谢敏
- 作品数：8 被引量：6H指数：1
- 供职机构：大连大学附属中山医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金辽宁省自然科学基金大连市科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 缺乏葡萄糖和谷氨酰胺对黑色素瘤A375细胞增殖与凋亡的影响
- 2016年
- 目的:探讨体外培养条件下,缺乏葡萄糖(No-Glu)或谷氨酰胺(No-Gln)对黑色素瘤细胞生长和凋亡的影响。方法:分别利用MTT、流式细胞术、化学发光、Western blotting以及免疫荧光染色等方法检测No-Glu和No-Gln对人恶性黑色素瘤A375细胞初级纤毛形成、增殖、ATP含量、细胞周期以及细胞凋亡等多方面的影响。结果:在No-Glu或No-Gln培养液中培养,A375细胞的细胞增殖率显著低于对照组(正常培养液)[(21.0±1.9)%或(46.2±9.8)%vs 100%,P<0.01或P<0.05]。No-Gln培养液使A375细胞纤毛形成阳性细胞率显著高于对照组[(16.8±2.3)%vs(6.2±1.0)%,P<0.01],G1期细胞减少(14.4±6.7)%(P<0.05)、S期细胞增加(75.0±1.9)%(P<0.05)。No-Glu培养液对A375细胞纤毛形成与G1和S期细胞比例均无显著影响。此外,No-Gln使A375细胞内ATP含量下调了(64.5±4.9)%(P<0.01),而No-Glu仅使ATP含量下降了(11.1±2.1)%(P>0.05)。No-Glu使A375细胞的凋亡率显著高于对照组[(26.1±1.5)%vs(6.1±7.1)%,P<0.01],并上调促凋亡蛋白Noxa、降低抗凋亡蛋白Mcl-1的表达水平。No-Gln对细胞凋亡率、Noxa和Mcl-1蛋白表达无明显影响。结论:No-Glu或No-Gln均可抑制A375细胞增殖,但No-Gln导致S期细胞周期阻滞、抑制ATP合成的作用更明显,而No-Glu诱导细胞凋亡的作用更强。
- 于田田张帆路遥李红霞谢敏刘庆平卢腾秦建中迟彦
- 关键词：黑色素瘤A375细胞葡萄糖谷氨酰胺
- 2-脱氧葡萄糖增强顺铂对人黑色素瘤细胞杀伤作用及其机制
- 2016年
- 目的：探讨2-脱氧葡萄糖（2-deoxy-glucose,2-DG）和顺铂（cisplatin）药物组合对人黑色素瘤细胞凋亡的影响及其作用机制。方法：用MTT法检测细胞活力,Annexin-V/PI染色和流式细胞仪检测细胞凋亡。Western blotting检测相关蛋白表达。细胞内ATP含量用生物发光试剂盒检测。结果：不同浓度顺铂（5-25μmol/L）单药处理虽然能以剂量和时间依赖方式抑制A375细胞活力,但与2-DG（10 mmol/L）联合使用,顺铂处理浓度除5μmol/L外都显示增强对细胞活力的抑制作用。2-DG（10 mmol/L）单独处理并不诱导A375细胞出现明显死亡（〈10%）,顺铂（20μmol/L）单独作用导致50%左右的细胞死亡,而两者联合则导致大于80%的细胞死亡,与单独用药组比较差异显著（P〈0.01）。顺铂单药或与2-DG联合均诱导Caspase-3和PARP-1裂解,并抑制抗凋亡蛋白Mcl-1的表达。2-DG联合顺铂（20μmol/L）能明显抑制Ⅱ型己糖激酶表达,并且使细胞内ATP含量降低于对照组（6.3 vs 33.0μmol/mg）,与单药组比较差异显著（P〈0.01）。2-DG联合顺铂不诱导正常人黑色素细胞凋亡。此外该药物联合对另外三种人黑色素瘤细胞（SK-100,C8161和Mum-2C）也有增强杀伤的作用。结论：2-DG能特异地增强顺铂诱导人黑色素瘤细胞凋亡的敏感性,作用机制可能与下调抗凋亡蛋白Mcl-1表达,抑制肿瘤己糖激酶水平和ATP合成有关。
