陈建芳
- 作品数：12 被引量：52H指数：4
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人HCT116结肠癌细胞系中CD133^+结肠癌干细胞分离及鉴定被引量：4
- 2009年
- 目的从人结肠癌细胞系(HCT116)中分离鉴定结肠癌干细胞,并观察其体外生物学特性。方法利用RT-PCR、免疫荧光、流式细胞等技术检测HCT116细胞中CD133的表达情况;利用免疫磁珠分选技术分选CD133+细胞;采用无血清培养基培养分选后的CD133+细胞鉴定其体外增殖特性;采用含血清培养基诱导干细胞克隆球分化并采用免疫组化检测CK20表达情况鉴定其分化特性。结果HCT116细胞系中存在CD133+细胞,免疫磁珠能有效的分选CD133+细胞,分选后的阳性含量为91.92%,分选后的阳性细胞具有典型干细胞的体外增殖、分化特性。结论CD133+结肠癌干细胞在体外具有和普通干细胞类似的无限增殖、自我更新和分化能力,同时它们也表达ABCG2等耐药相关蛋白。
- 陈克力梁后杰江恒陈建芳裴莉郑晨宏
- 关键词：HCT116结肠癌干细胞CD133
- 丙酮酸脱氢酶激酶-1在人结肠癌中的表达及意义被引量：4
- 2010年
- 目的检测丙酮酸脱氢酶激酶-I(pyruvate dehydrogenase kinase-I,PDK1)在人结肠癌组织和细胞中的表达。探讨抑制PDK1对结肠癌细胞活性的影响。方法应用RT-PCR、荧光定量PCR和免疫荧光法、Western blot检测结肠癌组织、癌旁组织以及4种人结肠癌细胞PDK1基因的表达情况。在PDK1抑制剂(dichloroacetate,DCA)的诱导下,通过MTT法观察结肠癌细胞活性。结果PDK1基因在结肠癌组织中表达较癌旁组织中高;在4种人结肠癌细胞中明显表达。抑制PDK1能抑制结肠癌细胞增殖活性,抑制效应随药物浓度而递增,其中90 mmol/L DCA的活性细胞率分别为(23.90±2.79)%、(5.90±1.31)%、(32.82±4.50)%和(29.72±3.03)%。结论PDK1基因在结肠癌组织和细胞中高表达,在癌旁组织中低表达,抑制PDK1明显抑制结肠癌细胞增殖活性,PDK1可望成为结肠癌有效治疗靶点。
- 童晶涛梁后杰陈建芳江恒谢赣丰刘平
- 关键词：结肠肿瘤
- 人BNIP3基因真核表达载体的构建及其对HT-29细胞化疗敏感性的影响
- 2013年
- 目的构建人BNIP3真核表达载体,观察BNIP3高表达对人结肠癌细胞HT-29化疗敏感性的影响。方法PCR法扩增BNIP3基因,酶切后插入质粒pEGFP-C3,构建重组真核表达载体pEGFP-C3/BNIP3。脂质体转染人结肠癌细胞HT-29,Western blot检测BNIP3蛋白表达。MTT法检测5-氟尿嘧啶(5-Fu)的化疗敏感性和细胞增殖,AnnexinV-APC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡。结果酶切电泳分析和DNA序列测定证实,重组质粒pEGFP-C3/BNIP3构建成功;转染重组质粒的HT-29细胞BNIP3蛋白明显高表达。与未转染组和转染空质粒pEGFP-C3组比较,转染pEGFP-C3/BNIP3组5-Fu的IC50值显著降低[(120.11±5.45)、(113.40±4.72)μg/mL vs(19.08±2.62)μg/mL,P<0.05],细胞凋亡率显著增加[(5.51±0.32)%、(7.19±0.47)%vs(41.72±1.48)%,P<0.05],细胞克隆形成显著减少[(52±6)、(49±5)vs(11±3),P<0.05],细胞增殖速度减慢。结论成功构建了人BNIP3真核表达载体,BNIP3高表达可增加HT-29细胞对5-Fu的化疗敏感性。
- 裴莉边志衡江恒陈克力陈建芳梁后杰
- 关键词：结肠肿瘤HT-29细胞化疗凋亡
- 慢性乙型肝炎肝硬化患者Th22细胞和IL-22的表达及意义被引量：20
- 2017年
- 目的探讨Th22细胞及相关细胞因子在慢性乙型肝炎肝硬化患者(CHB/LC)体内的表达及意义。方法选取38例CHB/LC为实验组,20例健康人为对照组。流式细胞术检测Th22细胞在实验组和对照组外周血中的比例,ELISA检测血清中IL-22的含量,荧光定量PCR检测PBMC和肝组织内各基因mRNA水平的表达。结果实验组Th22细胞数目显著高于健康人对照组(P<0.05),同时实验组血浆中IL-22的质量浓度和外周血中IL-22 mRNA的水平均显著高于对照组(P<0.05);CHB/LC患者肝脏组织内IL-22蛋白和α-SMA的表达量较健康人有明显增高(P<0.01;P<0.05),二者具有一定正相关,提示IL-22与肝纤维化和肝硬化密切相关。结论 Th22细胞参与了慢性乙型肝炎肝硬化的发生、发展,可能是预防和治疗肝硬化的重要靶标。
