王羽雄
- 作品数：15 被引量：9H指数：2
- 供职机构：复旦大学更多>>
- 发文基金：上海市基础研究重大（重点）项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生自动化与计算机技术更多>>
- 基于3D打印技术的微针模具及其制备方法
- 本发明属生物医学材料技术领域，涉及一种新型微针模具，具体涉及基于3D打印技术的微针模具及其制备方法。本发明结合高精度3D打印技术，筛选明胶作为中间过渡材料，提供了新的微针模具制作方法‑二次铸模法，并制备获得新型微针模具。...
- 于敏吴梦芳赵冰王羽雄张艳玲
- 人源性组织因子在SP2/0细胞中的初步表达被引量：2
- 2009年
- 构建组织因子表达质粒并转染小鼠骨髓瘤细胞SP2/0,分泌表达有活性的组织因子。用阳离子聚合物法将构建好的转染质粒pIRESneo3-TF1-218转染入SP2/0细胞,经G418抗性筛选后,蛋白可由SP2/0细胞无血清培养分泌表达。G418 800ug/ml筛选到的表达克隆,经无血清培养,可分泌表达,western blot证明其为人组织因子衍生物,Mr为40k,脂化后,具有促凝血活性。成功构建组织因子蛋白表达质粒pIRESneo3-TF1-218。
- 王羽雄马春姑顾银良宋后燕于敏
- 关键词：稳定转染凝血酶原时间
- 一种抗PD-1抗原和抗c-Met抗原的双特异性抗体及其构建方法
- 本发明属于生物技术领域，具体涉及一种重组人源化PD‑1和c‑Met双特异性抗体及其构建方法。本发明在计算机分子结构模拟的基础上，利用分子克隆技术以筛选的两株单克隆抗体为模板，构建双特异性抗体的表达质粒，该表达质粒为四价双...
- 于敏侯维花莫炜王羽雄
- 文献传递
- 重组人色素上皮衍生因子在真核细胞SP2／0中的瞬时表达及活性鉴定
- 2011年
- 目的构建抑制早产儿视网膜病新生血管形成的重组人色素上皮衍生因子（pigment epithelium—derived factor，PEDF）真核表达载体，检测其在小鼠骨髓瘤细胞SP2／0中的瞬时表达。方法根据已知的GenBank中人PEDFcDNA成熟蛋白编码区序列设计特异性引物，以全基因合成的pUC57-PEDF质粒为模板，经聚合酶链反应技术扩增人PEDF基因，定向克隆至真核表达载体pIRESneo3中，获得重组表达质粒pIRESneo3-PEDF。将重组质粒pIRESneo3-PEDF与脂质体转染试剂Lipofectamine^TM 2000混合后转染小鼠骨髓瘤细胞SP2／0，采用酶联免疫吸附试验及Western印迹对表达产物进行鉴定。收集转染细胞培养液上清，采用四甲基偶氮唑盐比色法检测重组PEDF活性。结果聚合酶链反应技术、酶切鉴定和测序结果表明，pIRESneo3PEDF表达载体构建成功。脂质体法将表达质粒成功转染到SP2／0中，经培养，可分泌表达PEDF，且经Western印迹检测证明为人PEDF，分子量为50000。转染36h上清液中PEDF浓度最高，为（0．92±0．04）ug／ml。转染36h细胞培养液上清对人脐静脉内皮细胞的抑制作用最强（P〈0．05）。结论成功构建人PEDF真核表达质粒pIRESneo3PEDF，转染细胞可瞬时分泌表达有活性的人PEDF，对人脐静脉内皮细胞增殖有抑制作用，为开展下一步稳定转染表达及蛋白纯化奠定基础，为早产儿视网膜病的防治带来新的希望。
- 戴仪石文静王羽雄于敏陈超
- 关键词：神经生长因子类舍平类真核细胞
- 可溶性组织因子的基因克隆、表达与性质研究被引量：5
- 2002年
- 组织因子是外源性凝血途径的启动因子,为膜受体蛋白,胞外区的促凝血功能几乎与完整分子相同,因此采用重组DNA技术制备组织因子的胞外区分子,并对其活性进行研究,以便替代兔脑粉用于PT检测。以人胎盘总RNA为模板,用RT-PCR扩增组织因子胞外区cDNA基因,经序列分析证实后在大肠杆菌中表达,产物形成包涵体。表达产物经复性、离子交换和凝胶过滤色谱纯化后与磷脂结合,进行促凝血试验。结果表明在磷脂存在下,可溶性TF有明显的促凝血活性,可以取代兔脑粉用于PT检测。
- 于敏王羽雄顾银良宋后燕
- 关键词：基因克隆包涵体基因表达血液凝固
- 人组织因子在毕赤酵母中的表达和纯化被引量：4
- 2008年
- 目的制备具有凝血活性的重组人组织因子（recombinant tissue factor,r-TF）用于构建PT试剂盒。方法将人组织因子胞外区编码基因与酵母表达载体重组,构建酵母表达质粒pPIC9K-TF,利用电穿孔法转化宿主菌Pichia pastorisGS115,转化子经G418抗性筛选后,获得高表达克隆。工程菌在摇瓶中经甲醇诱导,表达r-TF,表达产物经纯化后,鉴定生物活性。结果SDS-PAGE证实表达产物的分子量为37 000～45 000,Western blot证明其为人组织因子衍生物,纯化后,r-TF经脂化后,具有促凝血活性,为研制凝血活酶时间测定试剂盒及研究TF的构效关系创造条件。结论用毕赤酵母高效表达具有活性的rTF,表达量达到182 mg/L。纯化工艺简便易行,蛋白回收率高,纯化后的rTF可用于组装PT测定试剂盒。
- 王羽雄于敏顾银良宋后燕
- 关键词：毕赤酵母凝血酶原时间
- 一种抗PD-1及c-Met的双特异性抗体及其制备方法、应用
- 本发明公开了一种抗PD‑1及c‑Met的双特异性抗体及其制备方法、应用，属于生物医药领域。上述抗PD‑1及c‑Met的双特异性抗体可以抑制METΔ14EX肿瘤的c‑Met组成性激活，抑制METΔ14EX肿瘤细胞的迁移能力...
- 于敏赵冰梁巧妍王羽雄张艳玲
- 重组可溶性组织因子及其制备方法和应用
- 本发明属生物技术领域，涉及重组可溶性组织因子(r－sTF)及其制备方法，和采用.r－sTF与磷脂等制备成新型凝血酶原时间(PT)检测试剂盒。本发明根据对全长组织因子的结构及其生化特性的分析，设计了新型r－sTF。将突变后...
- 宋后燕于敏王羽雄
- 文献传递
- 一种抗PD-1及c-Met抗原的小分子双特异性抗体Diabody
- 本发明为一种抗PD‑1及c‑Met抗原的小分子双特异性抗体Diabody，属生物技术领域，涉及一种双特异性抗体，以及该双特异性抗体的制备方法、应用和相应的核酸编码序列。本发明提供了一种双特异性抗体,它含有特异性识别T淋巴...
- 于敏袁庆云王羽雄莫炜
- 文献传递
- 一种人源抗人组织因子Fab及其制备方法
- 本发明属于生物技术领域，涉及应用天然的人源抗体基因库筛选具有抗凝血功能的抗人组织因子Fab片段。本发明通过构建人源抗体基因库并经过ELISA、稀释凝血酶原时间、测序分析等从库中筛选到具有抗凝活性的人源抗人组织因子Fab，...
- 马端程训佳刘静王羽雄木金贵梁旺王际平
- 文献传递
