卢学新
- 作品数：32 被引量：78H指数：4
- 供职机构：中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 1例HDV抗体IgM阳性HBVS抗原阴性的肝炎患者分子诊断分析
- 2016年
- 目的 为了进一步对临床中可能出现HDV抗体IgM阳性，常规HBV五项检测阴性的特殊患者进行诊断，从而对HDV的感染进行准确的判定。方法设计HBV和HDV的特异引物，通过提取血清中病毒的核酸，扩增出病毒的基因组序列，使用BLAST在Genebank中进行比对。结果本实验在这例血清中扩增到了HDV和HBV的基因序列，通过BLAST后发现扩增序列与HBV和HDV基因序列存在较高的一致性。结论在临床诊断中，HDV感染者会出现血清中HDV抗体IgM阳性HBVS抗原阴性的特殊情况，应当引起临床的重视。
- 卢学新伊瑶苏秋东毕胜利
- 关键词：HDV共感染分子诊断
- 高效表达乙型肝炎病毒表面抗原的CHO细胞株的建立
- 2013年
- 目的探索乙型肝炎病毒表面抗原（s）基因在CHO无血清细胞培养系统中的高效表达。方法构建包含乙肝病毒s基因的质粒，转染CHO细胞，经MTX筛选后对培养液上清中的表达产物进行血清学检测以及形态学的观察。结果获得了能高效稳定表达HBsAg的CHO细胞株，电镜下可观测到小球型和管型颗粒，ELISA检测表达产物滴度达到1：5000。结论成功构建高效表达乙型肝炎病毒s蛋白的CHO无血清培养细胞株，表达的HBsAg具有良好的抗原活性。
- 伊瑶郭敏卓田瑞光苏秋东卢学新邱丰周文亭贾志远毕胜利
- 关键词：细胞培养
- 丁型肝炎的分子生物学特征及研究进展被引量：1
- 2013年
- HDV是已知的最小动物病毒,具有很多独特的生物学特征.了解其生物学特性是进行诊断,防控和治疗的基础.HDV的研究也为其他病毒的研究提供了材料和支持.本研究就HDV的生物学特征和研究进展进行论述.
1 病毒学特征
HDV颗粒呈球形,直径在35 ～ 37 nm,在氯化铯中的浮力密度为1.25g/cm3.外面被HBV的表面抗原包被,L、M、S三种蛋白的比约为95：4：1,与乙肝病毒的Dana颗粒不同,与22 nm的杆状颗粒相似.[1]
- 卢学新伊瑶毕胜利
- 关键词：分子生物学特征丁型肝炎动物病毒病毒学特征HDV表面抗原
- 自发生物素化风疹病毒重组诊断抗原的制备被引量：4
- 2016年
- 目的 获取原核表达过程中自发生物素化的风疹病毒（Rubella Virus,RV）重组抗原E1（RV-E1）,并初步评价其抗原性.方法 将2×BirA酶底物（BSP）插入到RV-E1抗原优势表位区域aa 148-295的羧基端,硫氧还蛋白（Thioredoxin,TRX）插入到RV-E1的氨基端,密码子优化后全基因合成;在大肠埃希进行表达,并利用亲和层析和离子交换层析纯化获取生物素化的RV-E1抗原;利用Western Blotting技术对目的蛋白进行鉴定,并建立风疹病毒IgM抗体检测方法,初步评价此方法对阴阳血清样本的鉴别能力.结果 获取高度均质的生物素化的可溶性RV-E1抗原,WB实验表明目的蛋白不但可以被RV-E1抗原和TRX抗原单克隆抗体识别,而且可以被标记HRP的链霉亲和素所识别.分别对50份风疹病毒感染阳性血清、阴性血清和健康人血清进行检测,发现一致性优异.结论 RV-E1诊断抗原携带BSP,可以在大肠埃希菌表达过程中自发共价结合生物素分子,并可以作为新型诊断抗原应用于生物素-亲和素ELISA血清学检测中.
