杨瑞
- 作品数：9 被引量：19H指数：2
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- 介绍一种快速提取胎鼠基因组DNA进行基因型分析的改良方法
- 2013年
- 目的建立一种快速提取胎鼠基因组DNA进行基因型分析的简便方法。方法先对胎鼠组织进行碱裂解,然后通过盐析纯化DNA,经琼脂糖凝胶电泳判断DNA大小,检测A260/A280的比值判断其纯度,最后将抽提的DNA进行PCR扩增和基因型分析,检测其作为PCR模板的稳定性。结果在2h内能分离到胎鼠基因组DNA,片段完整没有明显的降解现象,A260/A280比值>1.77,能稳定用于PCR基因型鉴定分析。结论该方法简便、快速、经济,能得到PCR级的高质量胎鼠基因组DNA,为准确和快速地进行胎鼠的基因型分析提供保证,具有很好的稳定性、可靠性和实用性。
- 杨瑞麻献华唐君仪章卫平谢志芳
- 关键词：基因组胎鼠PCR基因型鉴定
- 锌指蛋白ZBTB20基因重组腺病毒表达载体的构建和鉴定
- 2014年
- 目的:构建含锌指蛋白ZBTB20基因的重组腺病毒载体,以研究锌指蛋白ZBTB20的生物学功能。方法:将带有FLAG标签的ZBTB20 cDNA片段(ZBTB20-FLAG)克隆至pAdTrack-CMV载体,将该载体与pAdEasy质粒进行细菌内同源重组从而获得重组腺病毒载体pAd-ZBTB20,之后在293细胞中进行包装以及扩增,并对病毒滴度进行检测;采用肝脏组织特异性ZBTB20基因敲除小鼠的原代肝细胞和肝脏组织模型,分别于离体和在体水平鉴定所制备的重组腺病毒Ad-ZBTB20介导的ZBTB20蛋白表达情况;并采用报告基因技术检测过表达的ZBTB20蛋白的功能活性。结果:成功制备了锌指蛋白ZBTB20重组腺病毒,该重组腺病毒感染原代肝细胞和小鼠肝脏组织能过表达ZBTB20蛋白,并且此ZBTB20蛋白能抑制其下游靶基因甲胎蛋白的转录。结论:所构建的ZBTB20重组腺病毒可以介导ZBTB20的过表达并具备转录调节活性,为今后研究ZBTB20的相关生物学功能奠定了基础。
- 朱晓彤杨瑞周露婷张晔李玲章卫平施广霞陈玉霞
- 关键词：重组腺病毒甲胎蛋白类转录调节
- 转录因子ChREBP-α增强小鼠原代肝细胞的脂质合成能力
- 2013年
- 目的构建含转录因子ChREBP-α基因的重组腺病毒载体,检测其在小鼠原代肝细胞中的表达及其对脂质合成的调节作用。方法将ChREBP-αcDNA克隆到穿梭质粒pShuttle-CMV载体,与pAdEasy质粒在大肠杆菌BJ5183中同源重组,获得腺病毒载体pAd-ChREBP-α,在293A细胞中进行病毒的包装和扩增,检测病毒的滴度;将腺病毒Ad-ChREBP-α感染小鼠原代肝细胞,用实时荧光定量PCR及蛋白质印迹法检测ChREBP-α的表达,实时荧光定量PCR检测ChREBP-α靶基因LPK mRNA的表达。用核素14 C示踪法测定肝细胞的脂质合成速率。结果成功制备了ChREBP-α重组腺病毒,利用其在原代肝细胞过表达ChREBP-α,可显著上调靶基因LPK的表达,并增强肝细胞的脂质合成速率。结论成功制备了具有生物学活性、能在原代肝细胞中过表达的ChREBP-α重组腺病毒,为研究ChREBP-α的糖脂代谢调控作用奠定了基础。
- 周露婷杨瑞李玲陈榕张晔印慨邹大进张海章卫平
- 关键词：脂代谢障碍重组腺病毒肝细胞
- 热应激对大鼠肝组织及人前列腺癌PC-3细胞RhoB表达的影响被引量：3
- 2007年
- 目的:观察烫伤后大鼠肝脏组织及热应激后前列腺癌PC-3细胞小G蛋白RhoB表达的变化,探讨热应激对体内外RhoB表达的影响。方法:制备雄性SD大鼠30％体表面积Ⅲ度背部烫伤模型,烫伤后2、4、8、16 h取相应大鼠肝脏组织(n= 6),应用RT-PCR和Western印迹分析测定RhoB mRNA和蛋白水平,并以正常大鼠肝脏组织作对照(n=6)。制备人前列腺癌PC-3细胞热应激模型,热应激后0．5、1、2、4、8 h取细胞检测RhoB的表达,并以未处理细胞作对照。结果:烫伤后4 h,大鼠肝组织RhoB mRNA表达量最高,为正常对照的3．2倍(P<0．01),8 h开始下降;而RhoB蛋白表达量在烫伤后8 h最高(P<0．01)。PC-3细胞RhoB mRNA在热应激后2 h时开始上调;4 h时达到最大值,约为对照的2．8倍(P<0．01);热应激后8 h RhoB蛋白表达量最高(P<0．01)。结论:在体内、体外实验中热应激均能上调小G蛋白RhoB mRNA和蛋白的表达。
- 刘亚萍李忆东王晓慧杨瑞卢建
- 关键词：热应激小G蛋白RHOB前列腺肿瘤
- 糖皮质激素增强人卵巢癌细胞抵抗化疗药物杀伤作用的机制
- 目的:糖皮质激素(GCs)因能杀伤某些肿瘤细胞和防治放、化疗所导致的恶心、呕吐以及组织水肿等毒副作用而常与化疗药物联合应用治疗卵巢癌等实体肿瘤。但是,近年来的研究发现GCs能保护多种正常细胞和肿瘤细胞免受有害刺激因素如化...
