方海琴
- 作品数：12 被引量：23H指数：4
- 供职机构：国家食品安全风险评估中心更多>>
- 发文基金：国际科技合作与交流专项项目国家自然科学基金北京市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 胚胎干细胞毒性评价模型的建立及其在药物安全性评价中的应用
- 目的 用作药物安全性评价的细胞系主要有有限细胞系、连续细胞系及干细胞系等3种。有限细胞系要么难以获得(如肝细胞、神经细胞等)，变异性大，要么只能进行有限的几次传代增殖；连续细胞系(人永生化细胞系)的生物学特性已经异化，与...
- 赵增明方海琴何俊武瑞琴彭双清
- 关键词：药物安全性评价
- 己烯雌酚、邻苯二甲酸二丁酯和丙基硫脲嘧啶对小鼠垂体瘤神经细胞增殖的联合作用研究被引量：1
- 2017年
- 目的探讨己烯雌酚(DES)、邻苯二甲酸二丁酯(DBP)、丙基硫脲嘧啶(PTU)对小鼠垂体瘤神经细胞(GT1-7神经细胞)的增殖效应及其联合作用。方法 DES的剂量为0.1、1、10、100、1 000μmol/L,DBP的剂量为0.01、1、10、100、1 000μmol/L,PTU的剂量为0.000 1、0.01、1、100、1 000μmol/L。联合作用的剂量设计为DES0.1~1 000μmol/L,DBP 0.01μmol/L,PTU 0.000 1μmol/L。采用CCK-8法检测3种物质单独作用和联合作用24 h后GT1-7神经细胞存活率。结果 DES、DBP单独作用于细胞,随DES或DBP浓度的增大细胞存活率呈现先增加后降低的趋势。PTU单独作用于细胞,各组的细胞存活率与对照组比较有所增加,但基本维持在一定水平。DES、DBP、PTU单独作用时,其浓度分别低于10、100、1 000μmol/L时,GT1-7神经细胞存活率在90%以上。DES与DBP联合暴露时,细胞存活率随DES浓度的增加而降低。DES与PTU联合暴露时,细胞存活率随DES浓度增加表现为先增加后降低,DBP与PTU联合暴露时,细胞存活率随DBP浓度增加表现为先增加后降低。与DES单独作用体系比较,0.01μmol/L DBP和0.000 1μmol/L PTU同时加入到0~10μmol/L DES后细胞存活率明显增加,差异有统计学意义(P<0.05),而DES浓度为100μmol/L时细胞存活率由80%左右降至4%左右,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 DES、DBP、PTU对GT1-7神经细胞的增殖效应呈先促进后抑制的趋势,3种物质在一定剂量下共同作用对GT1-7神经细胞增殖呈现联合作用。
- 康静方海琴贾旭东宋雁刘兆平裴秋玲
- 关键词：己烯雌酚邻苯二甲酸二丁酯细胞毒性神经细胞
- 基于人多能干细胞(hPSCs)的药物毒性测试
- 赵增明何俊束玉磊方海琴彭双清
- 钇对子代大鼠神经行为和认知能力的影响被引量：3
- 2015年
- 目的研究硝酸钇对子代大鼠神经行为和认知能力的影响。方法将孕鼠随机分为对照和受试物低、中、高4个试验组,20只/组。从孕期第6天(GD 6)至分娩后第21天(PND 21),受试物组每天分别灌胃给予硝酸钇溶液5、15、45 mg/kg BW,对照组灌胃给予蒸馏水。断乳后,继续给予子鼠原剂量受试物直至PND 63天。观察不同剂量硝酸钇对子鼠生长发育、脏器组织和神经行为的影响。结果在PND 21天时,雄鼠低、中、高3个剂量组体重均高于对照组,且差异有统计学意义(P<0.05)。但从PND 42天开始至试验结束,雄性高剂量组体重明显低于对照组,导致高剂量组雄鼠总增重和总进食量均低于对照组,且差异有统计学意义(P<0.05),但食物利用率无变化。PND 42天时雌鼠低剂量组体重和雄鼠高剂量组脑体比均高于对照组,且差异有统计学意义(P<0.05),但不认为有生物学意义。Morris水迷宫试验中仅高剂量组雌鼠第5天的潜伏期高于对照组,且差异有统计学意义(P<0.05),其他神经行为试验结果均未见差异。结论在本试验条件下,断乳后持续给予硝酸钇受试物会导致高剂量组雄性子鼠的体重下降,但不会影响脑组织重量,也不会在成年早期对子鼠的痛觉、运动活力和认知能力等神经行为造成影响。
- 李晨汐耿雪马川方海琴支媛于洲贾旭东徐海滨
- 关键词：神经发育神经行为稀土毒理试验
- T-2毒素对小鼠胚胎干细胞线粒体功能的抑制作用被引量：6
- 2014年
