肖军
- 作品数：13 被引量：24H指数：3
- 供职机构：南方医科大学南方医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金军队医药卫生科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 哮喘发作与细胞骨架重建相关基因的差异表达被引量：1
- 2006年
- 目的:研究外周血嗜酸性粒细胞(EOS)在哮喘发作时与细胞骨架相关基因的差异表达.方法:应用SuperSMARTcDNAsynthesis技术从总RNA合成足量的双链cD-NA.经液相杂交消减两组共同序列,以抑制性PCR方式扩增差异表达序列.构建上调与下调cDNA文库,菌落PCR扩增差异片段,应用差异筛选技术进一步鉴定差异表达基因并测序,结果通过核酸数据库进行同源性比较.结果:构建了高效的上调与下调消减cDNA文库,经鉴定及同源性分析有6个与细胞骨架重建有关,包括上调基因slingshot磷酸酶(SSH-2L),蛋白磷酸酶1β亚型(PP1Cβ),无功能糖基转移酶样蛋白(DOCK-8),蛋白酪氨酸磷酸酶非受体型6(PTPN6)与非受体型12(PTPN12);下调基因,肌凝蛋白调节轻链结合蛋白(MIR).结论:这些骨架重建相关基因的差异表达可能参与了哮喘发作,进一步进行功能研究可能为哮喘治疗提供新的作用靶点.
- 蔡绍曦赵海金丁彦青李文军周斌肖军
- 关键词：抑制性消减杂交技术哮喘嗜酸细胞细胞支架蛋白质类
- 应用抑制性消减杂交技术研究哮喘发作外周血嗜酸细胞与细胞粘附及免疫调节相关基因的差异表达被引量：4
- 2006年
- 目的:研究哮喘发作时外周血嗜酸细胞(EOS)与细胞粘附及免疫调节相关基因的差异表达。方法:利用Percoll密度梯度离心分离哮喘患者发作时与治疗缓解外周血嗜酸性粒细胞,提取总RNA,并利用SuperSMARTcDNASynthesis技术合成cDNA第1链及优化扩增第2链。按照SSH常规方法构建cDNA消减文库,筛选阳性克隆并加以鉴定以得到带有差异表达的基因克隆。结果:成功构建具有高消减效率的哮喘发作患者外周血EOScDNA文库,筛选鉴定后确认15个差异表达基因,测序并同源性比对分别为夏科-莱登结晶蛋白(CLCprotein,galectin-10)、假定mRNA前剪接调节子female-lethal(2D)[putativepre-mRNAsplicingregulatorfemale-lethal(2D)]、水通道蛋白9(AQP-9)、IL-8、slingshot磷酸酶(SSH-2L)、蛋白磷酸酶1催化亚基β亚型(PP1CB)、RNA解旋酶HELZ、β2-微球蛋白(β2-MG)及一个线粒体相关基因。结论:这些基因的差异表达证明了EOS的趋化、迁移、粘附及免疫调节功能参与了哮喘病理生理调节,对这些途径的干预可能为未来哮喘靶向性治疗提供依据。
- 赵海金蔡绍曦邹飞李文军肖军佟万成
- 关键词：哮喘嗜酸细胞免疫调节抑制性消减杂交
- 人大肠癌转移相关基因片段的筛选和鉴定被引量：3
- 2004年
- 目的:初步筛选和鉴定大肠癌转移相关基因,阐述大肠癌转移的分子机制. 方法:利用抑制消减杂交技术(suppression subtractive hybridization,SSH),在一对来自同一亲本、转移能力不同的人大肠癌细胞株SW620和SW480间,已成功构建了人大肠癌转移促进基因和转移抑制基因的两个cDNA消减文库.从以上两个文库中随机挑取约200个菌液PCR片段,利用Differential screening(DS)方法筛选真正差异表达的cDNA片段,之后通过Northern blot对部分差异cDNA 片段的DS筛选结果进行验证.