刘荷中
- 作品数：47 被引量：107H指数：6
- 供职机构：军事医学科学院基础医学研究所更多>>
- 发文基金：“九五”国家科技攻关计划国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 复制型DNA疫苗的研究进展被引量：1
- 2006年
- 复制型DNA疫苗是基于常规DNA疫苗和RNA复制子疫苗的基础上发展起来的一种新型疫苗,既具有稳定性好、安全性高的优点,又实现了外源基因的高效表达。本文就复制型DNA疫苗的构建、作用机制、优点以及最新的研究进展作一简要综述。
- 刘国栋刘荷中于继云郭炳冉
- 关键词：复制子甲病毒属
- 小鼠移植物抗宿主病模型的建立及其初步应用被引量：2
- 2002年
- 建立小鼠GVHD模型 ,用以评价人CD4 0 Ig融合蛋白治疗的有效性。以雄性C5 7BL/ 6小鼠作为脾细胞供者 ,照射后的雌性BALB/c小鼠作为受者 ,分别将 2 5×10 7和 5 0× 10 7/L脾细胞在60 Co射线亚致死剂量照射后经尾静脉注入 30只受者小鼠体内 ,建立小鼠GVHD模型。然后 ,在GVHD诱导后第 0、2、4天分 3次经尾静脉注射CD4 0 Ig融合蛋白各 5 0、15 0、4 5 0 μg,观察CD4 0 Ig融合蛋白对GVHD小鼠的治疗效果。结果显示 :3注射脾细胞 4～5天后 ,小鼠开始出现GVHD典型体征 ,第 10天受体小鼠体内扩增出雄性供体小鼠Y染色体特异片段。CD4 0 Ig融合蛋白治疗可显著延长GVHD小鼠的平均存活时间。此结果表明 ,已成功地建立了小鼠GVHD模型 ,可用于评价抗GVHD的治疗效果。
- 衣京梅刘荷中唐锁勤贾伟
- 关键词：小鼠移植物抗宿主病动物疾病模型
- 双顺反子真核表达载体pVAX1-IRES的构建与鉴定被引量：6
- 2008年
- 目的:为适应恶性肿瘤免疫治疗中多基因联合应用的需要,在真核表达载体pVAX1的基础上,利用内部核糖体进入位点IRES序列,构建双顺反子真核表达载体pVAX1-IRES,以增强DNA疫苗的免疫疗效。方法:通过PCR扩增获得目的基因IRES并定向克隆到pVAX1载体中,然后在IRES序列的上下游分别插入红色荧光蛋白基因DsRed1和增强型绿色荧光蛋白基因EGFP,瞬时转染人胚胎肾细胞293T,通过流式细胞术和免疫荧光验证基因表达。结果:pVAX1-IRES经相应酶切和测序鉴定,与预期设计一致,DsRed1基因和EGFP基因在pVAX1-IRES载体中,不仅可以分别表达,而且可以同时表达,显示该双顺反子真核表达载体构建成功。结论:pVAX1-IRES双顺反子表达载体的构建,为基因联合表达和恶性肿瘤的免疫治疗作了必要准备。
- 阎瑾琦刘国栋刘荷中贾锐王浩刘宁张亮于继云
- 关键词：内部核糖体进入位点真核表达
- 人CD40-Ig融合蛋白在CHO细胞中的表达与纯化研究被引量：3
- 2001年
- 目的 建立稳定表达CD40 Ig融合蛋白的工程细胞株 ,获得大量融合蛋白以研究靶向阻断CD40∶CD40L途径防治移植物抗宿主病 (GVHD)策略的应用潜力。方法 自真核瞬时表达载体pIG 40Ig中切下CD40 Fc融合基因 ,插入pcDNA3.1载体中构建稳定表达载体。利用脂质体Lipo fectamine将该载体转染CHO细胞 ,G418筛选抗性克隆 ;夹心ELISA法检测上清中CD40 Ig融合蛋白的表达 ;Westernblot法鉴定其免疫学活性。利用有限稀释法对筛选出的混合克隆单克隆化。滚瓶法无血清大批培养工程细胞 ,ProteinA亲和层析法纯化 ,SDS PAGE后薄层扫描分析纯度。利用流式细胞术检测该蛋白与Jurkat细胞表面CD40L的结合功能。结果 CD40 Fc融合基因插入pcDNA3.1载体后构建成功稳定表达载体p3.1 40Ig ,转染CHO细胞后经 2次克隆化获得稳定表达CD40 Ig融合蛋白的基因工程细胞株 ,命名为B2。ProteinA亲和层析纯化后融合蛋白纯度达 95 %以上 ,该融合蛋白可特异结合Jurkat细胞表面的CD40L。结论 CD40 Ig融合蛋白可模仿天然分子与其配基结合 ,为研究靶向CD40∶CD40L途径的治疗制剂在防治GVHD中的潜在应用提供了有用的工具。
- 刘荷中毛宁侯春梅李秀森郭子宽吴英沈倍奋唐佩弦
- 关键词：融合蛋白CHO细胞纯化骨髓移植
- 梅毒螺旋体优势表位抗原嵌合表达蛋白对国家参考品的反应性被引量：9
- 2003年
- 目的 采用含梅毒螺旋体 (Tp)不同优势表位抗原连接嵌合表达 ,筛选用于ELISA试剂检测梅毒抗体的多表位抗原。方法 筛选Tp优势抗原表位 ,进行不同的连接嵌合表达 ,用于ELISA试剂检测 3 0份国家参考品血清。结果 不同抗原组合连接 (Tp15 47、Tp42 15 47、Tp17 42 15 47)对血清的反应性不同。结论 含有多个抗原表位的嵌合抗原 。
- 陈坤张贺秋宋晓国王国华朱翠侠刘荷中邱艳凌世淦
- 关键词：梅毒螺旋体
- HCV全长序列转基因细胞模型的初步建立
- 丙型肝炎病毒(HCV)是人类在没有获得病毒颗粒,也没有测到病毒抗原的情况下,首次利用分子生物学技术发现的病毒。经过10余年的不断探索,对HCV的基因结构与功能已经有了较为全面的认识。但是,由于缺乏检测方便的HCV细胞模型...
