邹刚
- 作品数：2 被引量：6H指数：2
- 供职机构：上海交通大学医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 5-杂氮-2′-脱氧胞苷对宫颈癌细胞生长及其甲基化转移酶和甲基结合蛋白DNA转录的影响被引量：4
- 2008年
- 目的:检测5-杂氮-2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对体外培养的宫颈癌HeLa细胞中DNA甲基化转移酶(DNMT)及甲基CpG结合蛋白(MeCP)的DNA转录水平的影响,探索其对肿瘤细胞生长的抑制作用。方法:5-Aza-CdR(终浓度为5.0μmol.L-1)与肿瘤细胞共培养72h后,用PI染色及流式细胞仪(FCM)检测肿瘤细胞的细胞周期;利用qRT-PCR鉴定药物组与空白组细胞DNMT及MeCP的mRNA浓度。吖啶橙(AO)细胞荧光染色法鉴定药物组与空白组细胞形态学上的差异及凋亡的程度。结果:FCM检测结果显示两组肿瘤细胞的细胞周期呈现明显差异,并且药物组细胞表现为G0/G1期阻滞,sub-G1峰明显。AO染色表明药物组细胞有明显凋亡迹象且伴随少量的细胞坏死现象。qRT-PCR结果显示,空白对照组和药物组中均有一定量DNMT及MeCP的mRNA产物,但其mRNA表达量无显著差异(P>0.05)。结论:5-Aza-CdR能够诱导体外培养的HeLa肿瘤细胞凋亡,而对于肿瘤细胞中甲基化转移酶及甲基CpG结合蛋白的DNA转录无显著的影响。
- 刘特邵叶波赖东梅程蔚蔚邹刚黄勤刘志学
- 关键词：子宫颈癌
- 人精子DNA从头甲基化转移酶及甲基CpG结合蛋白的mRNA表达分析被引量：2
- 2008年
- 目的通过体外分离成熟的精子,利用实时荧光定量PCR(qRealTime-PCR)检测其是否表达DNA从头甲基化转移酶(DNMT1/3a/3b)及甲基CpG结合蛋白(MeCP2),为精子中甲基化表观修饰研究提供依据。方法体外采集健康男性志愿者的精液标本,利用精子上游收集法获得具有活性的成熟精子。通过SYBR Green/PI双染色法,利用流式细胞术(FCM)检测精子样本的质膜完好性及其活性。抽提精子的总RNA,逆转录PCR获得cDNA,利用qRealTime-PCR鉴定精子甲基化转移酶及甲基CpG结合蛋白的mRNA表达情况。结果SYBR Green/PI双染色和流式细胞仪检测发现,利用上游收集法可以收集SYBR Green+/PI-的精子占总精子数的(94.513±1.120)%,表明该方法可以收集到质膜完好且活性强的精子。qRealTime-PCR结果显示,此样本精子中DNA从头甲基化转移酶的表达比较明显,而甲基CpG结合蛋白的表达量相当低。其中DNMT1的mRNA表达量较高(0.272±0.045,P<0.05),DNMT3a和DNMT3b的表达水平比较弱[(4.930±0.01)E-006,(6.500±1.7)E-005,P<0.05],而MeCP2几乎不表达([2.12±0.91)E-006,P<0.05]。结论利用qRealTime-PCR可以比较快速方便的检测出此次精子样本中DNA从头甲基化转移酶和甲基CpG结合蛋白的mRNA表达水平。
- 刘特赖东梅程蔚蔚邹刚罗诚祖刘志学
- 关键词：精子实时荧光定量PCR
