张晓溪
- 作品数:2 被引量:2H指数:1
- 供职机构:国家工程研究中心更多>>
- 发文基金:艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项“重大新药创制”科技重大专项更多>>
- 相关领域:医药卫生更多>>
- 重组腺苷蛋氨酸合成酶酶促反应条件的研究被引量:1
- 2009年
- 目的:对重组腺苷蛋氨酸合成酶催化L-蛋氨酸(Met)和三磷酸腺苷(ATP)合成腺苷蛋氨酸的反应条件进行研究。方法:将重组腺苷蛋氨酸合成酶制成粗酶液,对其酶促反应条件进行研究和优化,摸索反应的最适pH值、最适反应时间及最适酶量,解决产物抑制问题和产物分解问题。根据试验摸索的条件进行450L生物反应罐的中试放大。结果:重组腺苷蛋氨酸合成酶催化Met和ATP合成的反应最适pH值为7.0,反应时间为8h,选择硼酸钠-硫酸缓冲液作为反应的缓冲系统,确定了反应液中酶液的最佳比例为1∶10,解决产物抑制问题的对甲苯磺酸钠的用量为9%,将镁离子和钾离子的盐酸盐形式改为硫酸盐形式,从而保证了最小限度的产物分解。中试放大结果:三批收率分别达到86.8%、87.1%和88.4%。结论:建立了重组腺苷蛋氨酸合成酶酶促反应的方法,为酶促法合成腺苷蛋氨酸大规模生产奠定了基础。
- 关晶华许晓陈新玲王素君张晓溪袁京云
- 关键词:腺苷蛋氨酸酶促反应
- 不同形式乙型肝炎病毒核心抗原核酸疫苗的构建及免疫效果比较被引量:1
- 2011年
- 目的比较截短、全长、全长融合等3种不同形式的乙型肝炎病毒核心抗原(HBcAg)核酸疫苗在小鼠体内的体液免疫和细胞免疫效果,获得最佳的免疫原设计方案。方法构建经密码子优化的不同形式HBcAg核酸疫苗质粒:pRec2.0-Ct(表达截短至144 aa的Core蛋白)、pRec2.0-C(表达全长183 aa的Core蛋白)和pRec2.0-C-preS1(表达全长Core和PreS1融合蛋白),转染293T细胞,Western blot检测目的抗原基因的表达。将3种核酸疫苗分别免疫BALB/c小鼠,ELISA法检测小鼠血清抗-HBc抗体水平,IFNγELISPOT法检测小鼠体内HBcAg特异性T细胞免疫应答。结果 3种核酸疫苗质粒经酶切及测序证实构建正确;3种核酸疫苗质粒在293T细胞中均可表达相应蛋白;经3种核酸疫苗免疫后的小鼠均产生了HBcAg特异性抗体和T细胞应答,其中pRec2.0-C组抗-HBc抗体水平和T细胞免疫反应水平均显著高于pRec2.0-C-preS1组和pRec2.0-Ct组(P<0.05)。结论将HBcAg截短至144个氨基酸或与preS1融合均可降低其体液免疫及细胞免疫应答。
- 沈林陈丹张晓溪孙志丹袁京云王维龙刘新颖李鼎锋刘勇
- 关键词:免疫效果