- 苏秋东郭敏卓邱丰贾志远卢学新孟庆玲田瑞光高燕毕胜利伊瑶
- 关键词：原核表达
- RFFIT、FAVN、ELISA及狂犬病中和抗体检测试剂盒对狂犬病抗体检测的比较研究被引量：7
- 2017年
- 为了比较RFFIT、FAVN、ELISA及狂犬病中和抗体检测试剂盒(RVNA Kit)等四种方法对狂犬病抗体的检测效果,对65份狂犬病疫苗免疫前、免疫后临床血清样本,分别使用RFFIT、FAVN、ELISA及RVNA Kit方法对狂犬病病毒特异性抗体进行测定,并对检测结果的阳性符合率、相关性及重复性进行分析。检测结果显示,RFFIT、FAVN及RVNA kit的阳性符合率为100%,三种方法与ELISA试剂盒的阳性符合率为95.38%,对0.5IU/mL^10IU/mL的血清样本进行阳性符合率分析显示,四种方法的阳性符合率为100%;相关性研究结果表明,RFFIT、FAVN及RVNA Kit之间任意两种方法检测结果的相关系数均超过0.97,但ELISA与其他三种方法检测结果的相关系数均低于0.86;同一份样品的重复性检验结果显示,RVNA Kit和ELISA比RFFIT和FAVN具有更好的重复性,而RVNA Kit的重复性最好,其变异系数仅6%。研究结果表明,RFFIT、FAVN及RVNA Kit等三种方法可通用于血清中抗狂犬病病毒中和抗体的检测,而ELISA检测结果与中和抗体效价有一定差距,但在经过优化、校验后ELISA也可以在有效范围内用于狂犬病抗体的检测。
- 于鹏程由淑珍卢学新陶晓燕刘淑清纪军朱武洋
- 关键词：KITRFFITELISA
- 免疫球蛋白不同注射部位对狂犬病疫苗免疫效果的影响被引量：3
- 2018年
- 狂犬病是一种暴露后致死性疾病．但是可以通过及时的暴露后预防（PEP）进行100％的规避。对于Ⅲ级暴露来说．人用狂犬病免疫球蛋白（HRIG）是PEP的重要组成部分。探究HRIG在免疫效应中的作用对提高PEP的有效利用具有一定的现实意义。
- 刘淑清吴未辰陶晓燕于鹏程卢学新闫江泓高鑫王茜朱武洋
- 关键词：免疫球蛋白疫苗免疫效果注射部位暴露后预防致死性疾病免疫效应
- 密码子优化提高狂犬病病毒CTN-1株核蛋白在大肠埃希菌中的表达被引量：2
- 2021年
- 目的:获取具有生物活性的狂犬病病毒核蛋白在大肠埃希菌表达系统中高效表达。方法:实验使用密码子优化技术重新编码狂犬病病毒CTN-1株核蛋白基因,人工合成全长基因并克隆至pET-43.1a表达载体,在大肠埃希菌BL21(DE3)株中诱导表达,并使用Western blot检测其反应原性。结果:诱导后SDS-PAGE分析显示在相对分子质量50×103处出现明显的表达条带,与预期蛋白质条带大小一致。其中在大肠埃希菌A600为0.5左右,37℃诱导5 h时表达产量最高(约为32.3%)。大量表达时核蛋白的表达形式主要为包涵体,后经Ni 2+螯合层析纯化,获得纯度为95%以上的目的蛋白。纯化产物经Western blot鉴定,与疫苗免疫小鼠血清呈阳性反应,表明大肠埃希菌表达CTN-1株核蛋白具有生物活性。结论:本实验成功建立了CTN-1株核蛋白在大肠埃希菌表达系统的高效表达方法,并获得了高纯度目的蛋白,为进一步的临床诊断和新型疫苗制备提供基础资料。
- 任元雪高鑫高鑫卢学新刘茜
- 关键词：狂犬病病毒核蛋白密码子优化
- 融合穿梭肽的狂犬病单链抗体在大肠杆菌中的重组表达及中和活性分析被引量：1
- 2021年