- 目的观察T-2毒素对小鼠胚胎干细胞(mESC)线粒体功能的毒性作用,探讨其胚胎毒性的可能作用靶点与作用机制。方法处于分化过程中的mESC加入T-2 0.5μg·L-1分别作用24,72及120 h,同时设Trolox 200μmol·L-1预处理后30 min再加入T-2毒素0.5μg·L-1染毒72 h组。透射电子显微镜观察线粒体内结构;罗丹明123荧光探针法流式细胞术检测mESC内线粒体膜电位,氧电极法检测线粒体呼吸速率,计算呼吸控制比,荧光素-荧光素酶发光法测定ATP合成酶活性。结果透射电镜观察可见,T-20.5μg·L-1作用72与120 h组mESC内线粒体数量明显减少,结构变形,线粒体中少见或缺少完整的嵴,与正常对照组相比,mESC内线粒体呼吸控制比分别下降49.5%和55.1%(P<0.05),ATP合成酶活性分别下降84.9%和89.3%(P<0.05),mESC线粒体膜电位下降23.2%和35.2%(P<0.05)。Trolox预处理可以改善T-2毒素对上述线粒体功能指标的抑制作用。结论 T-2毒素可降低mESC的线粒体功能,进而抑制mESC的分化能力,可能是其胚胎发育毒性的作用机制之一。
- 方海琴李利忠赵增明何俊赵君杨嵘耿雪彭双清
- 关键词：T-2毒素毒性作用胚胎干细胞线粒体细胞分化
- 两种胚胎干细胞实验模型评价邻苯二甲酸（2-乙基己基）酯胚胎发育毒性的比较研究被引量：2
- 2016年
- 目的：建立并应用小鼠胚胎干细胞实验（mEST）模型与人胚胎干细胞实验（hEST）模型评价邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯（DEHP）的胚胎发育毒性。方法参照欧洲替代方法研究中心（ECVAM）的标准操作方法，建立mEST、hEST模型，并选用ECVAM推荐的已知强胚胎发育毒性物质5-氟尿嘧啶（5-FU）和无胚胎毒性物质青霉素G（PN-G）进行模型验证，在模型验证有效的基础上，以15.6、31.2、62.5、125.0、250.0、500.0、1000.0μg/ml 浓度的DEHP分别染毒小鼠胚胎干细胞D3（mESC-D3）、Balb/c小鼠成纤维细胞3T3（3T3）及人胚胎干细胞H9（hESC-H9）7 d，采用CCK-8法检测不同浓度DEHP染毒后mESC-D3、3T3及hESC-H9细胞存活百分数和半数增殖抑制浓度（IC50）。根据细胞毒性实验结果，使用15.6、31.2、62.5、125.0、250.0、500.0μg/ml 浓度的DEHP分别处理分化的mESC-D3、hESC-H9细胞10 d，采用Real-time PCR检测不同浓度DEHP作用下，分化标志基因心肌细胞肌球蛋白重链（α-MHC）的表达情况，拟合效应曲线，得出半数分化抑制浓度（ID50）。并将ID50、IC50代入线性判别函数公式进行计算与比较。结果细胞生长状态良好，免疫荧光染色可见未分化hESC-H9细胞高表达、干性关键转录因子八聚体结合转录因子（OCT4）、阶段特异性胚胎抗原（SSEA-4）及肿瘤排斥抗原（Tra-1-60），细胞处于未分化状态。拟胚体大小均一、形态一致，可重复性高。采用ECVAM推荐已知发育毒性物质（5-FU和PN-G）对模型进行验证，所建模型有效，可用于受试物胚胎发育毒性的评价。DEHP对mESC-D3的IC50为210.0μg/ml、ID50为246.8μg/ml及对3T3的IC50为197.3μg/ml，代入线性判别函数公式得出函数Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ值分别为7.78、7.58、-7.79，因Ⅰ〉Ⅱ〉Ⅲ，mEST模型评价DEHP为无胚胎发育毒性。DEHP对hESC-H9的IC50为184.8μg/ml，ID50为84.3μg/ml及对3T3的IC50为195.4μg/ml，代入线性�
- 罗莎方海琴杨辉张立实贾旭东
- 关键词：胚胎干细胞
- 胚胎干细胞试验模型用于白藜芦醇胚胎发育毒性的评价被引量：5
- 2013年