- 康瑜陈建芳曾甜
- 关键词：肝硬化慢性乙型肝炎白细胞介素22
- ERCC5基因启动子区单核苷酸位点多态性与晚期大肠癌奥沙利铂化疗敏感性的关系被引量：1
- 2009年
- 目的:研究切除修复交叉互补基因5(ERCC5)启动子区单核苷酸多态性与中国汉族晚期大肠癌奥沙利铂化疗敏感性的关系。方法:收集83例晚期大肠癌患者以奥沙利铂为主的化疗开始前的静脉血,提取基因组DNA,应用PCR-LDR方法检测ERCC5基因启动子区3个SNP位点-1415C>T(rs2094258)、-763A>G(rs2016073)及-413C>T(rs943245)的多态性,分析不同基因型与化疗敏感性的关系。结果:本研究人群中各多态性位点基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡,但在-413C>T位点,只观察到了CC基因型,未发现遗传多态。携带-763GG基因型的患者化疗有效率高于携带-763AA基因型患者(χ2=8.568,P=0.008)及-763AG基因型患者(χ2=4.475,P=0.046)。携带-763A等位基因的患者化疗失败风险是携带-763G等位基因患者的2.39倍(OR=2.390,95%CI:1.241～4.601;P=0.009)。-1415C>T多态性与化疗敏感性之间无显著相关性。结论:中国汉族晚期大肠癌患者ERCC5启动子区-763A>G多态性与奥沙利铂化疗敏感性相关。
- 陈建芳梁后杰王东童晶涛廖玲
- 关键词：多态性大肠癌奥沙利铂化疗敏感性
- 晚期大肠癌ERCC5基因启动子-763A>G多态性与铂类药物疗效相关性的研究
- 2010年
- 目的:探讨ERCC5基因启动子区单核苷酸多态性与中国汉族晚期大肠癌奥沙利铂疗效的相关性。方法:收集以奥沙利铂为主化疗的105例晚期大肠癌患者化疗开始前静脉血,提取基因组DNA,应用PCR-LDR方法检测ERCC5基因3个SNP位点-1415C>T(rs2094258)-7、63A>G(rs2016073)及-413C>T(rs943245)多态性,分析不同基因型与疾病控制率、无进展生存期(PFS)的相关性。结果:携带ERCC5-763GG-、763AG和-763AA基因型的患者化疗疾病控制率分别为86.7%、69.2%和52.6%,其中携带-763GG基因型的患者疾病控制率显著高于携带-763AA基因型的患者,P=0.028。携带-763AA基因型的患者中位PFS(36/95例,6个月)低于携带-763AG基因型(48/95例,8个月)及携带-763GG基因型(11/95例,10个月)的患者,差异有统计学意义,χ2=9.205,P=0.002。-1415C>T多态性与化疗疾病控制率和PFS之间均无显著相关性。-413C>T位点未发现遗传多态。结论:ERCC5启动子区-763A>G单核苷酸多态性与晚期大肠癌奥沙利铂临床疗效相关。
- 陈建芳李建军蒋金妍邹岚裴莉潘凤梁后杰
- 关键词：多态性
- ERCC5基因+25A>G多态性与晚期结直肠癌铂类药物疗效的相关性被引量：3
- 2011年
- 目的探讨切除修复交叉互补基因5(ERCC5)基因单核苷酸多态性与中国汉族晚期结直肠癌患者铂类药物疗效的相关性。方法应用PCR-LDR法检测以奥沙利铂为主化疗的105例晚期结直肠癌患者ERCC5基因位点+25A>G(rs751402)、+202C>T(rs2296147)及+372C>T(rs2296148)的多态性,分析不同基因型与疾病控制率、无进展生存期(PFS)的相关性。结果本研究人群中各多态性位点的基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡。携带+25A等位基因(AA/AG基因型)患者经以奥沙利铂为主化疗的疾病控制率为73.5%,显著高于携带+25GG基因型患者的51.4%(χ2=5.231,P=0.022)。携带+25GG基因型患者的中位PFS为5个月,低于携带+25AG基因型患者的8个月以及+25AA基因型患者的6个月(χ2=6.916,P=0.009)。+202C>T、+372C>T位点多态性与疾病控制率、中位PFS之间均无显著差异。结论晚期结直肠癌ERCC5基因+25A>G单核苷酸多态性与奥沙利铂化疗的临床疗效相关。
- 陈建芳梁后杰邹岚蒋金妍陈克力王东廖玲
- 关键词：结直肠癌化学治疗
- XPG基因多态性与晚期结直肠癌铂类药物疗效相关的研究
- 目的:探讨XPG基因单核苷酸多态性与中国汉族晚期结直肠癌奥沙利铂疗效的相关性.方法:收集以奥沙利铂为主化疗的105例晚期结直肠癌患者化疗开始前静脉血,提取基因组DNA,应用PCR-LDR方法检测XPG基因三个SNP位点-...
