邬旭龙
- 作品数：40 被引量：194H指数：8
- 供职机构：四川农业大学更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划长江学者和创新团队发展计划国家现代农业产业技术体系建设项目更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>
- 副猪嗜血杆菌及巴氏杆菌双重荧光定量PCR检测方法的建立被引量：10
- 2019年
- 为建立副猪嗜血杆菌(Hps)、多杀性巴氏杆菌(Pm)的双重荧光定量PCR检测方法,本研究基于Hps的Omp P2基因,Pm的PlpE基因设计两对特异性引物及探针,通过对反应条件优化,建立了一种同时检测Hps及Pm的双重荧光定量PCR方法。该方法能够特异性地检测Hps和Pm,其对重组质粒标准品的最低检测浓度分别为5.60×10^2拷贝/μL、7.58×10^2拷贝/μL。双重与单一荧光定量PCR最低检测限相同,且均是常规PCR的100倍。重复性试验结果显示,该方法的组内和组间变异系数均小于2.5%。临床应用结果显示:该方法对阳性样品的检出率为53.57%,明显优于常规PCR和细菌分离鉴定。该方法能够用于两种疾病的同时检测和快速排查疾病。为两种疾病的防治提供有效检测工具。
- 姜睿姣周丽军邬旭龙张鹏飞罗梓丹肖璐王印姚学萍杨泽晓罗燕
- 关键词：副猪嗜血杆菌巴氏杆菌
- 基于TEM-PCR和基因芯片检测猪病毒性疾病的方法
- 本发明公开了一种基于TEM-PCR和基因芯片检测猪病毒性疾病的方法，依据靶序列富集多重PCR，采用4对特异性的套式PCR引物和探针，并在各内引物的5’端分别加上能被一对通用引物识别的标签序列。本发明克服了传统PCR方法的...
- 王印彭善珍杨泽晓姚学萍邬旭龙张鹏飞冷伊依肖璐任梅渗曾相杰罗忠永胡凌林星宇张博刘亚东蒙正群李桂黎王波
- 文献传递
- 一种检测猪繁殖障碍病毒的多重GeXP-PCR方法
- 本发明公开了一种检测猪繁殖障碍病毒的多重GeXP‑PCR方法，采用含7种猪繁殖障碍病毒靶基因的PRV,ASFV,PPV，PRRSV，CSFV,PCV2,JEV嵌合引物和通用引物以适当配比参加PCR反应，PRV,ASFV,...
- 王印胡凌杨泽晓姚学萍林星宇邬旭龙李桂黎任梅渗肖璐张鹏飞曾相杰冷伊依
- 文献传递
- 四川部分地区禽源空肠弯曲菌MLST分型及遗传进化分析被引量：4
- 2019年
- 目的为了解四川部分地区分离到的48株禽源空肠弯曲菌间的分子特征,以对来源不同的空肠弯曲菌进行分子分型及遗传进化分析。方法本研究参照MLST数据库,选取了空肠弯曲菌MLST分型7个管家基因aspA,glnA,glyA,gltA,tkt,pgm和uncA作为目的基因分别扩增及测序,并将所得序列经比对后进行遗传进化分析。结果 48株分离株中共含24种不同的序列型分属于9种不同的克隆系及11种独特型,其中22株分离株含有新序列型,占分离株的45.83%(22/48);9种不同的克隆系中以CC-21、CC-353、CC-464克隆系所含菌株相对较多,而克隆系CC-45、CC-48最少,均为1株分离株;11种独特型共存于21株分离株中,其中以ST-8675序列型最多,为8株。遗传进化树显示,属同一克隆系的不同型别间的分离株亲缘关系较近,如同属于CC-21克隆系的ST-298与ST-760型别分离株处于同一小分支、亲缘关系较近,但不同克隆系的分离株间遗传进化关系较远,鹌鹑源分离株(V13-20)单独处于一大分支与其余禽源分离株间的亲缘关系最远。总体而言,不同地区、宿主来源的分离株呈现遗传多样性。结论本研究中分离株间具有基因多样性,MLST分型为了解该地区空肠弯曲菌的遗传特性和分布特点提供了参考依据。
- 姚学萍张博王寒邬旭龙周丽军曹随忠王印王印杨泽晓
- 关键词：空肠弯曲菌管家基因遗传进化
- 猪源支气管败血波氏杆菌的分离鉴定及其皮肤坏死素(DNT)粗提液的小鼠皮肤毒性试验
- 为更好地进行波氏菌病的防治,利用分离培养、生化实验、PCR鉴定和同源性分析对采自四川某规模化猪场有明显萎缩性鼻炎症状的猪鼻腔拭子进行支气管败血波氏杆菌的分离鉴定,参考经典的皮肤坏死素(DNT)粗提技术,将分离株DNT粗提...
