程英
- 作品数：10 被引量：25H指数：3
- 供职机构：第三军医大学西南医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 川西獐牙菜醇提物对内毒素所致大鼠胆汁淤积性肝损伤的保护作用被引量：11
- 2014年
- 目的观察川西獐牙菜醇提物对内毒素所致大鼠胆汁淤积性肝损伤的保护作用,以及对肝细胞胆汁酸转运蛋白胆盐输出泵(bile salt export pump,BSEP)和核受体(farnesoid X-receptor,FXR)的影响。方法 20只SD雄性大鼠采用随机分为4组(每组5只):生理盐水组、川西獐牙菜醇提物组、LPS+生理盐水组、LPS+川西獐牙菜醇提物组,所有大鼠均于处理后16 h取材。统计分析各组实验大鼠肝功能指标(ALT,AST、TBIL)、胆汁流速;采用Western blot及RT-PCR观察生理盐水组、川西獐牙菜醇提物组大鼠肝组织中BSEP和FXR在转录以及蛋白水平的表达。结果 LPS+生理盐水组与生理盐水组相比肝损伤指标ALT、AST、TBIL明显升高(P<0.05),胆汁流速明显下降(P<0.05);而LPS+川西獐牙菜醇提物组与LPS+生理盐水组相比ALT、AST、TBIL明显下降(P<0.05),胆汁流速明显升高(P<0.05)。川西獐牙菜醇提物组与生理盐水组相比BSEP蛋白水平的表达明显增高(P<0.05);与BSEP调控密切相关的核受体FXR蛋白和mRNA表达变化均不明显。LPS+生理盐水组与生理盐水组相比相比BSEP蛋白水平的表达明显降低(P<0.05);而LPS+川西獐牙菜醇提物组与LPS+生理盐水组相比BSEP蛋白水平的表达明显增高(P<0.05);但各组之间BSEP mRNA变化均不明显。结论川西獐牙菜醇提物能明显减轻内毒素诱导大鼠胆汁淤积性肝损伤,这可能与上调肝细胞胆酸转运蛋白BSEP的表达有关,而且BSEP表达的上调可能是通过转录后水平调节的。
- 高宇柴进李绍雪刘畅程英刘潇聪连伟陈文生
- 关键词：胆汁淤积肝损伤BSEP
- Radixin定点突变过表达对HepG2细胞膜转运蛋白Bsep的影响被引量：2
- 2014年
- 目的构建pcDNA3.1-RDX定点突变真核过表达质粒,研究其在胆汁淤积时对HepG2细胞膜转运蛋白胆盐输出泵(bile salt export pump,Bsep)定位表达的影响。方法从含有RDX野生型质粒中,利用PCR方法钓取RDX野生型基因片段并以野生型为基础进行定点突变,PCR扩增后转入pcDNA3.1载体,其产物转化DH-5α感受态细胞。对长出的单克隆进行菌落PCR鉴定,再对PCR鉴定阳性的克隆进行测序和比对分析,比对正确即为构建成功的目的质粒。将目的质粒转染HepG2细胞,经G418筛选构建稳转细胞株。提取各株细胞的总蛋白,检测磷酸化RDX是否影响HepG2细胞膜上转运蛋白Bsep的表达。结果 PCR和测序结果均证实pcDNA3.1-RDX WT、pcDNA3.1-RDX T564D、pcDNA3.1-RDX T564A过表达载体构建成功。蛋白免疫印迹表明,与转染pcDNA-3.1-RDX-WT的HepG2相比,转染pcDNA-3.1-T564D的HepG2的Bsep膜蛋白表达量显著增加(P<0.05),而转染pcDNA-3.1-T564A的HepG2的Bsep膜蛋白表达量有所下降(P>0.05)。结论成功构建了pcDNA3.1-RDX WT、pcDNA3.1-RDX T564D、pcDNA3.1-RDX T564A过表达载体,并证实RDX的磷酸化能增强HepG2细胞膜上Bsep的表达。
- 封欣婵柴进程英陈文生
- 关键词：PCDNA3
- HepG2细胞中TNFα通过NF-κB信号通路下调GSTA1/GSTA4表达（英文）
- 2016年
- 谷胱甘肽巯基转移酶α1/α4(GSTA1/A4)是体内重要的解毒酶,可降低多种内、外源性毒性化合物的毒性.然而,胆汁淤积病人肝细胞内G STA1/A4的表达是下调的,下调机制尚不清楚.本研究通过肿瘤坏死因子α(TNFα)处理人肝癌细胞Hep G2细胞,利用实时荧光定量聚合酶链式反应(q PCR)和蛋白质印迹(Western blot)检测GSTA1/A4、核因子κB(NF-κB)和核因子E2相关因子2(Nrf2)的表达.发现TNFα在m RNA水平和蛋白质水平均抑制GSTA1/A4表达,且呈剂量与时间依赖关系.干扰NF-κB信号通路,可减弱T NFα对G STA1/A4表达的抑制作用.以上结果表明,在Hep G2细胞中,TNFα可通过激活N F-κB信号通路抑制G STA1/A4表达.