- 焦成松凌世淦张贺秋刘荷中宋晓国
- 文献传递
- 丙型肝炎病毒核心蛋白不同区段在HEK293T细胞内的定位被引量：1
- 2004年
- 目的 :为进一步探讨HCV核心蛋白致癌机制 ,观察了HCV核心蛋白不同区段在HEK2 93T细胞内的定位情况。方法 :构建增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)和不同长度核心蛋白区段融合表达的pEGFP_C1系列重组载体 ,对HEK2 93T细胞进行瞬时转染 ,并在激光扫描共聚焦显微镜下观察核心蛋白不同区段在细胞内的定位。结果 :全长核心蛋白定位于细胞质 ;核心蛋白 1～ 5 9aa区段完全定位于细胞核 ;5 0～ 14 0aa区段和 1～ 14 0aa区段在细胞核和细胞质中均存在 ;130～ 191aa区段完全存在于细胞质中。结论 :核心蛋白不同区段在细胞内的定位不同 ,将导致其参与细胞调节的途径和功能的不同。
- 冯晓燕凌世淦刘荷中张贺秋宋晓国周涛
- 关键词：丙型肝炎病毒病毒核心蛋白质类
- 前列腺特异性抗原单克隆抗体的研制及其初步鉴定被引量：1
- 1997年
- 本研究利用从正常男性精液中提取纯化的前列腺特异性抗原免疫小鼠，建立了２株可持续稳定分泌抗前列腺特异性抗原单克隆抗体的杂交瘤细胞株，命名为Ｐ１３和Ｐ２６。此２株杂交瘤细胞在体外连续传代培养半年以上，冻存后复苏仍可保持抗体分泌能力。利用所制备的单克隆抗体对良性前列腺肥大、前列腺癌、乳腺癌、胃癌、食道癌和卵巢癌病人的病理切片标本进行了免疫组化测定，证明其有一定的前列腺特异性。
- 徐元基凌世淦刘荷中张朝山张贺秋王国华宋晓国孙英勋夏芳李春海
- 关键词：前列腺特异性抗原单克隆抗体
- 人白介素-1β及其突变体的克隆、表达与活性研究被引量：3
- 1999年
- 郭甫坤凌世淦宋晓国孟莉孙柯儿刘荷中金伯泉
- 关键词：白细胞介素1突变体克隆
- 基于E2糖蛋白的丙型肝炎疫苗的研究进展与展望被引量：1
- 2002年
- 丙型肝炎是由丙型肝炎病毒感染所引起的一种严重的传染病 ,目前全世界约有 1.7亿感染者 ,我国的感染率为 3%～ 5 %。HCV感染后在体内持续存在和被清除的机制仍不明确。由于缺乏有效HCV体外增殖系统及中和抗体活性的检测技术 ,使预防性疫苗研究十分困难。但最近的研究发现 ,HCV膜糖蛋白E2可能具有中和性抗原表位 ,特别是它的高变区 1(HVR1)更是较为明确的中和表位 ,而且该表位具有一定的交叉反应性 ,因此为疫苗的研究提供了新的希望。本文概述了当前基于HCVE2糖蛋白的预防性HCV疫苗和相关动物模型的研究现状与进展 ,并分析了疫苗研制中存在的问题和疫苗研制的策略。
- 刘荷中
- 关键词：丙型肝炎疫苗动物模型丙型肝炎