- 陈建芳李建军蒋金妍邹岚裴莉潘凤梁后杰
- RNA干扰BNIP3表达对LoVo细胞5-氟脲嘧啶化疗敏感性的影响被引量：3
- 2009年
- 目的:观察RNA干扰介导BNIP3基因表达抑制对结肠癌细胞5-氟脲嘧啶(5-Fu)化疗敏感性的影响。方法:构建靶向BNIP3基因的siRNA的质粒表达载体,转染结肠癌LoVo细胞并筛选稳定表达细胞,用RT-PCR和Western blotting检测BNIP3基因表达,MTT法检测5-Fu的化疗敏感性,流式细胞仪检测5-Fu诱导的细胞凋亡,细胞生长曲线检测细胞增殖。结果:酶切和测序证实靶向BNIP3基因的siRNA的质粒表达载体(pGCsi3.O-BNIP3)构建成功;重组质粒转染的LoVo细胞BNIP3表达被有效抑制,其mRNA水平和蛋白水平表达抑制率分别为73.1%和75.4%;与对照组比较,转染重组质粒pGCsi3.O-BNIP3的Lovo细胞5-Fu的IC_(50)值显著升高(108.4±4.69μg/ml vs.50.08±2.85μg/ml,P<0.05),5-Fu诱导的细胞凋亡率显著减少(8.35±0.46% v 19.75±2.37%,P<0.05),细胞增殖速度增加。结论:BNIP3表达下调导致结肠癌LOW细胞对5-Fu化疗敏感性降低; BNIP3可能成为逆转结肠癌耐药的潜在治疗靶点。
- 裴莉边志衡江恒陈克力陈建芳梁后杰
- 关键词：RNA干扰5-氟脲嘧啶化疗敏感性凋亡
- BNIP3表达对结肠癌细胞化疗敏感性的影响被引量：2
- 2009年
- 目的研究启动子甲基化对人结肠癌SW480细胞BNIP3基因的转录调控作用,以及通过去甲基化作用恢复BNIP3表达对细胞化疗敏感性的影响。方法用DNA甲基转移酶抑制剂5-氮-2′-脱氧胞苷(5-aza-dC)处理SW480细胞72h,应用甲基化特异性PCR(MSP)检测BNIP3基因启动子区CpG岛甲基化状态。用RT-PCR和Western blotting检测BNIP3的mRNA和蛋白表达,流式细胞术分析细胞凋亡,MTT法观察化疗药物氟尿嘧啶(5-FU)和奥沙利铂(L-OHP)对细胞的增殖抑制作用。结果BNIP3基因在SW480细胞中表达沉默,基因启动子区存在异常甲基化。1.0μmol/L的5-aza-dC可以使BNIP3基因启动子明显去甲基化、BNIP3表达和细胞凋亡增加,并可以与5-FU和L-OHP发挥协同作用,使药物对细胞的增殖抑制作用显著增强。5-aza-dC的上述作用在低氧培养条件下更加显著。结论启动子甲基化是导致结肠癌SW480细胞BNIP3基因表达沉默的重要原因。5-aza-dC可通过去甲基化作用恢复BNIP3基因的表达,增加细胞对5-FU和L-OHP的敏感性,且其作用在低氧条件下更加显著。
- 裴莉解方为陈克力江恒陈建芳梁后杰
- 关键词：结肠肿瘤DNA甲基化抗肿瘤联合化疗方案细胞低氧