- 杨龙熊志勇张樑君封欣禅陈琨李彦程英龙庆林肖天利陈磊闫文慧李灵欣柴进陈文生
- 关键词：TNFΑNF-ΚB胆汁淤积
- 川西獐牙菜醇提物对大鼠胆汁酸转运蛋白Mrp4、转录因子Nrf2表达的影响被引量：9
- 2015年
- 目的观察川西獐牙菜醇提物对肝细胞胆汁酸转运蛋白Mrp4(multidrug resistanceassociated protein 4,Mrp4)、转录因子Nrf2的调控作用。方法将14只SD大鼠分为2组:正常对照组、川西獐牙菜醇提物组,每组7只。分别用生理盐水、川西獐牙菜醇提物处理7 d后,收集组织标本,免疫组化检测Mrp3、Mrp4在肝脏的表达变化,Western blot及RT-PCR检测胆汁酸转运蛋白Mrp3、Mrp4和转录因子Nrf2、核受体Lrh-1在蛋白及mRNA水平的变化。结果在mRNA水平,RT-q PCR结果显示川西獐牙菜醇提物组肝脏胆汁酸转运蛋白Mrp4表达较正常对照组增加2.1倍,同时,Mrp3表达增加1.7,转录因子Nrf2表达增高1.8倍,核受体Lrh-1表达增高1.4倍;在蛋白水平,Western blot结果表明川西獐牙菜醇提物组肝脏胆汁酸转运蛋白Mrp4表达较正常对照组组增加2.5倍,同时,Mrp3表达增高3.0倍,转录因子Nrf2表达增高2.3倍,核受体Lrh-1表达增高1.3倍,而免疫荧光结果则进一步证实了RT-q PCR与Western blot的结果,显示川西獐牙菜醇提物组Mrp3、Mrp4的表达较正常对照组组明显增强。结论川西獐牙菜醇提物能够刺激肝细胞表面胆汁酸转运蛋白Mrp4表达增高,这种调控作用可能与Nrf2相关。
- 杜晓煌柴进封欣婵张樑君程英陈文生方勇飞
- 关键词：胆汁淤积
- 川西獐牙菜单体齐墩果酸上调阻塞性胆汁淤积大鼠肝脏核受体Lrh-1和胆酸转运蛋白Mrp3的表达被引量：2
- 2015年
- 目的建立胆道结扎的大鼠模型,观察川西獐牙菜活性单体齐墩果酸(oleanolic acid,OA)对胆道结扎所致的肝外胆汁淤积的保护作用,及其对多药耐药相关蛋白3(multidrug resistanceassociated protein 3,Mrp3)、核受体Lrh-1的调控作用。方法采用随机数字表法将15只SD大鼠分为3组:假结扎组(Sham组)、胆道结扎组(BDL组)、齐墩果酸组(BDL+OA组),每组5只。分别用生理盐水、齐墩果酸处理7 d后,收集组织标本,HE染色检测肝脏损伤程度,Western blot及RT-PCR检测Mrp3和Lrh-1在蛋白及mRNA水平的变化。结果 HE染色结果显示BDL+OA组肝脏损伤程度较胆道结扎组明显减轻;Western blot结果表明BDL+OA组Mrp3表达较Sham组增加2.4倍,Lrh-1表达增加1.8倍;RT-PCR结果显示BDL+OA组Mrp3表达较Sham组增加3.2倍,Lrh-1表达升高2.2倍。结论川西獐牙菜单体齐墩果酸对胆道结扎所致大鼠胆汁淤积性肝损伤具有保护作用,而这种保护作用可能与Lrh-1、Mrp3有关。
- 张樑君封欣婵李绍雪高宇程英陈文生柴进
- 关键词：胆汁淤积齐墩果酸
- 齐墩果酸对阻塞性胆汁淤积大鼠胆酸转运蛋白OSTα/β和BSEP的调控作用被引量：2
- 2016年
- 目的建立胆道结扎大鼠模型,观察胆道结扎所致肝外胆汁淤积时齐墩果酸对肝细胞表面胆酸转运蛋白OSTα/β和BSEP的调控作用。方法随机将45只SD大鼠分为9组,每组5只。假结扎组(Sham组)、胆道结扎组(BDL组)和齐墩果酸组(BDL+OA组)分别用生理盐水、齐墩果酸处理3 d、7 d、14 d后收集组织样本,提取肝脏RNA和总蛋白,分别在mRNA水平和蛋白水平检测OSTα/β和BSEP的表达变化。结果大鼠胆道结扎后,齐墩果酸干预3 d,胆酸转运蛋白OSTβ在mRNA和蛋白水平均增高,随着齐墩果酸干预时间的延长,在第7天时,胆酸转运蛋白BSEP的表达亦出现增高。第14天时,OSTα、OSTβ、BSEP表达均增高。结论齐墩果酸能够上调阻塞性胆汁淤积胆酸转运蛋白OSTα、OSTβ、BSEP的表达。
- 柴进向国春封欣婵张樑君程英陈文生
