宁蓬勃
- 作品数：40 被引量：229H指数：9
- 供职机构：西北农林科技大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：陕西省科技攻关计划陕西省“13115”科技创新工程重大科技专项国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学轻工技术与工程文化科学更多>>
- PRRSV陕西分离株ORF5基因克隆、序列分析及原核表达被引量：2
- 2010年
- 克隆猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF5基因,并进行序列分析及原核表达。根据GenBank公布的PRRSV ORF5基因的核苷酸序列,设计并合成一对特异性引物,用RT-PCR方法扩增PRRSV陕西分离株糖基化囊膜蛋白基因ORF5,将其克隆入pGEM-T载体中,进行测序及序列分析。再设计另外1对引物扩增ORF5缺失编码N端31个氨基酸残基的基因片段,将截短的ORF5基因亚克隆入原核表达载体pET-32a中,在大肠杆菌BL21中进行原核表达。结果扩增到603 bp的PRRSV全长ORF5基因,序列分析表明,分离株与北美型代表株VR-2332和欧洲型代表株LV氨基酸同源性分别为87.8%和54.5%。因此推测陕西分离株属于北美型。SDS-PAGE可检测到大小约为38 ku的融合蛋白,主要以可溶性蛋白形式存在。West-ern-blot分析表明,重组蛋白可被PRRSV阳性血清所识别。
- 王志昇许信刚童德文邢福珊陈曦唐麒麟宁蓬勃
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒陕西分离株ORF5原核表达
- 猪瘟病毒强毒株和兔化弱毒疫苗株RT-PCR快速鉴别检测方法的建立被引量：9
- 2010年
- 【目的】建立猪瘟病毒强毒株和兔化弱毒疫苗株的RT-PCR快速鉴别检测方法。【方法】根据Gen-Bank中36株猪瘟病毒(CSFV)强毒株和兔化弱毒疫苗株的基因序列,分别设计了针对CSFV强毒和兔化弱毒疫苗株的特异性引物,建立了一种能区分CSFV强毒和兔化弱毒疫苗株的RT-PCR检测方法。【结果】建立的RT-PCR检测方法可以从CSFV强毒株和兔化弱毒疫苗株中分别扩增出大小为187和492 bp的特异性片段,对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV2)和猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)等猪源性病毒的检测结果均为阴性,说明该方法具有较好的特异性。对10份疑似猪瘟临床样品进行检测后发现,利用该方法可以从中分别检测出CSFV强毒和疫苗毒。【结论】建立了可鉴别检测CSFV强毒株和弱毒疫苗株的RT-PCR方法,为猪瘟的早期诊断及疫苗免疫猪和野毒感染猪的鉴别提供了技术参考。
- 郭抗抗邓力井勇张彦明王晶钰宁蓬勃
- 关键词：猪瘟病毒猪瘟兔化弱毒疫苗反转录-聚合酶链式反应
- 检测猪分子伴侣Jiv基因的SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR方法的建立被引量：2
- 2013年
- Jiv蛋白是一种与猪瘟病毒（CSFV）复制密切相关的细胞分子伴侣，为检测CSFV感染细胞内分子伴侣Jiv基因表达变化，本研究以猪Jiv基因（DNAJCl4）为参考序列，建立了检测猪分子伴侣JiV基因的SYBRGreenI荧光定量RT．PCR方法。结果显示，所建方法的标准曲线相关系数为0．999，扩增效率为103．4％，在10‘～10’拷贝数范围内具有较好的线性关系；对Jiv基N最低可检测到10拷贝，该方法的批内变异系数和批间变异系数均在O．5％以下，具有较高的敏感性和重复性。应用建立的方法对猪多种组织及猪源传代细胞中Jiv基N的表达进行检测，结果显示Jiv基因在所检测的组织和细胞中均有表达，表明所建方法可以用于Jiv基因的检测；同时对CSFV感染猪和阴性猪脾脏中的Jiv基因表达水平进行检测，统计发现CSFV感染猪脾脏中的Jiv基因表达水平显著上调，提示Jiv基因的表达在CSFV复制中发挥着一定的作用。本研究建立的检测猪Jiv基因的荧光定量RT．PCR方法为进一步明确Jiv蛋白在CSFV致病中的作用提供方法支持。
- 谭学超郭抗抗宁蓬勃刘伟曹伟伟徐磊武宁林青
- 关键词：猪瘟病毒荧光定量RT-PCRSYBR
- 乙型脑炎病毒E基因在杆状病毒中的表达被引量：1
- 2010年
- 利用PCR方法扩增日本乙型脑炎病毒(JEV)E全长基因,然后将其克隆到杆状病毒转座载体pBac-SC中,筛选重组质粒pBacSC-E,再转化入含有穿梭载体的感受态细胞DH10Bac,经抗性及蓝白斑筛选得到含E基因的重组杆状病毒DNA,以脂质体介导法将此重组杆状病毒DNA转染Sf9昆虫细胞,从而获得重组杆状病毒。用此重组杆状病毒感染Sf9昆虫细胞,经Western-blot检测表明,E基因在昆虫细胞中获得表达,表达蛋白的分子量约53 ku,与预期结果大小一致,且能与日本乙型脑炎阳性血清发生特异性反应,这为进一步研究JEV亚单位疫苗和诊断抗原奠定了基础。
- 戚龙霞许信刚王志昇童德文唐麒麟宁蓬勃
- 关键词：乙型脑炎病毒重组杆状病毒SF9细胞
- 猪圆环病毒2型分离株优势基因型分析与检测
- 为了解猪圆环病毒2型(PCV2)分离株基因型的变化,对1999—2009年NCBI中收录的556个PCV2分离株全基因序列进行了分析。结果表明,1999—2002年PCV2的优势流行毒株为基因A型(PCV2A);从200...