最后对筛选出的差异cDNA 片段进行测序和同源检索,分析其性质并初步探讨其在大肠癌中转移中的可能机制. 结果:约200个菌液PCR片段经过DS筛选后,共获得29 个真正差异表达cDNA片段,利用Northern blot对其中4 种cDNA片段的表达情况进行验证,结果与DS筛选一致. 然后对29个差异cDNA片段进行测序和同源性分析,得到25个差异表达基因,10个为已知基因,其中5个基因在高转移细胞株SW620中差异表达,可能有促进转移的作用, 包括热休克蛋白10(heat shock protein10,HSP10)、细胞色素氧化酶Ⅱ(cytochrome C oxidaseⅡ,COXⅡ)、有丝分裂调控蛋白dis3人同源物(mitotic control protein dis3 homolog, DIS3)、骨骼肌α1-肌动蛋白(skeletal muscle actin alphal, ACTA1)及血浆淀粉样蛋白A(serum amyloid A,SAA);另外5个基因的表达仅见于在SW480低转移细胞株,具有潜在的转移抑制作用,包括egl nine homolog 2(EGLN2)、真核翻译起始因子4A(eukaryotic translation initiation factor 4A,EIF4A)、人细胞色素氧化酶Ⅲ的类似物(similar to cytochrome c oxidase Ⅲ,COXⅢ)、谷胱甘肽S转移酶3(glutathione S-transferase mu 3,GSTM3)及线粒体DNA (mitochondrion DNA,mtDNA).10个已知基因基本上是一些与细胞生长分化、代谢合成、转录、凋亡及信号转导等相关的基因.除DIS3和SAA外,其余基因与大肠癌转移的关系在本研究中首次被报道.此外,还筛选到15�
- 梁莉丁彦青李欣杨玉芳肖军张进华赵培冉
- 关键词：癌转移人大肠癌CDNA片段5号染色体SW480
- 渐进启发式教学法在骨病实习教学中的应用被引量：2
- 2004年
- 目的根据实习生知识积累的逻辑规律,对实习教学内容遵从由浅入深的原则,通过循序渐进的启发式教学引导学生的学习,在学生对理论知识全面掌握的基础上培养其临床思维能力.方法通过对采用新旧教学法前后学生的问卷调查、出科考核成绩、毕业考试成绩等项目的统计学对比,评价新教学法的教学效果.结果采用新教学法后学生的理论考试成绩均获得了提高,病案分析能力提高尤其明显,学生普遍赞同新教学法.结论渐进启发式教学法能较好地适用于实习教学,满足引导学生医学理论知识系统化和临床思维培养的需要.
- 肖军金月陈建庭史占军刘杰
- 关键词：骨科教学实习教学教学查房问卷调查教学评估
- 应用抑制消减杂交技术克隆人大肠癌转移相关新基因
- 2004年
- 目的 克隆新的大肠癌转移相关基因,为进一步阐述大肠癌转移的分子机制提供线索。方法 利用抑制消减杂交技术,以1对来自同一亲本、转移能力不同的大肠癌细胞株SW620和SW480为研究对象,构建2种大肠癌转移促进基因和转移抑制基因的cDNA消减文库。随机挑取文库克隆进行差异筛选,对所得的差异片段进行测序和同源性分析,利用Northern Blot对新基因的表达情况进行验证。结果 两种消减文库分别含有235和232个白色克隆,90％以上的白色克隆含有插入片段。随机挑取约200个阳性克隆进行差异筛选。共获得29个差异片段。测序及同源分析发现15个为未知基因,GenBank登陆号为CD485499-CD485513。其中与5号染色体序列同源的基因有6个。结论 抑制消减杂交技术是筛选、克隆大肠癌转移相关新基因的有效手段;5号染色体上可能存在多个与大肠癌转移相关的新基因位点;筛选到的新基因片段为进一步克隆其全长、研究基因功能提供了实验基础。
- 梁莉丁彦青李欣杨玉芳肖军张进华赵培冉