- 目的融合穿梭肽和狂犬病单链抗体,优化在大肠杆菌中的表达条件,获得具有中和活性的重组穿梭肽-单链抗体。方法重新编码SO57抗体序列,在N端融合Arg12的穿梭肽,构建pET22(b)-rSO57表达载体,在大肠杆菌中重组表达。在菌体生长密度OD600、诱导时间、诱导温度和诱导剂浓度条件进行优化,获得较高的表达效果。使用固定化金属螯合层析对重组蛋白进行纯化,测定了重组单链抗体的相对亲和力,通过rSO57/CVS-11混合感染细胞和快速荧光灶抑制实验(rapid fluorescent focus inhibition test,RFFIT),验证重组单链抗体的中和作用。结果 rSO57构建成功,在BL21(de3)中诱导表达,最优表达条件为菌体密度OD600在0.8时,使用0.4 mmol/ml的IPTG诱导,16 ℃下诱导24 h,rSO57以可溶形式表达,表达量占到了菌体可溶性蛋白的19.8%。层析纯化后,获得了纯度为84%的重组rSO57。ELISA实验显示,rSO57的相对亲和力系数Ka=4.3×105。当rSO57与CVS-11混合时,随着稀释的增加,细胞的感染率上升,表明重组抗体具有中和狂犬病病毒的能力。使用RFFIT进行测定,50 μg的rSO57相当于2.17IU的狂犬病中和血清。结论本实验重组表达了融合穿梭肽的重组单链抗体rSO57,且可以中和狂犬病病毒,以期制备可以用于狂犬病治疗的特异性和靶向性的抗病毒药物载体。
- 谢嵩于宗琴赵文瑞卢学新
- 关键词：单链抗体中和抗体狂犬病
- 两种嵌合乙型肝炎病毒preSl中和表位的乙肝核心病毒样颗粒的制备与抗原性分析被引量：1
- 2013年
- 目的构建嵌合preSl2147位氨基酸（aa）、以全长乙肝病毒（HBV）核心抗原（HBcAg）为骨架的病毒样颗粒H2和嵌合preSlaa37-45、以截断HBcAg为骨架的病毒样颗粒H3，并对比其抗原性。方法将HBVadr血清型preSl中和表位aa2147和aa37-45分别插入到全长HBc（aa1—183）和截断HBc（8a1—144）的第78位天冬氨酸和第79位脯氨酸之间，密码子优化之后全基因合成，目的片段经双酶切（NdeI和XhoI）回收后连接到同样处理的pET43．1a载体上，在大肠埃希菌E．coliBL21（DE3）中表达，精细纯化后通过电镜观察蛋白形态、ELISA以及WesternBlott检测其抗原性。结果成功构建表达质粒H2和H3，并在BL21（DE3）中高效表达和自发组装成病毒样颗粒。纯化后电镜观察H2和H3形态为二十面体立体对称样病毒样颗粒，H2为实心颗粒，直径为（31．61±1．27）nm，H3为空心颗粒，直径为（28．46±1．16）nm。统计分析可得H2直径要比H3直径大（P〈0．01）。ELISA和WesternBlott检测结果证实其插入表位preSl以及载体蛋白HBc的抗原性。结论成功获得两种嵌合HBVpreSl中和表位的病毒样颗粒，为其在疫苗研究中的应用探索奠定基础。
- 苏秋东郭敏卓伊瑶陈斯勇贾志远卢学新邱丰毕胜利
- 关键词：肝炎病毒乙型表位病毒核心蛋白质类病毒样颗粒
- 基因优化对基因工程丁型肝炎小抗原蛋白表达和纯化的影响
- 2012年
- 目的探讨基因优化对基因工程丁型肝炎（丁肝）小抗原蛋白表达和纯化的影响。方法依据GenBank上的丁肝小抗原原始基因，参照大肠埃希菌优势密码子谱进行优化；再分别将优化前后的两组基因进行常规原核表达，用SDS—PAGE电泳比较目的蛋白表达量及优势表达方式；进一步以柱层析进行纯化，再以Image Lab软件分析SDS-PAGE电泳条带，比较两组目的蛋白的纯度。结果SDS-PAGE显示，两组表达的目的蛋白均与预期相对分子质量大小一致，优化基因组的蛋白表达量高于原始基因组，且更倾向于可溶性表达；经柱层析纯化后，前者的目的蛋白纯度也明显高于后者，可达96．3％。结论基因优化可提高基因工程丁肝小抗原蛋白表达量，增加可溶性蛋白的比例；且表达产物更易纯化至较高纯度以供诊断使用。
- 丁军颖孟庆玲郭敏卓伊瑶苏秋东卢学新邱丰毕胜利
- 关键词：基因肝炎丁型