- 陈玉霞王燕傅辰春李宗斌杨瑞卢建
- 文献传递
- 猪肺表面活性物质对大鼠早期脂多糖性急性肺损伤的治疗作用
- 2007年
- 目的:观察猪肺表面活性物质(PPS)混悬液对大鼠早期脂多糖(LPS)性急性肺损伤(ALI)的治疗作用。方法:SD大鼠随机分为4组:生理盐水组、低、中、高3个不同剂量PPS给药组,各组动物均气道内滴注LPS1.5 mg.kg-1,30 min后分别经气管滴注100 mg.kg-1、150 mg.kg-1、200 mg.kg-1PPS(PPS组)或等量生理盐水(对照组)。之后观察6 h,监测大鼠的PaO2和PaCO2,计算各组大鼠存活率。大鼠处死后检测肺系数(LI),肺泡灌洗液(BALF)中总蛋白(TP)含量,白细胞(WBC)数和肿瘤坏死因子(TNF)-α的浓度,并观察肺病理组织学改变。结果:与生理盐水组相比,LPS损伤大鼠早期气道内滴入外源性PPS可提高PaO2,降低PaCO2,提高存活率,减轻肺水肿及肺毛细血管膜的通透性,PPS150组、PPS200组的治疗效果优于PPS100组。结论:PPS早期给药对LPS气道内滴注致ALI具有明显的治疗作用。
- 王轶群孙瑜杨瑞钟纪根卢建
- 关键词：急性肺损伤脂多糖类
- 电穿孔法介导siRNA高效转染小鼠原代软骨细胞
- 2015年
- 目的建立小鼠原代软骨细胞高效电转si RNA的方法。方法常规分离得到的小鼠原代软骨细胞继续用链丝菌蛋白酶消化3h,然后应用高效电转缓冲液和优化的电转参数转染p CMV-EGFP表达质粒或si RNA,用台盼蓝检测细胞存活率;转染后48h分析转染效率和si RNA靶分子的m RNA和蛋白表达水平。结果电穿孔后原代软骨细胞的存活率>80%,质粒的转染效率达到37.3%±5.2%;si RNA靶分子的m RNA和蛋白表达水平分别下调了75%和66%。结论成功建立了通过电穿孔介导si RNA转染小鼠原代软骨细胞的方法,达到了很好的基因沉默效果且保持了较高的细胞存活率。
- 刘安军麻献华杨瑞高琳陈李斌佶章卫平谢志芳
- 关键词：RNA干扰SIRNA电穿孔
- 翻转课堂在病理生理学实验教学中的应用被引量：16
- 2016年
- 为探讨翻转课堂教学模式在病理生理学实验教学中的应用效果,通过比较传统教学模式和翻转课堂教学模式的教学效果,发现翻转课堂可有效提升学员开展实验的兴趣和效率,培养学员自主学习能力,显著提高病理生理学实验教学效果。
- 许熊飞魏纯纯师建辉杨瑞彭骏章卫平
- 关键词：病理生理学实验教学教学模式
- 优化整体原位杂交方法检测基因在幼鼠大脑中的表达
- 2016年
- 目的优化整体原位杂交方法,用于检测基因在幼鼠大脑中的时空表达分布。方法通过摸索最佳蛋白酶K的消化时间,改良杂交缓冲液成分,并延长杂交时间和漂洗时间,对整体原位杂交方法进行优化,并用优化的方法检测了Cdh6、Bhlhb5和Lmo4 mRNA在出生后7天的小鼠大脑中的整体表达分布。结果采用优化的整体原位杂交方法成功地检测了3种mRNA在幼鼠全脑的区域性表达特征,特异性杂交信号强,非特异性背景低。结论成功优化了幼鼠全脑原位杂交方法,为开展后续的研究打下基础。
- 刘安军麻献华杨瑞章卫平谢志芳
- 关键词：整体原位杂交小鼠大脑基因表达