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- 关键词：支气管败血波氏杆菌皮肤毒性
- 一起猪瘟病毒和副猪嗜血杆菌混合感染病例的诊断被引量：3
- 2013年
- 四川遂宁某养猪场送检病猪2只,通过临床解剖、细菌分离鉴定、PCR、RT-PCR等方法进行实验室诊断,综合判定为猪瘟和副猪嗜血杆菌混合感染,并从发病猪体内成功分离到一株副猪嗜血杆菌。采用K-b法检测副猪嗜血杆菌分离菌株对28种常用抗菌药的敏感性,结果显示,该菌株耐药性比较严重,仅对复达欣、头孢肤肟、左旋氧氟沙星敏感。
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- 关键词：猪瘟病毒副猪嗜血杆菌药物敏感试验
- 一株鹅源多杀性巴氏杆菌强毒株的分离鉴定及其血清型鉴定相关基因的克隆被引量：5
- 2016年
- 为探索某鹅场鹅巴氏杆菌病疫情发生的原因,采集初诊为鹅巴氏杆菌感染病例的肝脏、心脏等样品进行细菌分离纯化,经过染色镜检、培养特性、生化试验、种与血清型PCR鉴定、致病性试验和药敏试验等进行鉴定,并根据Gen Bank中多杀性巴氏杆菌血清型相关基因设计引物进行其血清型相关基因的克隆分析。结果显示,分离到1株荚膜A型鹅源多杀性巴氏杆菌,属于多杀亚种,血清型Ⅰ型,具有较强致病性,对实验小鼠最小致死量为5 cfu。该分离菌株具有多重耐药性,仅对头孢三嗪、头孢噻吩、头孢他啶、头孢唑肟和氟苯尼考5种药物敏感。成功克隆的该分离菌株荚膜合成相关基因hya D-hya C的开放阅读框4 155 bp,与已发布基因序列同源性高达99%;血清型Ⅰ型PCR的扩增基因片段303 bp,与巴氏杆菌C48-1株扩增基因片段序列完全相同。综上,该株血清型Ⅰ型荚膜A型的鹅源多杀性巴氏杆菌强毒株,是鹅场疫情发生的病原,克隆的荚膜合成相关基因和菌体血清型特异性基因遗传相对稳定。
- 杨泽晓刘常钰王印姚学萍邬旭龙王波李桂黎蒙正群刘亚东
- 关键词：多杀性巴氏杆菌血清型PCR鉴定
- 2016-2017年四川地区规模化猪场常见病原流行病学调查被引量：2
- 2020年
- 【目的】为了解四川省地区规模化猪场病原流行情况。【方法】本研究采用细菌分离鉴定、RT-PCR和PCR方法,对采集的283份样品(组织、精液、死胎等)做相应病原检测。【结果】106份病死猪病变组织中CSFV、PRRSV、PRRSV NADC30-Like、PCV2、PRV、APP、Pm、SS2病原阳性率分别为7.55%(8/106)、40.57%(43/106)^20.75%(22/106)^34.91%(37/106)J6.04%(17/106),9.43%(10/106),19.81%(21/106)、4.72%(5/106),其中病原混合感染率为60.49%(49/81)o PRRSV或PCV2病原一年四季协可感染,并以混合其他病原感染形式最为常见,细菌感染在夏李最为常见。68份公猪精液中CSFV、PRRSV、PCV2、PRV病原阳性率分别为10.29%(7/68)、30.88%(21/68)、20.59%(14/68)、20.59%(14/68),以单一病原感染为主,感染率为52.63%(20/38)o 63份流产胎、死胎病料中CSFV、PRRSV、PCV2、PRV病原阳性率分别为6.35%(4/63),46.03%(29/63),38.10%(24/63)、30.16%(19/63)。混合感染率为74.50%(38/51),以PRRSV病原混合其他病原感染形式最为常见,且一年四季均可感染。46份腹泻猪肠黏膜和粪便中PEDV、PoRV病原阳性率分别为56.52%(26/46),26.09%(12/46),春季、秋季和冬李最易感染。【结论】四川地区规模化猪场中PRRSV、PCV2、PRV和PEDV仍是防控的重点,同时多种病原混合感染和新变异株PRRSV NADC30-Like出现也是猪群疫病难预防、难控制的主要原因之一。
- 江地科项明源王印姚学萍杨泽晓张鹏飞廖倡宇邬旭龙
- 关键词：PCRRT-PCR
- 非洲猪瘟病毒微滴数字PCR(ddPCR)方法的建立及应用被引量：40
- 2017年
- 【目的】非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)能导致猪群高死亡率,从而造成严重的经济损失。因此,建立严密、高效的防控系统,包括灵敏、准确的诊断方法以及高效的预报预警机制等,以避免ASF传入我国。本文旨在建立一种新型而高灵敏度的ASFV微滴数字PCR(Droplet digital PCR,dd PCR)检测方法。【方法】针对ASFV K205R基因设计一对特异性引物和Taq Man探针,通过反应条件优化,建立了ASFV实时荧光定量PCR(q PCR)和dd PCR检测方法;并对两种方法的线性关系、灵敏性、特异性和重复性进行了评估,利用建立的ASFV检测方法对163份国内和进境的组织样本及血清样本进行检测,血清样本经商品化ASFV ELISA试剂盒复检,评估不同方法检测结果的符合率。【结果】建立的ASFV q PCR和dd PCR检测方法线性关系较好(R2≥0.998),dd PCR的最低检测限度可达到0.36拷贝,在20μL反应体系中约为10拷贝/反应,检测灵敏度是q PCR的10倍。ASFV dd PCR检测方法具有很高的特异性和重复性,不与其他猪常见病毒发生交叉反应。【结论】该方法灵敏度高、特异性强,可作为一种有效的分子生物学方法来诊断ASFV,为防止该病传入我国以及ASFV的实时监测提供新的技术储备,同时促进dd PCR技术在我国的发展和应用。
- 邬旭龙肖璐宋勇林华陈世界杨苗安微姚学萍杨泽晓王印
- 关键词：实时荧光定量PCR非洲猪瘟病毒
- 一种快速检测非洲猪瘟病毒环介导等温扩增的方法
- 本发明公开了一种快速检测非洲猪瘟病毒环介导等温扩增的方法，包括LAMP最佳反应体系为25μL：1μL8UBstDNA聚合酶，2.5μL10×ThermoPolbuffer缓冲液，6μL2.5mMeachdNTPs，4μL...
- 王印邬旭龙杨泽晓姚学萍张鹏飞姜睿姣肖璐张博刘亚东冷伊依胡凌林星宇曾相杰罗忠永任梅渗蒙正群
- 文献传递
