周瑜
- 作品数：4 被引量：7H指数：2
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- MTHFR、HCY与BDNF在大鼠胚胎神经管畸形发生中的作用被引量：1
- 2017年
- 目的研究叶酸-同型半胱氨酸代谢途径中关键酶亚甲基四氢叶酸还原酶(methylenetetrahydrofolate reductase,MTHFR)、同型半胱氨酸(homocysteine,HCY)与脑源性神经营养因子(brain derived neurotrophic factor,BDNF)在大鼠神经管畸形发生中的作用。方法将30只成年雌性SD大鼠随机分为正常对照组(正常组)、神经管畸形组(畸形组)、叶酸干预组(叶酸组),每组各10只。于孕鼠妊娠第15.5天时,采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定孕鼠血浆HCY浓度;取大鼠胚胎,免疫组织化学染色分析胚胎神经管组织MTHFR、BDNF表达量、TUNEL染色(过氧化物酶标记测定法)分析胚胎神经管组织细胞凋亡率。结果与正常组相比,畸形组孕鼠血浆HCY浓度升高(P<0.05),胚胎神经管组织中MTHFR、BDNF因子的免疫组织化学染色平均光密度(MOD)值下降(P<0.05),TUNEL染色显示胚胎神经管组织中细胞凋亡率升高(P<0.05),叶酸组孕鼠血浆HCY浓度无明显变化(P>0.05),胚胎神经管组织中MTHFR、BDNF的免疫组化染色MOD值下降(P<0.05),TUNEL染色显示胚胎神经管组织神经细胞凋亡率无明显变化(P>0.05)。与畸形组比,叶酸组孕鼠血浆Hcy浓度降低(P<0.05),胚胎神经管组织中MTHFR、BDNF因子的MOD值升高(P<0.05),TUNEL染色显示神经细胞凋亡率降低(P<0.05)。结论胚胎神经管组织发育中MTHFR表达降低致HCY蓄积,引起BDNF表达下调,细胞凋亡增加,从而导致神经管关闭受阻;叶酸补充后较好地逆转这一过程,从而预防大部分神经管畸形的发生。
- 董磊杜勇邓晓征邢欣然周瑜
- 关键词：神经管畸形叶酸亚甲基四氢叶酸还原酶
- Egr-1对APP基因表达的调控作用
- 目的：阿尔兹海默病(Alzheimer’s Disease，AD)是一种不可逆转性的中枢神经系统的退行性病变,可以引起智力的衰退并发展为渐进性的痴呆,同时伴随着神经病理学方面的损害,这种损害的病理表现在由大量的由39-4...
- 周瑜
- 关键词：淀粉样前体蛋白阿尔茨海默病基因表达发病机制
- 文献传递
- Purα基因过表达和RNAi慢病毒载体的构建及应用被引量：2
- 2014年
- 目的构建Purα基因过表达以及SiRNA慢病毒表达载体,通过包装病毒,以用于神经系统细胞感染及原代培养神经元的基因操作。方法 1)过表达载体的构建:本实验使用pCDH-EF1-MCS-T2A-copGFP和pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP慢病毒载体,PCR扩增Purα全长基因,然后亚克隆到pCDH载体相应的多克隆位点之中,进行酶切和测序鉴定;2)ShRNA慢病毒表达载体的构建:根据shRNA的特征,设计shRNA的DNA序列以及其反向互补序列,然后合成并克隆到慢病毒载体pLKO.1-puro的相应位点中。3)慢病毒包装和滴度测定:将克隆好的pCDH-Purα和pLKO.1-puro-shRNA载体和病毒包装质粒pCMV-VSVG、pCMV-dR8.2 dvpr按相应的比例转染到293FT细胞中,48h后收集上清液,纯化、浓缩,进行滴度测定。结果测序结果证实所插入片段相位正确,转染后通过RT-PCR和Western blot证实过表达组Purα基因表达增高,而沉寂组的Purα表达抑制,达到实验设计要求,可以用于实验研究。结论利用本方法可以快速地进行目的基因的基因操作,省时、节约,与同类型的方法比较,具有较大的优越性,可以在实验中推广应用。
- 贾中发马琳和祯泉周瑜孙涛崔建奇
- 关键词：慢病毒表达载体基因过表达基因操作
- Egr-1对APP基因表达的调控作用被引量：5
- 2015年
- 该研究构建了含有APP启动子的荧光素酶报告质粒以及缺失突变的报告质粒,将该质粒与Egr-1真核表达载体p CDNA3-Egr-1共转染到HEK293与U87MG细胞中进行荧光素酶活性测定,以确定Egr-1对APP基因表达的调控作用。通过染色质免疫共沉淀实验(chromatin immunoprecipitation assay,Ch IP)和凝胶电泳迁移实验(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)确定Egr-1蛋白在APP启动子上的结合部位,同时利用组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA(trichostatin A)和butyrate诱导内源性Egr-1的表达以及Egr-1抑制剂suramin来作用于细胞,通过蛋白免疫印迹分析(Western blot)检测Egr-1对APP蛋白表达的作用。结果显示,Egr-1蛋白在APP基因启动子上5′UTR区域有特异性的结合部位,去除该结合部位则Egr-1失去对APP基因启动子的调控作用,Ch IP和EMSA的结果也证实了该结合位点;通过HDAC抑制剂和suramin干扰内源性Egr-1的表达则显著影响了Egr-1对APP基因表达的调控作用。
- 马琳周瑜李永玲柴娟贾中发郭克孙涛崔建奇
- 关键词：EGR-1淀粉样前体蛋白阿尔茨海默病基因表达调控
