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含第1内含子的猪生长激素cDNA基因的构建被引量：13: 2000年; 以 PCR方法扩增了猪生长激素 ( p GH)基因的第 1内含子 ,经测序表明 ,扩增的 p GH基因第 1内含子的序列与 Vize发表的序列存在 6个碱基的差异 ,同源性达 97.5%,说明 p GH基因第 1内含子具有多态性。此外 ,还发现此内含子存在有转录因子 ATF的结合位点。利用第 2外显子的 Hinf 位点 ,采用将 3个 DNA片段一步连接的方法 ,将扩增的第 1内含子插入到 p GHc DNA的正确位置上 ,从而构建出含第 1内含子的p GHc DNA。; 仲飞刘维全孙丽翠张玉国刘朋朋齐顺章; 关键词：猪生长激素基因 CDNA 病毒载体

鸡α-珠蛋白基因5′端MAR调控GFP基因在COS7细胞中表达的研究: 2007年; 目的研究鸡α-珠蛋白基因5′端核基质结合区(matrix association region,MAR)的基因表达调控作用。方法采用PCR方法扩增鸡α-珠蛋白基因5′端1 600 bp长度的MAR,并将该MAR连接在pCMV/GFP载体CMV启动子上游和GFP报告基因下游,构建含2个MAR的真核表达载体pGFP/2MAR。采用Lipofectimine脂质体介导法转染COS7细胞,用荧光显微镜和流式细胞术对荧光表达进行观察、定量。结果荧光显微镜观察pGFP/2MAR在转染48 h后荧光表达量明显高于pCMV/GFP的荧光表达量;流式细胞仪分析表明,在COS7细胞中pCMV/GFP和pGFP/2MAR的荧光表达量分别为17.9%和33.6%。结论该MAR确实能提高GFP在真核细胞中的表达量。; 孙丽翠贺俊崎郑君芳王雅梅张松张玉国仲飞刘朋朋齐顺章; 关键词：PCR GFP 流式细胞仪

用dhfr非缺陷型细胞高效表达EPO基因的研究: 1998年; 用我们所克隆的促红细胞生成素 (EPO)基因组基因 ,构建了表达载体 pRSV/EPO .用脂质体法转染CHO K1 2细胞 ,在 40 0 μg/mL的G41 8浓度下筛选到了稳定表达EPO的细胞株 ,表达量约为每天每 1 0 6细胞 1 6 0IU .在此基础上又构建了带有潮霉素B抗性的二氢叶酸还原酶 (dhfr)基因表达载体 pHY/dhfr,再将这一表达载体用脂质体方法导入C1 0细胞中 ,经2 0 0 μg/mL的潮霉素B筛选 ,获得了部分潮霉素B抗性的细胞株 ,这些细胞株既能表达EPO又能表达外源的dhfr基因 ,经 1 μmol的氨甲喋呤 (MTX)加压筛选 ,获得了表达量为每天每1 0 6细胞 2 40 0IU的高表达细胞克隆 ,表达量提高了 1 0～ 1 5倍 .初步建立了用非dhfr缺陷型细胞高效表达外源基因的方法 ,这一方法在生产上有实际意义 ,在理论上值得进一步研究 .用TF 1细胞对EPO进行了生物活性检测。; 崔振中刘朋朋齐顺章沈恒; 关键词：促红细胞生成素 DHFR 基因表达

小鼠和兔原代乳腺上皮细胞的培养被引量：8: 2004年; 目的 :对小鼠和兔的原代乳腺上皮细胞进行培养。方法 :取小鼠和兔的乳腺组织 ,用加葡萄糖的PBS稀释胶原酶III作消化液 ,分三个阶段进行消化 ,选择离心后的小细胞团 ,用含激素的培养液培养。结果 :在基本培养液中添加 10ng ml的表皮生长因子和 5 μg ml的胰岛素可以使乳腺上皮细胞富集。结论 :成功地培养出了小鼠和兔的原代乳腺上皮细胞。; 孙丽翠刘朋朋杨国庆仲飞戴钟铨齐顺章; 关键词：乳腺细胞原代培养胶原酶胰岛素小鼠