- 李红霞朱国方谢敏路遥薄俊霞刘庆平王若雨秦建中
- 关键词：黑色素瘤2-脱氧葡萄糖顺铂细胞凋亡三磷酸腺苷
- X射线照射对MRE11在鼻咽癌细胞株CNE1中表达的影响被引量：1
- 2014年
- 目的 研究X射线照射后肿瘤细胞中MRE11基因及其蛋白表达的规律,并探讨其与肿瘤放疗失败的相关性,为提高肿瘤放射治疗疗效开辟新途径,提供新的靶点。方法 选取人鼻咽癌CNE1细胞株进行体外培养及X线照射。按单次照射0 Gy、2 Gy、4 Gy、6 Gy、8 Gy剂量分组,照射后4 h收集,利用RT-PCR技术检测MRE11 m RNA的表达;CNE1细胞株单次照射4 Gy于0 h、1.5 h、4 h、6 h、8 h、12 h、24 h时间点收集固定,利用免疫荧光技术检测MRE11蛋白的表达,并采用Image-Pro Plus 5.0软件分析测定各组荧光的平均光密度值(m OD)。结果 RT-PCR检测CNE1细胞株分别经0 Gy、2 Gy、4 Gy、6 Gy、8 Gy X线照射后4 h,各组之间MRE11 m RNA表达无统计学差异。免疫荧光技术检测CNE1细胞株经4 Gy X线照射后0 h、1.5 h、4 h、6 h、8 h、12 h、24 h时间点MRE11蛋白的表达,荧光强度先增强后减弱,4 h荧光强度最强。结论 CNE1细胞株MRE11 m RNA的表达与X线照射剂量递增无相关性。但CNE1细胞株经X线照射后MRE11蛋白的表达随时间的延长先增强后减弱,且在照射4 h表达最强,24 h后恢复到未照射水平。
- 王靖淞王慧谢敏王若雨
- 关键词：X线照射CNE1细胞
- 二甲双胍联合2-脱氧葡萄糖诱导人鼻咽癌细胞凋亡与PECAM-1/AKT信号通路相关性的研究
- 王若雨谢敏
- 二甲双胍调控AKT/MDR-1增强人结肠癌细胞HT-29对5-FU药物敏感性机制探讨被引量：4
- 2015年
- 目的:探究二甲双胍增强化疗药物5-氟尿嘧啶(5-FU)对人结肠癌细胞株HT-29细胞毒的相关机制。方法:体外培养人结肠癌细胞株HT-29,以5-FU联合或不联合二甲双胍干预细胞,MTT法检测细胞增殖情况;流式细胞仪检测细胞凋亡;Lipofectmin 2000转染AKT质粒;RT-PCR法检测AKT、MDR-1核酸表达;Western Blot法检测AKT、p-AKT、MDR-1蛋白表达。结果:二甲双胍能够增强5-FU对HT-29细胞增殖的抑制作用,单用5-FU与5-FU联合二甲双胍干预的细胞早期及晚期凋亡率分别为(50.12±5.96)%和(78.00±3.39)%,差异具有统计学意义(P<0.05)。二甲双胍可以在核酸及蛋白的水平上下调AKT、pAKT及MDR-1水平;过表达AKT单独5-FU处理较空白质粒组凋亡率降低(19.72±2.23)%,过表达联合用药组凋亡率较空白质粒组降低(20.30±3.15)%,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:二甲双胍通过调节AKT/MDR-1增强人结肠癌细胞HT-29对5-FU的药物敏感性。
- 孙英明谢敏孙丽娟朱国方王若雨刘庆平秦建中
