目的探讨CDl37信号是否通过核因子-KB（NF—KB）调控小鼠血管平滑肌细胞（VSMC）活化T细胞核因子cl（mclear factor of activated T cells cl，NFATcl）表达。方法采用组织块贴壁法对正常C57BL／6J小鼠的VSMC进行原代培养。以每孔2×105^个VSMC接种于6孔板中培养，待其贴壁后，饥饿24h，用含10％FBS＋肿瘤坏死因子（TNF-a，终浓度10ng／m1）的DMEM培养基分别培养细胞0、4、8、12．24、36、48h后，收获细胞用于CDl37mRNA和蛋白的检测，选取CDl37表达最多的时间点进行下一步实验。细胞实验分为3组，即对照组[含10％FBS、TNF-α（终浓度10ng／m1）、DMEM培养基共同干预]、刺激组[对照组干预基础上加CDl37mAb激动剂（终浓度10μg/m1）]和抑制组[对照组干预基础上加PDTC（终浓度30μmol／L），然后加CDl37mAb激动剂（终浓度10μ/m1）]。加入不同干预因素后继续培养，分别于90rain时收集核内外磷酸化（P）-NF—KBp65、核因子KB抑制蛋白（IKB-α），24h收集细胞总RNA和NFATcl蛋白备检。逆转录定量聚合酶链反应检测CDl37和NFATclmRNA表达水平。流式细胞术检测CDl37膜蛋白表达水平。蛋白印迹法检测IKB—α、NF．KBp65、p-NF—KBp65和NFATcl蛋白表达水平。结果（1）TNF-α诱导VSMC表达CDl37的结果：TNF．d刺激VSMC4、8、12、24、36、48h后，细胞CDl37mRNA表达均上调。RT—PCR结果示，以24h组CDl37mRNA升高最为显著，以未刺激（即0h）组的细胞为对照进行比较，差异有统计学意义（40．00±2．83比1，P〈0．05）。流式细胞术检测亦显示24h组CDl37膜蛋白升高最为显著。（2）各组VSMC中p-NF-KBp65蛋白表达水平的检测结果：刺激组VSMC胞浆中P-NF—KBp65蛋白表达水平高于对照组（8．34±0．28比1，P〈0．05），而IkB一仅蛋白表达水平低于对照组（1比2．70±0．28，P〈0．05）。抑制组VSMC胞浆中p-NF—KBp65蛋白表达水平低于刺激组（1．15±0．14比8．3
目的探讨微小RNA-548z(micro RNA-548z,mi R-548z)与CD147基因3'非翻译区单核苷酸多态性位点rs8259 T/A结合对急性心肌梗死(AMI)患者CD147表达的影响。方法以30例AMI患者及13例正常人作为研究对象,应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术检测CD147基因rs8259位点的基因型。外周血单个核细胞(PBMC)中mi R-548z及CD147 m RNA的表达采用荧光定量聚合酶链反应(q PCR)法检测,CD147蛋白表达应用Western Blot法。双荧光素酶报告基因验证mi R-548z与rs8259 T/A的相互作用。结果 AMI患者AA型和TT型PBMCs中mi R-548z的表达水平无差异,并与正常对照组无统计学意义(P>0.05);AMI患者AA型和TT型PBMCs中CD147 m RNA的表达水平无差异(P>0.05);而AMI患者AA型组CD147蛋白的表达水平明显高于TT型组;双荧光素酶报告基因结果显示,mimic mi R-548z能够抑制携带CD147基因rs8259位点T等位基因载体的荧光素酶活性,呈剂量依赖性。结论 mi R-548z能与AMI患者CD147基因3'UTR rs8259的T等位基因结合,从而调控CD147蛋白的表达。