人促红细胞生成素基因组基因的克隆及全序列分析被引量：2: 1998年; 为了克隆到全长的人促红细胞生成素基因，从而在真核系统中及转基因动物乳腺中进行表达，从一个中国人的血细胞中提取基因组ＤＮＡ，构建了不完全基因组噬菌体文库，文库效价为５×１０４．这种文库的构建方法是用ＢａｍＨⅠ对基因组ＤＮＡ进行完全酶切，回收１０．５ｋｂ左右的酶切片段，插入到λ－噬菌体ＥＭＢＬ３载体中．筛选文库所使用的探针是用ＰＣＲ方法从基因组ＤＮＡ模板中扩增的５５６ｂｐ的ＥＰＯ基因片段．从该文库中筛选到了一个含有完整ＥＰＯ基因的插入片段长度为１２．５ｋｂ的阳性克隆．经全序列分析证实，所克隆的ＥＰＯ基因编码正确，但在５′－侧翼及第一内含子处与国外发表的序列相比较，发现两处核苷酸差异，这两个核苷酸的差异改变了５′－调控区的两个小的开放阅读框——ＯＲＦ１和ＯＲＦ３，其在基因表达调探方面的作用值得进一步探讨．; 崔振中崔振中寿思明刘朋朋朱宝利; 关键词：基因文库促红细胞生成素 PCR EPO

促红细胞生成素基因表达载体的构建及其在CHO细胞中表达的研究被引量：3: 1998年; 用从基因文库中所克隆的促红细胞生成素（ＥＰＯ）基因组基因，构建了３种由不同启动子调控的表达载体——ｐＯＰ１３／ＥＰＯ，ｐＲＳＶ／ＥＰＯ，ｐＣＭＶ／ＥＰＯ，在这３个表达载体的构建过程中对基因的转录起始效率、内含子的剪接、５′非翻译区和３′非翻译区对基因表达的影响等因素都加以考虑．用脂质体转染法分别将上述３个载体导入ＣＨＯ细胞，经瞬时表达，用ＥＬＩＳＡ方法检测，表达量分别为１９０ｍＩＵ／ｍｌ、１６０ｍＩＵ／ｍｌ、４４７ｍＩＵ／ｍｌ．用表达载体ｐＯＰ１３／ＥＰＯ转染ＣＨＯ－Ｋ１２细胞，在４００μｇ／ｍｌ的Ｇ４１８浓度下筛选稳定表达细胞克隆，获得了表达量约为１６０ＩＵ／１０６细胞（４８ｈ）的Ｃ１０细胞株．表达产物经Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测发现了ＥＰＯ阳性条带．用ＴＦ－１细胞对ＥＰＯ进行了生物活性检测，初步证实所表达的ＥＰＯ有生物活性．; 崔振中崔振中刘维全刘维全齐顺章; 关键词：促红细胞生成素 CHO细胞

牛BLG基因5′调控序列控制GFP基因在原代乳腺上皮细胞中的表达: 2004年; 采用胶原酶分阶段消化法对家兔的原代乳腺上皮细胞进行了分离培养 ,并且构建了以牛 β-乳球蛋白 (BL G)基因5′调控序列为启动子、以绿色荧光蛋白 (GFP)基因为报告基因的真核表达载体。将该载体转染兔原代乳腺上皮细胞 ,然后用不同质量浓度的皮质醇、胰岛素和催乳素诱导。结果表明 ,用 5 mg/ L 催乳素 +5 mg/ L 胰岛素 +1m g/ L 皮质醇诱导 ,在诱导 36 h后开始有荧光出现 ,诱导 4 8～ 6 0 h时荧光更强一些 ,而未经诱导的细胞; 孙丽翠刘朋朋杨国庆仲飞刘维全齐顺章; 关键词：基因 GFP

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刘朋朋