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LanCL1融合蛋白表达纯化及其多克隆抗体制备鉴定: 2008年; 目的:获得LanCL1原核和真核表达融合蛋白,制备兔抗LanCL1的多克隆抗体以用于LanCL1基因功能研究。方法:PCR扩增LanCL1 CDS编码区序列,分别亚克隆至原核和真核表达载体上。将真核表达重组质粒用脂质体转染HEK293细胞成功获得了pRK5-LanCL1真核表达融合蛋白。同时将原核表达重组质粒化学转化BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导GST-LanCL1原核表达融合蛋白,谷胱甘肽琼脂糖珠亲和纯化,透析浓缩获得高纯度GST-LanCL1融合蛋白。将纯化的融合蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,并用Western Blot检测抗体。结果:获得了LanCL1真核和原核表达重组融合蛋白。经亲和纯化后的GST-LanCL1融合蛋白纯度达到90%,BCA蛋白定量浓度约0.44mg/mL。获得了高效价的特异性兔抗LanCL1多克隆抗体。结论:成功进行了LanCL1融合蛋白的原核和真核表达,并获得抗LanCL1的高灵敏度的多克隆抗体,为LanCL1进一步功能研究奠定了基础。; 余守洋陈米娜季一飞夏孝强李芳华王德华崔义元; 关键词：真核表达原核表达蛋白纯化多克隆抗体

CD133多克隆抗体制备及肿瘤干细胞鉴定: 2011年; 目的制备肿瘤干细胞标志性蛋白CD133的多克隆抗体,为进一步研究肿瘤组织中肿瘤干细胞的生物学特性以及筛选肿瘤干细胞、制备肿瘤干细胞的小鼠模型奠定基础。方法以人CD133蛋白细胞外膜表面肽段为抗原,免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,进而用其对肿瘤组织进行Western blot以及免疫组化染色。结果 Western blot证实该抗体可以识别过表达的myc-CD133以及内源性CD133,进一步免疫组化结果显示该抗体可以识别恶性胶质瘤中的肿瘤干细胞。结论成功制备高效、特异的CD133多克隆抗体,该抗体可以用于肿瘤组织的免疫染色及肿瘤干细胞的筛选。; 田军龙蔡佩玲夏孝强李芳华王德华陈米娜; 关键词：肿瘤干细胞 CD133 多克隆抗体

基于CA杂合启动子基因敲入载体的构建: 2008年; 目的:改造原有的Rosa26基因敲入系统,引入启动能力更强的CA杂合启动子(由鸡actin启动子和SV40增强子融合而成)。方法:运用PCR,限制性内切酶酶切及T4连接酶连接的方法,构建带有CA启动子的基因敲入载体。结果:成功地对原有Rosa26基因敲入系统进行了改造,引入了CA启动子,并且成功构建了mGluR5基因敲入载体。结论:基于CA杂合启动子的基因敲入载体具有更强的启动能力,而且能够在某些特定组织中增强目的基因的表达,为今后研究基因功能及疾病模型小鼠的制备奠定了良好基础。; 崔义元陈米娜王德华李芳华; 关键词：MGLUR5

用重组工程技术快速构建Shank3条件性敲除载体: 2008年; 目的:构建Shank3条件性敲除载体,最终用于构建Shank3条件性敲除小鼠。方法:用重组工程技术来快速高效地构建条件敲除载体。结果:成功构建得到Shank3条件性敲除载体。结论:重组工程技术是一个用于构建条件性敲除载体成熟而高效的方法。; 王德华陈米娜崔义元

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王德华