- 关键词：结直肠癌二甲双胍AKTMDR-1
- 3D培养人工皮肤组织黑色素瘤模型建立及评价
- 2018年
- 目的建立体外人工皮肤组织黑色素瘤模型,为研究黑色素肿瘤侵袭和转移的机制及药物筛选奠定基础。方法采用3D培养技术,制备体外人工皮肤组织黑色素瘤C8161、A375模型。应用不同浓度血清(0.5%、5%)优化模型的最优培养条件。HE和免疫荧光观察该模型基底膜形成情况,检测黑色素瘤细胞C8161、A375侵袭能力。应用单层细胞培养检测细胞生长速度和细胞分泌E-钙黏素情况。采用Transwell实验检测不同黑色素瘤细胞侵袭能力。结果体外人工皮肤组织肿瘤模型建立成功,血清浓度0.5%为最佳3D培养条件。构建的人工皮肤组织肿瘤模型形成的基底膜良好,黑色素瘤细胞在此模型中发生侵袭和转移,且C8161侵袭能力强于A375细胞。侵袭力较弱的A375细胞增殖速度高于侵袭力较强的C8161细胞。C8161和A375细胞均不产生E-钙黏素。结论成功建立体外人工皮肤组织肿瘤模型,血清浓度为0.5%为最佳3D培养条件;黑色素瘤细胞的侵袭与生长速度并无直接关系,且失去E-钙黏素表达能力并不是导致肿瘤细胞侵袭的必要条件。
- 谢敏李明英张帆刘庆平秦建中迟彦
- 关键词：恶性黑色素瘤
- IGF-1R抑制剂OSI-906抑制IGF介导的鼻咽癌细胞的增殖和放疗抵抗
- 赵明王喆王福光鞠再双李贺明谢敏王若雨
- 2-D-脱氧葡萄糖对二甲双胍抑制人结肠癌细胞作用的影响及机制被引量：1
- 2019年
- 目的观察己糖激酶抑制剂2-D-脱氧葡萄糖(2-DG)对降糖药二甲双胍抑制人结肠癌细胞作用的影响,并探讨其机制。方法将不同浓度的2-DG、二甲双胍单药或联合作用于人结肠癌HT-29细胞,采用台盼蓝染色法测算细胞死亡率观察细胞活力,MTT掺入法测算细胞存活率观察细胞增殖能力,流式细胞术以Annexin V/PI双染色法测算细胞凋亡率,免疫印迹法检测细胞中的蛋白激酶B(AKT)/雷帕霉素靶蛋白(TOR)信号通路相关蛋白[AKT、磷酸化AKT(p-AKT)、核糖体p70S6激酶(p70S6K)、磷酸化核糖体p70S6激酶(p-p70S6K)]、自噬相关蛋白p62。结果不同浓度2-DG(1、5、10 mmol/L)和二甲双胍(5、10 mmol/L)联合处理24 h后,HT-29细胞死亡率均高于单药处理细胞(P均<0. 05);在2-DG、二甲双胍均为10 mmol/L时,HT-29细胞死亡率最高(P均<0. 01)。以10mmol/L 2-DG与不同浓度的二甲双胍(0、1、5、10、15、20 mmol/L)联合处理48 h,在二甲双胍浓度≥5 mmol/L后HT-29细胞存活率低于单药处理的细胞(P均<0. 05),10 mmol/L时HT-29细胞存活率最低(P均<0. 01),20 mmmol/L时HT-29细胞存活率未继续明显降低。不同浓度2-DG(5、10 mmol/L)和10 mmol/L二甲双胍联合处理24 h,仅10 mmol/L 2-DG与二甲双胍处理时HT-29细胞凋亡率高于单药处理细胞(P均<0. 05),且细胞中p-AKT、pp70S6K、p62蛋白相对表达量低于单药处理细胞(P均<0. 05)。结论 2-DG能增强二甲双胍抑制人结肠癌HT-29细胞活力、增殖和诱导细胞凋亡的作用,以10 mmol/L 2-DG时增强作用最明显;其作用机制可能与两者协同抑制AKT/mTOR信号通路及细胞自噬有关。
- 谢敏李红霞顾馨仪郝舒捷王仁军王仁军刘庆平秦建中
- 关键词：二甲双胍细胞自噬
