王欣欣
- 作品数：8 被引量：9H指数：1
- 供职机构：浙江大学医学院药理学系更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金浙江省自然科学基金浙江省科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 大鼠GPR17基因真核表达载体的构建及其功能鉴定被引量：1
- 2009年
- 目的:构建大鼠GPR17(rGPR17)基因的真核表达载体pcDNA3.1(+)-rGPR17,并对其功能进行初步研究。方法:从大鼠脑组织提取总RNA,通过RT-PCR扩增rGPR17 cDNA,与载体pcDNA3.1(+)连接,并转化到大肠杆菌DH5α以获得重组载体pcDNA3.1(+)-rGPR17,以PCR、双酶切和测序鉴定;将重组载体pcDNA3.1(+)-rGPR17通过脂质体转染方法,转染HEK293细胞,RT-PCR、免疫荧光法检测rGPR17的表达,Fluo-4测定激动剂LTD4处理后细胞内钙变化。结果:RT-PCR、双酶切和测序证明,重组的真核表达载体pcDNA3.1(+)-rGPR17构建成功,并在HEK293细胞获得表达,加入外源性激动剂LTD4可诱导细胞内钙的增加。结论:成功构建了rGPR17的真核表达载体pcDNA3.1(+)-rGPR17,并在HEK293细胞功能性表达,为GPR17受体及其拮抗剂的研究提供了基础。
- 林卡娜方三华蔡蓓蕾王欣欣卢韵碧张纬萍魏尔清
- 关键词：真核表达载体HEK293细胞细胞内钙
- 白三烯D4激活小鼠BV2小胶质细胞的作用
- 目的 观察白三烯D4(LTD4)激活小鼠小胶质细胞株BV2细胞的作用,并初步探讨其激活机制。方法 以RT-PCR、Western blotting检测BV-2细胞半胱氨酰白三烯受体1(CysLT1)和CysLT2的表达；...
- 骆江云蔡蓓蕾赵春贞赵冰王欣欣方三华卢韵碧张纬萍魏尔清
- hCysLT2受体激活对IL8的影响
- 目的 研究hCysLT2受体激活后的信号通路.方法 采用脂质体转染的方法,将PcDNA3.1-hCysLT1、PcDNA3.1-hCysLT2、PcDNA3.1-rGPR17转到HEK293细胞中,并用G418600 m...
- 林卡娜王欣欣蔡蓓蕾余舒莹方三华卢韵碧张纬萍魏尔清
- 稳定转染hCysLT_2受体的HEK293细胞株的构建及其受体拮抗剂的初筛被引量：1
- 2011年
- 目的:构建稳定转染hCysLT2受体的HEK293细胞株,并初筛具有CysLT2受体拮抗活性化合物。方法:采用Lipofectamine 2000将质粒pcDNA3.1(+)-hCysLT2转染至HEK293细胞中,用96孔板有限稀释法挑选阳性单克隆细胞株,以RT-PCR和免疫荧光法检测hCysLT2基因的表达。稳定表达hCysLT2受体的HEK293细胞株,以激动剂LTD4诱导细胞内Ca2+浓度([Ca2+]i)增高为指标,初步筛选有拮抗作用的化合物。结果:转染后的HEK293细胞中挑选12个单克隆细胞株,11株高表达hCysLT2受体。阳性刺激物ATP为50μmol/L及LTD4 100 nmol/L能升高[Ca2+]i。AP-2100984抑制LTD4诱导的hCysLT2-HEK293细胞[Ca2+]i升高,CysLT1受体选择性拮抗剂无抑制作用。新合成化合物DXW2、DXW3、DXW4、DXW5、DXW9、DXW25、DXW26、DXW29、DXW35在1μmol/L能显著抑制LTD4引起的[Ca2+]i升高,其中DXW4和DXW5的IC50分别为0.25μmol/L和7.5μmol/L。结论:成功构建稳定转染hCysLT2受体的HEK293细胞株,并可用于有拮抗活性化合物的筛选。
- 林卡娜王欣欣黄雪琴蔡蓓蕾方三华卢韵碧张纬萍魏尔清
- 关键词：半胱氨酰白三烯白三烯拮抗剂HEK293细胞细胞内钙
