崔振中
- 作品数：7 被引量：14H指数：2
- 供职机构：北京医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- GFP-p16融合基因表达载体在BHK HeLa细胞中荧光蛋白表达的研究被引量：2
- 1998年
- 本文报道了通过脂质体转染技术将本室构建成的ＧＦＰ－ｐ１６融合基因表达载体ｐＣｐ１６Ｇ和ｐＣＧｐ１６分别导入ＢＨＫ、ＨｅＬａ细胞中，研究它们在真核细胞中荧光蛋白的表达。结果表明，外源脂质体对ＢＨＫ、ＨｅＬａ等真核细胞无损伤，经斑点杂交检测证明，外源基因可以通过脂质体转染技术整合到细胞基因组中。研究结果还表明，ｐ１６基因与ＧＦＰ基因的３′端连接，可以保持ＧＦＰ的荧光特性，表达荧光蛋白，而与ＧＦＰ基因的５′端连接，则不能表达荧光。
- 李华王禄增刘维全崔振中王太一
- 关键词：HELA细胞荧光蛋白脂质体转染GFP基因细胞基因
- 全文增补中
- 人促红细胞生成素基因组基因的克隆及全序列分析被引量：2
- 1998年
- 为了克隆到全长的人促红细胞生成素基因，从而在真核系统中及转基因动物乳腺中进行表达，从一个中国人的血细胞中提取基因组ＤＮＡ，构建了不完全基因组噬菌体文库，文库效价为５×１０４．这种文库的构建方法是用ＢａｍＨⅠ对基因组ＤＮＡ进行完全酶切，回收１０．５ｋｂ左右的酶切片段，插入到λ－噬菌体ＥＭＢＬ３载体中．筛选文库所使用的探针是用ＰＣＲ方法从基因组ＤＮＡ模板中扩增的５５６ｂｐ的ＥＰＯ基因片段．从该文库中筛选到了一个含有完整ＥＰＯ基因的插入片段长度为１２．５ｋｂ的阳性克隆．经全序列分析证实，所克隆的ＥＰＯ基因编码正确，但在５′－侧翼及第一内含子处与国外发表的序列相比较，发现两处核苷酸差异，这两个核苷酸的差异改变了５′－调控区的两个小的开放阅读框——ＯＲＦ１和ＯＲＦ３，其在基因表达调探方面的作用值得进一步探讨．
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- 关键词：基因文库促红细胞生成素PCREPO
- 促红细胞生成素基因表达载体的构建及其在CHO细胞中表达的研究被引量：3
- 1998年
- 用从基因文库中所克隆的促红细胞生成素（ＥＰＯ）基因组基因，构建了３种由不同启动子调控的表达载体——ｐＯＰ１３／ＥＰＯ，ｐＲＳＶ／ＥＰＯ，ｐＣＭＶ／ＥＰＯ，在这３个表达载体的构建过程中对基因的转录起始效率、内含子的剪接、５′非翻译区和３′非翻译区对基因表达的影响等因素都加以考虑．用脂质体转染法分别将上述３个载体导入ＣＨＯ细胞，经瞬时表达，用ＥＬＩＳＡ方法检测，表达量分别为１９０ｍＩＵ／ｍｌ、１６０ｍＩＵ／ｍｌ、４４７ｍＩＵ／ｍｌ．用表达载体ｐＯＰ１３／ＥＰＯ转染ＣＨＯ－Ｋ１２细胞，在４００μｇ／ｍｌ的Ｇ４１８浓度下筛选稳定表达细胞克隆，获得了表达量约为１６０ＩＵ／１０６细胞（４８ｈ）的Ｃ１０细胞株．表达产物经Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测发现了ＥＰＯ阳性条带．用ＴＦ－１细胞对ＥＰＯ进行了生物活性检测，初步证实所表达的ＥＰＯ有生物活性．
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- 关键词：促红细胞生成素CHO细胞
- GFP转基因指示系统建立的研究被引量：6
- 1998年