- 目的依据胚胎干细胞(Embryonic Stem Cell,ESC)具有向心肌细胞分化的能力,建立体外分化发育毒性评价模型,并应用其评价受试物白藜芦醇胚胎发育毒性。方法悬滴转悬浮法培养D3系胚胎干细胞(ESC-D3),观察受试物对ESC-D3分化能力影响,结合MTT法判断受试物对ESC-D3及小鼠胚胎成纤维细胞(3T3)的细胞毒性结果,预测受试物的发育毒性。用已知无胚胎发育毒性化合物青霉素(Penicillin,PN),强胚胎发育毒性化合物氟尿嘧啶(5-Fluorouracil,5-FU)等对模型进行有效性验证,并将经过验证的EST模型用于受试物白藜芦醇的发育毒性评价。结果利用建立的EST模型对5-FU和PN的发育毒性进行评价,结果为5-FU为强胚胎发育毒性,PN为无胚胎发育毒性,与文献报道一致。应用EST模型评价得出白藜芦醇对3T3细胞活力的半数抑制浓度IC503T3为27.93μg/ml,对D3细胞活力的半数抑制浓度IC50D3为28.02μg/ml,对D3细胞的半数分化抑制浓度ID50D3为158.97μg/ml,经EST模型判断公式计算得出该化合物无发育毒性化合物。结论建立的EST模型的有效性验证结果与ECVAM的结论一致,可用于胚胎发育毒性的筛选和评价;经EST模型评价,白藜芦醇为无胚胎发育毒性。
- 方海琴于洲杨嵘荣靖侯明月刘杰束玉磊彭双清
- 关键词：白藜芦醇
- 白藜芦醇通过上调小鼠胚胎干细胞过氧化物酶体增殖激活受体γ共激活子1α表达促进其分化为心肌细胞被引量：4
- 2013年
- 目的观察白藜芦醇对小鼠胚胎干细胞(ESC)分化为心肌细胞的调节作用,并探讨其机制。方法 采用悬滴悬浮培养法培养ESC。白藜芦醇0.44,4.4和44μmo.lL-1处理ESC 96 h。光学显微镜下记录每组自发心肌搏动数;透射电镜观察细胞内线粒体结构;实时PCR方法测定α-肌球蛋白重链(α-MHC)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)、PPARγ共激活子1α(PGC-1α),核呼吸因子-1(NRF-1)、线粒体转录因子A(mtTFA)和线粒体呼吸链复合体Ⅳ(COXⅣ)的基因表达;Western蛋白印迹法检测PPARγ,α辅肌动蛋白和PGC-1α蛋白表达。结果 与正常对照组相比,白藜芦醇0.44和4.4μmo.l L-1可增加ESC细胞分化为自发搏动的心肌细胞数,并明显上调分化的ESC心肌特异性基因α-MHC表达,约分别为正常对照组的5.6和3.7倍;上调心肌细胞特定标识蛋白α辅肌动蛋白的表达,约为正常对照组的1.7和2.1倍;提示白藜芦醇可以促进ESC分化为心肌细胞。白藜芦醇干预各组均可上调PPARγ基因和蛋白表达,同时白藜芦醇0.44和4.4μmo.lL-1可以明显上调线粒体生物合成相关因子基因表达;白藜芦醇4.4μmo.lL-1处理组线粒体数目增多,提示线粒体生物合成可能是ESC分化为心肌细胞的重要机制。结论 白藜芦醇可以通过激动PPARγ受体并上调由PGC-1α介导的线粒体生物合成,从而促进ESC分化为心肌细胞。
- 方海琴赵君崔亚雄袁海涛杨嵘荣靖赵增明何俊彭双清
- 关键词：白藜芦醇胚胎干细胞心肌细胞
- 基于人胚胎干细胞健康安全评价体系的构建
- 2016年
- 食品、药品、医疗器械和材料、生物制剂以及环境的质量和健康安全是政府和民众十分关注的热点问题。目前国际标准的健康安全评价检测方法以微生物、动物及其细胞作为载体,不能准确反映人类的生物学特征,预测人体心、肝等靶器官毒性及发育毒性的准确率偏低,在技术层面严重制约了人类健康安全的评价和监控。如何建立准确反映人类生物学特征的健康安全评价体系是关系国民健康安全的重大科学问题^（[1]）。
- 俞光岩曹彤邹晓晖张学慧傅歆彭双清邓旭亮李盛林刘鹤肖苒欧阳宏伟彭晖陈晓赵增明王晓颖方海琴路璐任玉兰徐明明
- 关键词：胚胎干细胞毒性试验细胞分化体外研究
- T-2毒素对小鼠胚胎干细胞的氧化损伤作用被引量：4
- 2014年
- 目的应用小鼠胚胎干细胞(mESC)作为模型探讨T-2毒素对mESC的作用靶点与作用机制。方法选用0.5 ng/ml T-2毒素处理分化过程中的mESC 24、72和120 h,流式细胞术检测mESC的活性氧簇(ROS)的生成,比色法检测mESC的抗氧化防御酶活性,包括超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)的活力变化,以及脂质过氧化产物丙二醛(MDA)的含量。结果 0.5 ng/ml T-2毒素作用72与120 h,mESC中ROS大量蓄积,抗氧化防御酶(SOD、GPx)活力下降,MDA增加,其效应呈现时间依赖关系。自由基清除剂(Trolox,200μmol/L)预处理可以降低T-2毒素对mESC抗氧化防御酶活力的抑制作用,减轻T-2毒素引起的mESC中ROS的蓄积以及MDA的增加。结论低剂量T-2毒素染毒引起mESC的氧化损伤是其发育毒性的重要机制之一。
- 方海琴何俊赵君李利忠赵增明束玉磊耿雪彭双清
- 关键词：T-2毒素发育毒性小鼠胚胎干细胞活性氧
