氯化钴(CoCl2)模拟缺氧预处理对人脐带间充质干细胞(UC-MSCs)碱性成纤维生长因子(bFGF)分泌的影响。方法分离、培养人UC-MSCs,显微镜观察其形态学特征,并运用流式细胞仪检测其表面标志物的表达;选取P3代健康人UC-MSCs,MTT法检测不同浓度(0、50、100、150、200、250μmol/L)CoCl2对UC-MSCs活力及增殖的影响,然后将细胞分为4组,分别采用0、50、100、150μmol/L CoCl2处理,于24、48、72h后检测bFGF蛋白及mRNA的表达并分析各组间的差异。结果经适当浓度(≤150μmol/L)CoCl2处理后,UC-MSCs生长加快,平台期提前,而高浓度(>200μmol/L)CoCl2对细胞活力有负面影响。经50、100、150μmol/L CoCl2处理后,各组bFGF蛋白分泌水平均明显高于0μmol/L CoCl2处理组(P<0.05),且48、72h时点均高于24h时点(P<0.05),150μmol/L CoCl2处理组72h时点bFGF蛋白表达水平明显低于48h(P<0.05),100μmol/L CoCl2处理组72h时点bFGF蛋白表达水平明显高于48h(P<0.05),而50μmol/L CoCl2处理组72h时点与48h时点比较无显著差异。bFGF mRNA表达改变与蛋白基本相一致,但50μmol/LCoCl2处理组在各时点没有显著差异。结论适当浓度(≤150μmol/L)的CoCl2对UC-MSCs增殖能力影响较小,可用于细胞模拟缺氧;缺氧预处理对人UC-MSCs的bFGF分泌有一定促进作用。
- 侯跃龙李彤严晓晔张臣高英堂朱争艳
- 关键词:成纤维细胞生长因子2细胞低氧氯化钴
- 人脐静脉血管内皮细胞的高效分离与培养被引量:5
- 2010年
- 目的:建立人脐静脉内皮细胞(HUVEC)体外分离、培养、鉴定的高效方法。方法:胰酶消化法从脐静脉获得HUVEC,观察其形态并传代培养,检测其摄取Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白(Dil-AcLDL)的情况,传3代流式检测内皮细胞特异性表达。结果:消化分离的细胞呈小圆形且聚集成团;2h细胞开始贴壁,呈条索状;7d细胞增多呈漩涡样生长;此后细胞继续增多接近融合,呈铺路石样改变。流式检测细胞高表达血管内皮细胞特异性标志CD144、vWF、CD31,部分表达CD34,而白细胞共同抗原CD45为阴性表达。镜下发现贴壁细胞原代、第5代摄取Dil-AcLDL,胞浆呈现红色荧光,提示为有活性的内皮细胞。结论:利用胰酶消化法能从人脐静脉获得大量内皮细胞,体外培养后能成功增殖传代。
- 张臣李彤侯跃龙严晓晔高英堂
- 关键词:内皮细胞脐静脉细胞培养技术细胞分离连续传代
- 脐带间充质干细胞对脐血CD_(34)^+祖细胞免疫反应的影响
- 2010年
- 目的探讨脐带来源的间充质干细胞(UC-MSCs)是否能有效抑制脐血CD34+祖细胞的免疫反应,影响反应过程中免疫调节细胞因子的分泌。方法从脐带中分离、培养MSCs,观察其生长形态,流式细胞术检测表面标志;将不同数量的UC-MSCs加入脐血CD34+祖细胞、外周血单个核细胞(PBMC)共培养体系中作为实验组,不加UC-MSCs的CD34+祖细胞、PBMC共培养体系为阴性对照;另设用Transwell将UC-MSCs和脐血CD34+祖细胞、外周血单个核细胞共培养体系分隔培养,分别收集各组上清液,ELISA检测IFN-γ和IL-10水平。结果UC-MSCs高表达CD105、CD90、CD29、CD49;不表达CD40、CD80、CD86、HLA-DR;加UC-MSCs组与阴性对照组相比,IFN-γ的分泌量减少(19.30±0.78)vs(27.00±1.11),(P<0.05);IL-10的分泌量增多(50.28±1.29)vs(31.68±3.08),(P<0.05),而且具有数量依赖性;Transwell分隔培养组与阴性对照组相比,IFN-γ的分泌量减少(18.33±0.47)vs(27.00±1.11),(P<0.05);IL-10的分泌量增多(48.47±1.18)vs(31.68±3.08),(P<0.05);与接触培养组相比,IFN-γ的分泌量增多(18.33±0.47)vs(7.14±0.13),(P<0.05),IL-10的分泌量减少(85.19±2.36)vs(48.47±1.18),(P<0.05)。结论UC-MSCs能抑制脐血CD34+祖细胞的免疫反应中IFN-γ的分泌,同时促进IL-10分泌,并且这种作用部分依赖于细胞间的相互接触。UC-MSCs和CD34+祖细胞共移植可作为干细胞移植治疗缺血性心肌病的有效方式。
- 严晓晔李彤张臣侯跃龙朱争艳王鹏
- 关键词:间充质干细胞脐带CD34^+细胞脐血