- ＧＦＰ（绿色荧光蛋白）是存在于发光水母体内的一种吸收蓝光或紫外光（３９５ｎｍ）后能够发出绿色荧光的天然蛋白质。本文报道了将ＧＦＰ表达质粒导入ＢＨＫ、ＤＫ、ＲＫ等真核细胞，建立ＧＦＰ真核细胞转基因指示系统。研究表明，ＧＦＰ在ＢＨＫ、ＤＫ、ＲＫ等传代细胞中表达的最佳条件是３３℃，ｐＨ７．２、５％ＣＯ２和转染后４８ｈ观察等。并对野生型ＧＦＰ和突变型ＧＦＰ的发光强度进行了比较，结果表明，在相同条件下。
- 李华刘维全涂长春崔振中莫日根苟鸿鹰王太一
- 关键词：突变型GFP真核细胞水母绿色荧光蛋白转基因
- 全文增补中
- 用dhfr非缺陷型细胞高效表达EPO基因的研究
- 1998年
- 用我们所克隆的促红细胞生成素 (EPO)基因组基因 ,构建了表达载体 pRSV/EPO .用脂质体法转染CHO K1 2细胞 ,在 40 0 μg/mL的G41 8浓度下筛选到了稳定表达EPO的细胞株 ,表达量约为每天每 1 0 6细胞 1 6 0IU .在此基础上又构建了带有潮霉素B抗性的二氢叶酸还原酶 (dhfr)基因表达载体 pHY/dhfr,再将这一表达载体用脂质体方法导入C1 0细胞中 ,经2 0 0 μg/mL的潮霉素B筛选 ,获得了部分潮霉素B抗性的细胞株 ,这些细胞株既能表达EPO又能表达外源的dhfr基因 ,经 1 μmol的氨甲喋呤 (MTX)加压筛选 ,获得了表达量为每天每1 0 6细胞 2 40 0IU的高表达细胞克隆 ,表达量提高了 1 0～ 1 5倍 .初步建立了用非dhfr缺陷型细胞高效表达外源基因的方法 ,这一方法在生产上有实际意义 ,在理论上值得进一步研究 .用TF 1细胞对EPO进行了生物活性检测 。
- 崔振中刘朋朋齐顺章沈恒
- 关键词：促红细胞生成素DHFR基因表达
- GFP-pl6融合基因表达载体的构建
- 1997年
- 本文报道了以ＧＦＰ（绿色荧光蛋白）基因为报告基因，ｐｌ６基因为目的基因，将ｐｌ６基因分别插入ＧＦＰ基因的上游和下游，构建成ＧＦＰ－ｐｌ６融合基因表达载体ｐＣｐｌ６Ｇ和ｐＣＧｐ１６，并通过酶切、电泳技术对重组体进行了鉴定。
- 李华刘维全崔振中金春元王太一
- 关键词：融合基因转基因动物模型P16基因GFP基因重组体
- 定点突变的人胰岛素基因在CHO细胞表达的研究被引量：2
- 1999年
- 目的 研究在哺乳动物细胞中表达人胰岛素。方法 采用寡核苷酸介导的定点突变方法，改造人胰岛素基因组基因，将哺乳动物细胞内蛋白质前体加工酶Ｆｕｒｉｎ 的识别和切割位点Ａｒｇ－Ｘ－Ｌｙｓ－Ａｒｇ－样序列，引入人胰岛素原Ｃ肽两端，在普通ＣＨＯ细胞表达了该改造后的基因。结果 首先应用突变引物Ⅰ：ＣＴＧＣＡＧＧＴＣＣＴＣＧＣＧＣＴＴＣＣＧＧＣＧＧＧＴＣ，引物Ⅱ：ＣＡＣＧＣＴＴＣＴＧＣＣＧＧＧＡＴＣＣＣＴＣ，按照Ｋｕｎｋｅｌ的方法，成功地进行了人胰岛素基因上两个位点的同时突变改造。利用表达载体ＰＲＣ／ＣＭＶ和突变后的胰岛素基因，构建成表达载体ＣＭＶ／ＭＩＮＳ，并在ＣＨＯ细胞中获得了表达。结论 用ＲＩＡ法检测在暂态表达的ＣＨＯ细胞培养液中人胰岛素的表达量为５．５～７０．０μＩＵ／５×１０６ 细胞·ｄ－ １。同时，还利用Ｇ４１８进行了胰岛素表达细胞株的筛选，筛选出的ＣＨＯ细胞株的表达量为：６．５～２５．５μＩＵ／５×１０６细胞·ｄ－ １。
- 寿思明朱宝利崔振中齐顺章
- 关键词：人胰岛素定点突变基因表达CHO细胞糖尿病