- 关键词：基因大肠癌肿瘤转移抑制消减杂交
- 抑制性消减杂交技术在研究热适应机制中的应用被引量：3
- 2003年
- 目的探索热适应动物体内在常温静息状态下是否存在与热适应相关的基因差异表达,评估从基因差异表达角度研究热适应机理的可行性。方法在大鼠肝组织标本上提取mRNA,反转录成双链cDNA,应用抑制性消减杂交技术(suppression subtractive hybridization,SSH)比较热适应组与常温对照组基因的差异,构建差异表达基因消减文库。采用PCR-Select Differential Screening技术鉴定是否存在差异表达的基因。结果初期实验证实6个cDNA片段为差异表达。结论热适应大鼠在常温静息状态下肝脏组织中存在热适应相关基因的差异表达,推测可能与大鼠保持热适应能力有关。提示通过分离热适应相关的差异表达基因研究热适应机制是一种可行的思路。
- 肖军邹飞蔡绍曦
- 关键词：抑制性消减杂交技术热适应基因表达文库动物模型
- 热适应差异表达基因消减文库的筛选
- 2005年
- 目的:研究热适应大鼠的肝细胞基因差异表达,探讨热适应的分子机制。方法:构建热适应差异表 达基因消减文库,扩增并克隆T／A载体形成重组质粒,转化感受态细胞后分离获得目的基因,采用PCR-select dif ferential screening技术筛选差异表达基因,测序后所得序列与GenBank中的已知序列进行比对,确定其可能的功能。 结果:确认8个上调表达基因,与GenBank中已知序列进行比较,证实其中有3种已知基因,5个新序列表达标签 (EST)。结论:相关基因表达水平上调可能参与生物体热适应的信号转导通路,而p53可能是热适应分子环路的又一 节点。
- 邹飞肖军蔡绍曦金月
- 关键词：热适应基因文库
- 大鼠肝细胞热适应差异表达基因消减文库的构建与鉴定被引量：7
- 2004年
- 目的 :构建大鼠肝细胞热适应差异表达基因消减文库。方法 :实验采用热适应大鼠模型、常温对照。提取肝组织mRNA ,反转录cDNA并酶切、接头连接后分别以其中一组cDNA片段为tester,另一组为driver进行抑制性消减杂交 (SSH)构建消减文库。PCR扩增文库和未消减对照样品中的G3PDH基因以对比评估文库特异性。初步分离、筛选以评估文库的可靠性。结果 :PCR证实文库中G3PDH丰度大幅低于对照组 ,说明文库特异性较高。从文库中分离获得 30 0个目的基因片段 ,其中 2 7个经鉴定为差异表达基因 ,证实文库高效可靠。结论 :通过构建优质的热适应差异表达基因消减文库 。
- 肖军邹飞蔡绍曦金玥
- 关键词：热适应基因抑制性消减杂交
- 应用抑制性消减杂交技术研究大鼠肝脏热应激过程中基因的差异表达
- 2003年
- 目的 :应用抑制性消减杂交技术 ,分离热应激过程中出现的差异表达基因 ,筛选与热应激相关的功能基因片断 ,探索热应激的分子机理。方法 :实验分两组 :热应激组和常温对照组 ,分别提取肝组织mRNA后反转录cDNA。内切酶酶切、接头连接后 ,以热应激组cDNA为tester,对照组cDNA为driver进行SSH。产物克隆T/A载体构建重组质粒转化感受态细胞后进行分离筛选。结果 :mRNA质优量足 ,反转录cDNA并成功酶切为 5 0 0bp左右片断。连接效率满意。高效杂交后成功构建消减文库 ,并初步从中分离获得 180个片段。结论 :应用SSH技术构建热应激差异表达基因消减文库为筛选热应激相关基因奠定了基础 。
- 肖军邹飞蔡绍曦
- 关键词：热应激基因抑制性消减杂交肝脏
- 一种高通量筛选结直肠癌转移相关cDNA文库的方
- 2004年
- 梁莉丁彦青李欣杨玉芳肖军张进华赵培冉
- 关键词：癌转移结直肠癌高通量筛选NORTHERN印迹抑制消减杂交技术CDNA文库