- 关键词：胆汁淤积齐墩果酸
- Ezrin上调HepG2细胞膜转运蛋白MRP2的表达
- 2015年
- 目的建立Ezrin基因表达缺失的Hep G2细胞株,并研究其在胆汁淤积时对Hep G2细胞胆汁酸转运蛋白多药耐药相关蛋白2(multidrug resistance-associated protein 2,MRP2)的影响。方法不同位点干扰的Ezrin-shRNA质粒转染Hep G2细胞,筛选Ezrin基因表达缺失的Hep G2细胞。分别提取细胞总蛋白和膜蛋白,检测Ezrin基因表达缺失是否影响Hep G2细胞胆汁酸转运蛋白MRP2的表达。结果 RT-q PCR结果证实,Ezrin-shRNA#3质粒转染Hep G2细胞后成功抑制了Ezrin基因表达,抑制率为70%。蛋白免疫印迹表明,Ezrin基因表达缺失后,Hep G2细胞胆汁酸转运蛋白MRP2表达增高,但与对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。蛋白免疫共沉淀检测生物素化MRP2膜蛋白表明,Ezrin基因表达缺失后,无论是胞浆中还是细胞膜上,MRP2膜蛋白均表达增高(P<0.05)。结论 Ezrin基因表达缺失后能够上调Hep G2细胞中MRP2膜蛋白,使其表达增高。
- 柴进封欣婵张樑君程英陈兰芳胡珍陈文生
- 关键词：胆汁淤积多药耐药相关蛋白2
- 转录因子Sp1对胆酸转运蛋白MRP3、MRP4表达的影响被引量：3
- 2016年
- 目的研究胆汁淤积时Sp1对MRP3、MRP4表达的影响,以完善MRP3、MRP4表达调控机制。方法构建Sp1过表达质粒及Sp1 siRNA片段,分别转染HepG2细胞,筛选稳转细胞株。提取细胞总RNA和总蛋白,RT-qPCR检测MRP3、MRP4 mRNA水平的变化,Western blot检测MRP3、MRP4蛋白水平的变化。结果成功构建了Sp1-OE-HepG2和Sp1siRNA-HepG2稳转细胞株。在Sp1-OE-HepG2细胞中,MRP3、MRP4 mRNA和蛋白水平表达均增高,其中MRP3 mRNA水平表达增高2.8倍,MRP3蛋白水平表达增高3.0倍;MRP4 mRNA和蛋白水平分别增高3.2倍和2.5倍;而在Sp1 siRNA-HepG2细胞中,MRP3、MRP4则表达下降,其中MRP3 mRNA表达降低52%,MRP4 mRNA表达降低58%,MRP3蛋白表达降低57%,MRP4蛋白表达降低60%。结论转录因子Sp1能够调控胆酸转运蛋白MRP3、MRP4的表达。
- 陈琨柴进封欣婵程英张樑君胡珍陈兰芳陈文生何勇虹
- 关键词：胆汁淤积转录因子SP1MRP3
- 藏茵陈上调大鼠肝细胞膜转运蛋白多耐药相关蛋白3和核受体孕烷X受体表达被引量：4
- 2015年
- 目的:观察藏茵陈对正常大鼠多耐药相关蛋白3(MRP3)和核受体孕烷X受体(PXR)表达的影响。方法:将10只SD大鼠随机分为藏茵陈组5只,藏茵陈100 mg·kg-1·d-1灌胃7 d;对照组5只,同体积0.9%氯化钠注射液灌胃。7 d后麻醉处死2组大鼠,取肝脏组织行HE染色检测肝脏形态变化,分别提取肝脏组织RNA、膜蛋白及核蛋白,采用实时聚合酶链式反应和蛋白免疫印迹检测膜转运蛋白MRP3和核受体PXR在转录与蛋白水平的表达变化。结果:给予藏茵陈后,与0.9%氯化钠注射液比较,未影响肝脏组织的形态结构;藏茵陈可显著刺激正常大鼠肝细胞膜转运蛋白MRP3表达(P<0.01);也可明显上调核受体PXR水平增高(P<0.01)。结论:藏茵陈刺激大鼠肝细胞膜蛋白MRP3的表达上调可能与核受体PXR途径相关。
- 李绍雪柴进高宇刘畅程英连伟刘潇聪陈文生
- 关键词：肝疾病藏茵陈
- 一种用獐牙菜苦苷作为治疗胆汁淤积的药物的应用
- 本发明公开了一种用獐牙菜苦苷作为治疗胆汁淤积的药物的应用。本发明一种用獐牙菜苦苷作为治疗胆汁淤积药物的应用，獐牙菜苦苷能显著降低血清各组胆汁酸成分，从而显著降低由胆汁淤积引起的肝损伤、肝脏坏死，显著抑制由胆汁淤积引起的血...
- 柴进封欣蝉张樑君程英杜晓煌阳勇罗维早陈文生
- 文献传递