- 郭抗抗张彦明张红刘华科宁蓬勃王晶钰
- 关键词：猪圆环病毒2型基因分析基因型PCR病毒检测
- 文献传递
- 生鲜牛奶中牛分支杆菌PCR检测方法的建立被引量：2
- 2013年
- 为建立生鲜牛奶中牛分支杆菌的PCR检测方法,选择牛分支杆菌pncA的基因序列中一段大小为423bp的片段作为靶序列,设计并合成一对引物,对所建立的PCR方法进行了特异性、敏感性和重复性试验。结果表明,建立的PCR方法在牛分支杆菌污染模型乳中成功扩增出了423bp的特异性目的条带,而分别添加有沙门菌、大肠埃希菌、无乳链球菌、金黄色葡萄球菌、嗜肺巴氏杆菌、铜绿假单胞菌及枯草杆菌的乳样中均未扩增出任何条带。牛分支杆菌的DNA最低检测限为12.18pg/μL,牛分支杆菌污染牛奶模型的敏感性为3cfu/mL。建立的方法可用于牛奶中牛分支杆菌的检测。
- 程亮宁蓬勃张彦明曹伟伟刘伟战仁武
- 关键词：牛分支杆菌聚合酶链反应生鲜牛奶
- 应用ICP-AES法研究云南普洱茶稀土含量被引量：20
- 2010年
- 应用电感耦合等离子体发射光谱法（ICP-AES）对云南省普洱茶主产地采集的150份普洱茶样品的稀土含量进行检测研究。检测样品中稀土的含量在0.26~4.07 mg.kg-1范围。依据国家标准GB 2762—2005《食品中污染物限量》中稀土限量标准2 mg.kg-1考核,43%的普洱茶样品被检出稀土含量超标。云南普洱熟茶和生茶不同的生产工艺会造成普洱茶稀土含量的差异,并影响产品质量。云南普洱茶不同主产地区之间的稀土含量存在差异,个别地区的普洱茶稀土质量安全控制情况不容乐观。
- 宁蓬勃龚春梅张彦明郭抗抗
- 关键词：普洱茶稀土元素电感耦合等离子体原子发射光谱法
- 猪瘟病毒石门株与C株感染宿主细胞差异表达基因及其在病毒致病中的作用
- 猪瘟（CSF）是由猪瘟病毒（CSFV）引起的猪的一种高度接触性传染病。在过去的几十年中，我国通过采取兔化弱毒疫苗免疫接种与扑杀相结合等措施，有效地控制了猪瘟的流行，但近年来我国猪瘟疫情又有所抬头，尤其是慢性猪瘟和非典型猪...
- 宁蓬勃
- 关键词：猪瘟病毒石门株
- 文献传递
- 猪瘟病毒石门株调控猪巨噬细胞Toll样受体介导的天然免疫应答
- 引言Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)通过介导天然免疫应答,产生免疫效应分子,对侵入机体的病毒进行清除,而病毒为了能够生存也会通过多种方式影响TLRs介导的免疫应答。猪瘟病毒(CSFV)感...
- 曹志张彦明郭抗抗郑敏萍宁蓬勃康恺林鸷张成成
- 传染性法氏囊病病毒YL株VP2基因的克隆、序列分析及原核表达被引量：6
- 2010年
- 克隆、序列分析及原核表达鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP2基因。根据GenBank已登录的IB-DV VP2基因序列,设计合成一对VP2基因特异性引物,应用RT-PCR技术从陕西省某鸡场分离的IBDV毒株中克隆VP2基因并进行序列分析。再将VP2基因亚克隆于原核表达载体pET-32a中,构建重组质粒pET-32a-VP2,经鉴定正确后转化大肠杆菌BL21菌株进行诱导表达,并进行SDS-PAGE检测。成功克隆IBDVYL毒株VP2全基因序列,核苷酸和氨基酸序列分析表明,YL株为IBDV超强毒株。经IPTG诱导后,SDS-PAGE分析,在宿主菌BL21中成功表达约为53 ku的VP2蛋白。IBDV VP2基因克隆表达成功,为IBDV的分子生物学特性研究提供资料,其表达产物为进一步制备抗IBDV单克隆抗体奠定了基础。
- 黄春旭许信刚童德文王志昇杜谦唐麒麟宁蓬勃
- 关键词：传染性法氏囊病病毒VP2基因基因克隆原核表达