- 鱼藤酮诱导BV2小胶质细胞半胱氨酰白三烯受体1表达变化被引量：6
- 2011年
- 目的:制备和鉴定半胱氨酰白三烯受体1(CysLT1受体)抗体,以此观察鱼藤酮诱导BV2小胶质细胞损伤过程中CysLT1受体表达变化。方法:以KLH偶联的CysLT1受体多肽(小鼠)免疫家兔制备多克隆抗体,用ELISA法测定抗体效价,以抗原阻断法测定抗体敏感性及特异性。用新制备的抗体以Western blotting检测鱼藤酮(0.01～1μmol/L,作用24 h)损伤BV2细胞过程中,BV2细胞上CysLT1受体的表达变化,并以RT-PCR检测验证CysLT1受体mRNA表达水平,同时以免疫组化观察CysLT1受体的亚细胞分布变化。结果:ELISA测定显示,制备的兔抗小鼠CysLT1受体抗体的效价大于1/32728,对CysLT1受体的特异性强,对CysLT2受体和GPR17基本无交叉反应。Western blotting和RT-PCR显示,鱼藤酮作用BV2细胞24 h剂量依赖性诱导CysLT1受体mRNA及蛋白水平表达升高;免疫组化显示在鱼藤酮诱导BV2细胞损伤过程中,随鱼藤酮剂量增加,CysLT1受体发生核移位。结论:制备的CysLT1受体多克隆抗体具有高效价和高特异性,能满足Western blotting和免疫组化检测的要求;CysLT1受体参与鱼藤酮诱导的BV2细胞损伤。
- 骆江云张壮余舒莹赵冰赵春贞王欣欣方三华张纬萍张丽慧魏尔清卢韵碧
- 关键词：半胱氨酸抗体半胱氨酰白三烯受体多克隆抗体
- 半胱氨酰白三烯受体激动剂和拮抗剂对大鼠胶质瘤C6细胞分化的作用被引量：1
- 2011年
- 目的:探讨半胱氨酰白三烯受体在大鼠胶质瘤C6细胞的分化中的作用。方法:以激动剂LTD4、CysLT1受体拮抗剂孟鲁司特以及分化诱导剂forskolin处理C6细胞,观察细胞形态及GFAP蛋白表达变化。结果:Forskolin(10μmol/L)可诱导C6细胞形态变化及GFAP蛋白表达(细胞分化),而LTD4(0.1～100 nmol/L)不能诱导这些变化;单用孟鲁斯特(1μmol/L)无明显作用,但与LTD4(100 nmol/L)合用可诱导C6细胞分化。结论:CysLT2受体可能参与调节大鼠胶质瘤C6细胞的分化。
- 蔡蓓蕾王欣欣余舒莹黄雪琴张霞燕方三华卢韵碧张纬萍魏尔清
- 关键词：白三烯拮抗剂细胞分化半胱氨酰白三烯受体拮抗剂
- CysLT/UDP受体GPR17在缺血性脑损伤中的作用
- 目的 探讨CysLT/UDP受体GPR17在大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤脑组织中表达的时间和空间特征。方法 应用免疫组化、RT-PCR及Western blot方法,研究大鼠局灶性脑缺血30 min再灌注6h～28 d期...
- 赵冰魏尔清赵春贞史文珍林卡娜王欣欣方三华卢韵碧张纬萍夏强
- 半胱氨酰白三烯受体1拮抗剂孟鲁司特对缺血性损伤后神经元形态的作用被引量：1
- 2012年
- 目的:观察半胱氨酰白三烯受体1拮抗剂孟鲁司特对原代神经元缺血性损伤后形态变化的作用。方法:在不同浓度孟鲁司特存在条件下,以缺氧缺糖(OGD)2 h和再灌(R)24 h(OGD/R)诱导大鼠原代神经元及皮层混合培养细胞的神经元损伤;以免疫染色法检测神经元数量、胞体大小、胞体总神经突起数量、一级神经突起数量、长度及其分支数量等指标,观察神经元形态的变化。结果:OGD/R可明显减少神经元的数量,显著改变神经元的形态。而孟鲁司特(0.0001～1μmol/L)能减轻单独神经元培养中OGD/R诱导的神经元数量减少,抑制一级神经突起分支数量增加;在混合培养中,孟鲁司特(0.0001～0.1μmol/L)增加OGD/R后一级神经突的长度,减少神经突起数量以及一级神经突起分支数量。结论:半胱氨酰白三烯受体1拮抗剂孟鲁司特对大鼠原代神经元缺血性损伤有保护作用。
- 王欣欣张霞燕黄雪琴余舒莹赵蕊方三华卢韵碧张纬萍魏尔清
