张玉国
- 作品数：7 被引量：20H指数：2
- 供职机构：中国农业大学生物学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划河北省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生农业科学更多>>
- 含第1内含子的猪生长激素cDNA基因的构建被引量：13
- 2000年
- 以 PCR方法扩增了猪生长激素 ( p GH)基因的第 1内含子 ,经测序表明 ,扩增的 p GH基因第 1内含子的序列与 Vize发表的序列存在 6个碱基的差异 ,同源性达 97.5%,说明 p GH基因第 1内含子具有多态性。此外 ,还发现此内含子存在有转录因子 ATF的结合位点。利用第 2外显子的 Hinf 位点 ,采用将 3个 DNA片段一步连接的方法 ,将扩增的第 1内含子插入到 p GHc DNA的正确位置上 ,从而构建出含第 1内含子的p GHc DNA。
- 仲飞刘维全孙丽翠张玉国刘朋朋齐顺章
- 关键词：猪生长激素基因CDNA病毒载体
- 稳定转染COL1 A1-EGFP基因的ROS17/2.8细胞株的建立被引量：2
- 2004年
- 目的构建稳定表达由COL1A1启动子驱动的增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)的ROS1 7/2 .8细胞株。方法用PCR方法从大鼠基因组DNA中扩增出长为 3.6Kb的COL1A1 (Ⅰ型胶原α1链基因 )启动子 ,并克隆到T载体 ;然后将COL1A1启动子分段酶切 ,获得不同长度的启动子片段 ;与报告基因EGFP相连接 ,构建成真核表达载体 ;随后转染ROS1 7/2 .8细胞系 ,再用G41 8筛选。结果得到了稳定转染COL1A1 EGFP基因的ROS1 7/2 .8细胞株。结论 这些细胞株的建立为研究微重力对COL1A1启动子活性及成骨相关基因表达的影响奠定基础。
- 戴钟铨丁柏李莹辉张玉国刘芃芃
- 关键词：失重模拟成骨细胞COL细胞株
- 回转对COL1A1-EGFP基因表达的影响被引量：2
- 2004年
- 研究微重力对COL1A1(Ⅰ型胶原α1链基因)启动子活性的影响,探讨微重力对成骨细胞相关基因表达影响的作用机制.将长为3.6 kb COL1A1启动子双酶切,获得不同长度的启动子片段,并与报告基因EGFP(增强型绿色荧光蛋白)连接,转染ROS17/2.8细胞,用G418筛选,得到稳定转染COL1A1-EGFP基因的ROS17/2.8细胞株.利用回转器模拟微重力效应,体外培养条件下,观察各细胞株报告基因的表达情况.结果显示细胞在模拟微重力下培养24,48 h后,报告基因EGFP和Ⅰ型胶原的表达升高,表明COL1A1启动子活性增强.说明短期模拟微重力条件下,成骨细胞能通过增强COL1A1启动子活性,代偿性提高Ⅰ型胶原的表达.
- 戴钟铨李莹辉丁柏张玉国刘维全刘芃芃
- 关键词：回转模拟微重力成骨细胞航天医学
- 鸡α-珠蛋白基因5′端MAR调控GFP基因在COS7细胞中表达的研究
- 2007年
- 目的研究鸡α-珠蛋白基因5′端核基质结合区(matrix association region,MAR)的基因表达调控作用。方法采用PCR方法扩增鸡α-珠蛋白基因5′端1 600 bp长度的MAR,并将该MAR连接在pCMV/GFP载体CMV启动子上游和GFP报告基因下游,构建含2个MAR的真核表达载体pGFP/2MAR。采用Lipofectimine脂质体介导法转染COS7细胞,用荧光显微镜和流式细胞术对荧光表达进行观察、定量。结果荧光显微镜观察pGFP/2MAR在转染48 h后荧光表达量明显高于pCMV/GFP的荧光表达量;流式细胞仪分析表明,在COS7细胞中pCMV/GFP和pGFP/2MAR的荧光表达量分别为17.9%和33.6%。结论该MAR确实能提高GFP在真核细胞中的表达量。
- 孙丽翠贺俊崎郑君芳王雅梅张松张玉国仲飞刘朋朋齐顺章
- 关键词：PCRGFP流式细胞仪
- 微卫星DNA多态性及其在马匹品种登记中的应用被引量：2
- 2001年
- 王振山张玉国
- 关键词：品种登记
- 人EPO高效表达细胞株的筛选与鉴定
- 2004年
- 用氨甲喋呤 (MTX)对稳定转染人促红细胞生成素 (EPO)基因的CHOˉ(DHFR缺陷型 )细胞株进行梯度加压 ,并使用α -MEM培养基进行培养 ,使DHFR基因在CHOˉ细胞中大量扩增 ,从而使EPO的表达量提高。经检测分析EPO的表达量 ,筛选出EPO高效表达的细胞株。结果表明 ,用MTX加压到 16× 10 - 7mol l和 6 4× 10 - 7mol l浓度时 ,收集的细胞培养液经 (NH4 ) 2 SO4 盐析、透析等处理得到EPO抽提液 ,经SDS -聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS -PAGE)检测出与标准品相对应的一条带 ,WesternBlot证明该带确为EPO。
- 孙丽翠刘芃芃刘维全张玉国齐顺章祁雅慧
- 关键词：EPOMTX
- 鸡α-珠蛋白基因5’端MAR调控GFP的表达被引量：1
- 2004年
- 目的 :观察不同细胞密度、不同转染时间MAR对GFP表达的影响。方法 :采用脂质体法将pcmv gfp与pgfp mar两个真核表达载体转染人的神经母细胞瘤细胞系 (SH -SY5Y)。结果 :在细胞密度为 3.0× 10 5cells ml,转染后 72hGFP表达量较其它条件下高 ,且在相同条件下 ,pgfp mar比pcmv gfp表达要高。结论 :初步证明该MAR能够提高GFP的表达。
- 闫豫东孙丽翠张静宜祁雅慧张玉国齐顺章
- 关键词：脂质体转染MARGFP动物细胞
